粉尘螨HSP16-1原核表达体系构建与温度应激响应功能鉴定

目的建立原核表达体系,在蛋白水平确认粉尘螨HSP16-1蛋白的温度应激响应功能。方法基于前期RNA-seq获得的粉尘螨HSP16-1基因序列,设计特异性引物,PCR扩增克隆测序;利用生物信息学软件,分析理化性质,预测亚细胞定位和三维结构;通过构建p ET32a/HSP16-1原核表达质粒,转化大肠杆菌感受态细胞BL21;采用1 mmol/L IPTG在16、28和37℃三个温度诱导HSP16-1重组蛋白表达,分别在2、4、6和8 h取样进行SDS-PAGE分析;绘制热胁迫和冷胁迫下重组菌与空载菌生长曲线。结果测序获得粉尘螨HSP16-1完整CDS为462 bp,编码153个氨基酸;BLAST比对显示粉尘螨与近缘物种屋尘螨核苷酸和氨基酸序列相似度分别为84.63%和87.58%;亚细胞定位在细胞核;保守区预测含有α晶体HSP23超家族保守区。菌落PCR及双酶切鉴定p ET32a/HSP16-1重组质粒构建成功。SDS-PAGE分析显示,HSP16-1蛋白被成功诱导表达,37℃诱导6 h是最佳诱导条件。细菌生长曲线显示,p ET32a/HSP16-1重组菌在热胁迫下的生长均优于p ET32a空载菌,而冷胁迫下则相反,空载菌生长要优于重组菌。结论粉尘螨HSP16-1蛋白仅在热胁迫下发挥应激响应功能,而在冷胁迫未表现出相似的功能。

儿童真菌感染及耐药性分析

目的了解本院儿童真菌感染状况、菌种分布及耐药情况。方法回顾分析2011年-2014年临床确诊为深部真菌感染的280例住院患儿的临床资料,探讨其真菌感染的临床特点、病原学分布及其药物敏感性等。结果儿童真菌感染标本主要来源于咽拭子标本,且白假丝酵母菌的分离率最高(60.00%),其次为光滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌和近平滑假丝酵母菌。药敏结果显示,耐药率较低的药物是两性霉素B(1.59%)和5-氟胞嘧啶(3.19%),耐药率较高的药物是氟康唑(12.35%)和伊曲康唑(15.94%)。结论儿童深部真菌感染多为假丝酵母菌,且以白假丝酵母菌的检出率最高;Am B、5-FC均有较高的抗真菌活性。应加强对临床真菌感染与耐药性监测,指导临床合理使用抗真菌药物。