尿微量蛋白分析对原发性高血压早期肾损害的诊断价值

目的探讨尿微量蛋白分析对原发性高血压早期肾损害的诊断价值。方法原发性高血压患者80例,采用免疫透射比浊法测定尿微量清蛋白(MALB)和血、尿β2-微球蛋白(β2-MG),并测定尿常规、血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)进行对比分析,尿MALB阳性及血尿任何一项指标高于正常值为联检阳性。结果单项指标阳性率:血β2-MG 72.5%,尿β2-MG 68.75%,MALB52.25%;多项指标联检阳性85.00%,均明显高于尿常规蛋白阳性15.00%、BUN和Cr 32.50%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论尿MALB,血、尿β2-MG在高血压早期肾损害时早于BUN和Cr出现,是诊断早期肾损害的敏感指标。

军事应激对军人部分生化生理指标的影响

目的选择与应激相关的生化生理指标,研究并探讨军事应激对军人部分生化生理指标的影响。方法随机选取参加阅兵军事人员60例,采用酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测阅兵前、后军人免疫相关指标和氧化还原过程相关指标的血清水平,并对军事心理应激引起的标志物显著性改变的机制进行探讨。结果军人血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、促肾上腺皮质激素释放因子、前列环素、胃泌素和超氧化物歧化酶水平显著升高。结论军事应激状态对机体免疫系统、神经内分泌系统和氧化还原过程具有重要的影响,肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、促肾上腺皮质激素释放因子、前列环素、胃泌素和超氧化物歧化酶等可作为观察机体应激状态的生化标志物。

阻塞性睡眠呼吸暂停综合征相关生物学标志物的研究

目的研究并鉴定阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)相关的新型生物学标志物。方法选择与代谢紊乱相关的两个生物学标志物:血管紧张素II和胰岛素,以及与炎症反应相关的两个生物学标志物:抵抗素和新蝶呤作为研究对象。采用电化学发光方法检测胰岛素,酶联免疫吸附(ELISA)法检测另外3个因子在OSAS患者和非OSAS患者对照血清中的水平。同时还测定了OSAS患者经手术治疗前后这4个因子血清水平的变化情况。结果与对照组相比,OSAS患者的抵抗素、胰岛素和新蝶呤的血清水平明显升高。OSAS患者经手术治疗后,血管紧张素II、胰岛素、抵抗素和新蝶呤的血清水平较手术前明显下降。结论本研究鉴定的4个OSAS相关生物学标志物可能对于理解OSAS发生、发展的精确机制具有一定意义。

霍乱毒素及大肠杆菌不耐热肠毒素生物学特性的研究

霍乱毒素(cholera toxin,CT)和大肠杆菌不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT)随着传染病和流行病学的发展得以关注,近年由于疫苗的进展再次得到重视,它们是细菌蛋白毒素家族成员,通过G蛋白的ADP-核糖基化而发挥其毒性。两者关系密切,氨基酸序列同源性约80％,均包括一个240个残基的A链和5个103个残基的B亚单位,即AB_5六聚体,B五聚体与GM_1神经节苷脂受体结合,决定毒素对宿主细胞的选择亲和性,A亚单位有使上皮细胞G蛋白Gsα的一个精氨酸残基ADP-核糖基化的活性,两者具有较强的粘膜免疫原性和粘膜免疫佐剂效应。了解其结构、粘膜免疫机制,对于粘膜疫苗的发展有重要指导意义。

原发性高血压与内皮素升高关系的研究

目的:研究原发性高血压患者血内皮素浓度的变化,探讨高血压与内皮素升高的关系。方法:用放射免疫法测定40例原发性高血压血内皮素含量,并与40例健康人(对照组)进行对照分析。结果:高血压组内皮素升高,与对照组比较差异具有非常显著性意义(P<0.001),并与血压升高程度呈正相关,高血压组Ⅱ、Ⅲ级与Ⅰ级比较差异具有非常显著性的意义(P<0.01),Ⅲ级与Ⅱ级比较差异具有非常显著性的意义(P<0.01)。原发性高血压并发左心室肥厚(LVH)、心力衰竭组与单纯高血压组内皮素含量比较具有非常显著性的意义(P<0.01,P<0.001);并发心力衰竭组与并发LVH组内皮素含量比较差异具有非常显著性的意义(P<0.01)。结论:内皮素是高血压病理发展过程中的重要参与因素,可作为反映高血压病变程度和动态变化的一项指标,有一定的参考价值。

产毒性大肠杆菌不耐热和耐热肠毒素基因克隆及序列分析

目的:用基因工程方法克隆产毒性大肠杆菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)和耐热肠毒素(ST)基因,以制备检测ETEC的单克隆抗体。方法:利用PCR技术扩增LT和ST基因并将它们插入T-easy载体中,采用全自动测序仪进行核苷酸序列分析。结果:DNA序列分析表明,克隆的ETEC-LT-B DNA序列与GenBank公布序列比较在17、69、101、102位点有碱基变异,同源性98·9%;ETEC-STDNA序列与GenBank公布序列一致。结论:成功获得正确的ETEC的LT和ST基因,为其重组表达及后续研究奠定了实验基础。

乙型肝炎患者HBV DNA定量与血清标志物的关系分析

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物与HBV DNA定量之间的关系。方法分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(FQ-PCR)对391例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性血清进行检测,分析检出率及相关性。结果391例HBsAg阳性血清共检出7种模式,以HBV DNA含量大于5×102copy/mL为阳性。HBsAg阳性(+)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)(+)、乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)(+)模式的阳性检出率较高,为96.9%,HBV DNA含量也较高,其中大于107copy/mL的血清为53.8%。HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)模式中阳性检出率为25.3%,171例(74.7%)HBV DNA含量小于5×102copy/mL。HBsAg(+)、抗-HBc(+)模式中阳性检出率为65.4%。结论HBsAg和HBV DNA联合检测,更能反映乙型肝炎患者HBV感染、传染性及体内复制情况。

16S rRNA基因克隆文库用于菌群分析的效能研究和评价

目的建立16S rRNA基因克隆文库进行菌群相对定量的方法,评价其对细菌的检测效率以及对混合菌群中低含量细菌的分析能力。方法取脆弱类杆菌等9种细菌以相同及级差比例制备细菌悬液,分别用或不用变溶菌素处理后,用试剂盒提取核酸,16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增、纯化、连接、克隆和测序,建立16S rRNA基因克隆文库,将序列与数据库进行比对分析。结果相同比例制备的菌悬液,加或不加变溶菌素提取的核酸,掺入的9种细菌均可检出。级差比例制备的菌悬液,加变溶菌素提取核酸,掺入的9种细菌均可检出;不加变溶菌素提取核酸,数量少难裂解的革兰阳性菌双歧杆菌未能检出。混合菌悬液中各种细菌的比例与文库反映的各种细菌的比例有数量对应关系,但不是线性对应关系。结论16S rRNA基因序列分析是一种较好的细菌菌群分析方法,它可以同时检出多种细菌,并能对混合细菌标本进行菌群相对定量,反映菌群中各种细菌的丰度,但不能准确定量菌群中各种细菌的数量。

中国人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的基因克隆及序列分析

目的克隆人幽门螺杆菌 (helicobacter pylori,Hp)尿素酶 B基因 (ure B) ,并分析其核苷酸序列的特性。方法用PCR技术从临床分离的 Hp菌株基因组中扩增出 ure B基因 ,将其克隆至 p HP质粒上进行序列分析。结果克隆得到的 ure B基因长度为 1713bp,其核苷酸序列与 Gen Bank公布的序列有 6 1个碱基存在差异 ,同源为 96 .44 % ,推定的氨基酸序列同源性为99.6 5 %。结论我们所克隆的 ure B基因可用于 Hp保护性抗原 Ure

幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位基因工程菌的发酵

目的 研究幽门螺杆菌热休克蛋白Ａ亚单位（ＨｓｐＡ）基因工程菌的发酵工艺。方法 通过不同培 养基、不同葡萄糖浓度、不同溶氧条件、补料与非补料对幽门螺杆菌热休克蛋白Ａ亚单位基因工程菌的菌体生长与 外源蛋白表达量的影响的比较，确定其较为合适的培养条件。结果 多批实验证明，菌体单产可达４２ｇ／Ｌ，目的蛋 白的表达率为３８．５％。结论 此发酵工艺可以提高ＨｓｐＡ基因工程菌菌体的得率和目的蛋白的表达。

北京石景山地区人乳头瘤病毒(HPV)感染的分子流行病学研究

目的探讨北京石景山地区妇科疾病与人乳头瘤病毒感染(HPV)的关系,建立本地区不同妇科疾病和不同年龄段妇女HPV感染的流行病学资料库。方法应用反向点杂交技术分别对疾病组1 012例患者标本和正常组500例标本进行HPV检测,所得数据用SPSS13.0统计软件进行分析。结果疾病组1 012例标本中,阳性标本351例,感染率为34.7%;其中双重感染51例,占阳性标本的14.5%;多重感染22例,占阳性标本的6.3%;而高危感染226例,感染率为22.3%,占阳性标本的64.4%;单纯HPV16亚型感染140例,占所有阳性标本的39.9%。正常组500例标本中,阳性标本93例,感染率为18.6%;高危型所占比例为21.6%。不同年龄段、不同性生活史和不同妇科疾病的HPV感染检出率都有显著性差异。结论 HPV DNA的基因分型可为宫颈癌及女性生殖道肿瘤的病因学和癌前预报提供重要的参考价值,为高风险人群的早预防、早诊断、早治疗提供依据。

从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位

目的 建立一种有效的从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位HspA的方法。方法 重组基因工程大肠杆菌发酵后 ,表达的Hp的HspA包涵体经洗涤、变性、复性 ,采用QSepharoseHighPerformance阴离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析分离纯化。使用SDS PAGE和HPLC检测纯度 ,选用ELISA和动物实验对纯化蛋白的免疫学活性和生物学活性进行鉴定。结果 Hp的HspA包涵体经洗涤和溶解后 ,Hp的HspA的纯度 >60 %。包涵体溶解液经阴离子交换层析和凝胶过滤层析后纯度超过 95 %。Hp的HspA纯品经检测具有良好的免疫学活性和生物学活性。结论 本研究建立的分离纯化方法可从包涵体中获得高纯度的重组HspA蛋白 。

急性乙型肝炎患者FoxP3v^+调节性T细胞数量与功能的随访

目的:观察急性HBV感染患者外周血FoxP3+CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的数量和功能的变化特点。方法:采集15例急性乙型肝炎(AHB)患者急性期、恢复早期及痊愈后外周血、15例健康人的外周血,分离PBMC,通过MACS免疫磁珠分选CD4+T细胞和Treg,应用实时荧光定量RT-PCR比较AHB患者不同疾病发展阶段(急性期,恢复早期,痊愈后)CD4+T细胞的FoxP3(Forkhead/winged helix tran-scription factor)mRNA表达量的差异,应用3[H]掺入法检测Treg抑制CD4+CD25-T细胞增殖的能力的差异。所有病例及对照均ELISA检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HB-cAb,实时荧光定量RT-PCR检测血清HBV DNA载量,同时进行肝功能检测。结果:AHB患者CD4+T细胞表达FoxP3mRNA的量在急性期稍低于健康对照,在疾病恢复早期明显高于健康对照(t=3.44,P<0.01),痊愈后恢复至正常。Treg抑制CD4+CD25-T细胞增殖的能力在急性期显著低于恢复早期(t=-5.30,P<0.01)和痊愈后(t=-3.20,P<0.05)。结论:Treg在AHB患者急性期数量减少,功能减弱,在恢复早期数量增加,功能增强,提示Treg可能在急性肝炎的不同发病阶段中通过调节细胞免疫反应影响乙肝病毒清除。

抗凝剂浓度对Advia60血细胞计数仪相关结果的影响

目的:了解EDTA-K2浓度对Advia60计数仪测定指血结果的影响。方法:采集120例门诊患者的手指血分别加入到含有EDTA-K2的抗凝管中,形成不同浓度的抗凝血,用Advia60血细胞分析仪进行检测。结果:以符合国际抗凝标准的A组为对照组,结果显示三组的WBC结果差异有显著性(P<0.01),PLT差异亦有显著性。RBC、HGB、MCV、MPV测定结果差异无显著性(P>0.05)。结论:EDTA-K2影响计数结果,应严格控制好抗凝剂的浓度。

AT细胞对电离辐射敏感原因的探讨

AT细胞具有对电离辐射和拟辐射物质的高敏感性以及DNA合成抑制抗性,存在复杂的基因异质性。本文从AT细胞的遗传学互补性分析、DNA损伤修复缺陷以及DNA拓扑酶学研究三方面对AT细胞辐射敏感性的分子机理等进行了讨论,认为DNA双链路复缺陷与重接忠实性下降可能足AT细胞电离辐射敏感性的原因。

B型肉毒毒素重链C端基因的克隆与表达

目的:扩增B型肉毒毒素重链C端基因并将其在大肠杆菌中表达。方法:首先克隆B型肉毒毒素重链C端片段(BoNTB/Hc),经IPTG诱导,在大肠杆菌中进行天然序列的表达。构建原核表达载体pET32/Hc后进行融合蛋白的表达。对5′端引物进行修饰,最终进行N端修饰蛋白的表达。结果:扩增得到的BoNTB/Hc与已知序列同源性达99%,未得到天然序列的表达,获得了融合蛋白和N端修饰蛋白的表达。Western blot鉴定结果表明,融合蛋白和N端修饰蛋白都可以和特异性抗体发生反应。结论:获得了B型肉毒毒素重链C端基因的表达,为肉毒毒素相关研究奠定了基础。

人β干扰素基因定点突变及在sf9细胞中的表达和活性研究

目的研究人β干扰素突变体在杆状表达系统中的高效表达,为新型基因药物的研制提供可行性。方法采用PCR定点突变技术构建人干扰素bS17突变基因,克隆到pFastBacTMHTB上,获得重组转移载体pFastBac-IFNβS17。将pFast-Bac-IFNβS17转化入DH10BacTM细胞,得到Bacmid-IFNβS17。将Bacmid-IFNβS17转染sf9细胞,筛选到重组病毒Bac-IFNβS17。将Bac-IFNβS17感染sf9细胞进行表达。结果 Southern-blot证明IFNβS17已插入重组病毒中(3.9kb左右的杂交带);SDS-PAGE、蛋白质印迹证明IFNβS17在sf9细胞中得到了表达。实验表明sf9细胞中120h的表达产物干扰素活性最高,为2.62×105IU/mL。结论突变基因在sf9细胞得到了高效表达,且表达的重组蛋白具有IFN的生物活性。

产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素和耐热肠毒素基因克隆及序列分析

目的获取产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素和耐热肠毒素基因并克隆到T-easy载体中进行核苷酸序列分析。方法利用PCR技术扩增不耐热肠毒素和耐热肠毒素基因并将它们插入T-easy载体中通过4种荧光染料标记，激光检测方法分析核苷酸序列。结果DNA序列分析表明：克隆的ETEC-LT-BDNA序列与GenBankJ）布序列比较在17，69，101，102位点有碱基变异，同源性98．9％。ETEC-STDNA序列与GenBank公布序列一致。结论本研究获得了正确的产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素和耐热肠毒素基因，为其重组表达及后续研究奠定了良好实验基础。