白藜芦醇调控癫痫持续状态大鼠海马内源性巯醇抗氧化剂(酶)的作用

目的探讨白藜芦醇(Res)在氯化锂联合重复低剂量匹罗卡品诱导癫痫持续状态大鼠模型中的抗氧化作用及其机制。方法 54只SD大鼠随机分为3组:对照组、癫痫模型组和Res治疗组,采用氯化锂联合重复低剂量匹罗卡品腹腔注射制备癫痫持续状态大鼠模型,Res治疗组同时给予白藜芦醇预防性治疗。对大鼠按痫性分级标准进行行为学观测;采用化学比色法检测痫性发作90min后大鼠海马超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和谷胱甘肽还原酶(GR)含量变化;采用免疫组织化学和免疫印迹法检测痫性发作90min后大鼠海马中凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3和Bax的表达变化。结果癫痫大鼠海马SOD、GSH、GSH-PX和GR的含量较对照组显著减少,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Bcl-2阳性细胞数量减少,而Caspase-3和Bax表达显著上调,Caspase-3和Bax阳性细胞数量增多。白藜芦醇预防性治疗后,大鼠痫性发作潜伏期较模型组显著延长;大脑海马中巯醇抗氧化剂(酶)SOD、GSH、GSH-PX和GR的含量明显上调;海马中抗凋亡蛋白Bcl-2表达量和Bcl-2阳性细胞数量均增加,同时促凋亡因子Caspase-3和Bax的表达被抑制,Caspase-3和Bax阳性细胞数量减少。结论白藜芦醇能通过上调癫痫模型大鼠海马内源性巯醇抗氧化剂(酶)SOD、GSH、GSH-PX和GR的含量,调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3和Bax的表达,对抗癫痫持续状态诱导的神经细胞氧化损伤,发挥神经保护作用。

Ⅱ型糖尿病大鼠肝组织氧化应激与胰岛素抵抗的关系

目的建立2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,探讨T2DM胰岛素抵抗(IR)的分子机制.方法高脂、高胆固醇灌胃、糖水喂养(HFD)+腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建T2DM大鼠模型,检测血清糖化血清蛋白(FMN)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCHOL)、超敏C反应蛋白(CRP)、血糖(FGLU)、胰岛素(INS)、C肽(C-P)的含量和肝组织内一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽还原酶(GR)、总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)的含量.结果STZ+HFD组FMN、TG、TCHOL、CRP、C-P、INS和IRI明显高于HFD组和对照组(P<0.05),HFD组又明显高于对照组(P<0.05);STZ+HD的TNOS、INOS、MDA和GR的含量明显高于对照组(P<0.05),而NO明显低于对照组(P<0.05).结论HFD+STZ能通过调控肝组织内源性巯醇抗氧化物(酶)、NO、NOS和iNOS的含量,诱发IR和T2DM.

天麻素调控癫痫大鼠大脑皮质凋亡因子的作用研究

目的:探讨天麻素对氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫大鼠模型中大脑皮质神经元凋亡因子表达的作用及其机制,为临床应用天麻素治疗癫痫提供分子生物学依据。方法:80只雄性SD大鼠随机分为5组:即对照组、模型组、60 mg/kg天麻素预治疗组、120 mg/kg天麻素预治疗组和180 mg/kg天麻素预治疗组。采用氯化锂-匹罗卡品联合制备癫痫模型,治疗组给予不同剂量的天麻素预处理,模型组给以相同剂量的生理盐水。按Racine分级标准观察行为学变化,记录大发作潜伏期时间,于注射匹罗卡品后2 h给予安定终止;3 d后取材,免疫组织化学染色、免疫荧光染色和Western Blot检测凋亡相关蛋白表达变化。结果:天麻素治疗组较模型组,癫痫发作潜伏期延长,持续时间明显减少,程度减轻,死亡率显著降低,Bcl-2表达增加,Caspase-3显著降低。结论:天麻素可减少癫痫模型大鼠发作持续时间和程度,降低癫痫大鼠死亡率;天麻素通过增加癫痫大鼠大脑皮质Bcl-2和降低Caspase-3的表达而抑制凋亡,发挥脑保护作用。

人参皂苷Rg1调控癫痫大鼠海马Bcl-2和Bax的表达

目的：本研究通过建立氯化锂一匹罗卡品诱导大鼠癫痫模型，用人参皂苷Rgl（Rgl）进行干预，检测癫痫大鼠海马中的Bax、Bcl-2的表达及Rgl对其的调控作用，初步探讨Rgl对癫痫可能的神经保护机制。方法：健康成年雄性SD大鼠随机分为5组，即空白对照组，模型组，低、中、高剂量Rgl治疗组，每组20只，观察行为学变化，并于点燃后72h取脑，分别通过免疫荧光显色、免疫印迹和RT-PCR检测Bax和Bcl-2的蛋白和RNA表达情况。结果：空白组未出现癫痫发作及死亡，不同剂量的Rgl预处理组与模型组相比，大发作潜伏期时间延长。匹罗卡品诱导大鼠癫痫发作后，海马神经元的胞质内凋亡因子Bax免疫阳性反应增强，蛋白产物表达增多，抗凋亡因子Bcl-2表达减少。Rgl预处理组促凋亡因子Bax及其mRNA表达减少，抗凋亡因子Bcl-2及其mRNA表达增加。结论：癫痫发作后可引起凋亡因子的表达变化，而人参皂苷Rgl可以通过下调促凋亡因子Bax的表达，上调抗凋亡因子Bcl-2的表达，从而发挥抗癫痫的神经保护作用。

人参皂苷Rg1抑制癫痫大鼠大脑胼胝体区小胶质细胞激活和炎性因子表达的作用

目的:探讨人参皂苷Rg1(Ginsenoside Rg1,Rg1)抑制氯化锂-匹罗卡品联合诱导的癫痫大鼠模型大脑胼胝体区小胶质细胞(microglia,MG)的激活和炎性因子的表达作用,为临床应用Rg1治疗癫痫提供理论依据。方法:80只健康雄性SD大鼠随机分为4组:即空白对照组、模型组、Rg1预治疗组、卡马西平(carbamazepine,CBZ)预治疗组,每组20只;采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射制备癫痫大鼠模型,治疗组提前进行药物预处理,模型组给予相同剂量的生理盐水,记录行为学发作情况,注射匹罗卡品后2 h给予安定终止,3 d后取材;免疫荧光组织化学染色和Western Blot检测大脑胼胝体区精氨酸酶1(arginase-1,Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(induced nitric oxide synthase,iN OS)和白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的蛋白表达变化。结果:与模型组相比,Rg1预治疗组明显缩短癫痫大鼠的大发作时间;模型组与空白对照组比较,大脑胼胝体区MG明显激活,胞体变圆,突起减少,呈"M1型"阿米巴样状态;Rg1预治疗组较模型组相比,MG的激活明显降低,Arg-1蛋白的表达明显上调,iN OS和IL-1β等炎性因子的表达显著下调。结论:Rg1增加癫痫大鼠大脑胼胝体区Arg-1蛋白的表达,降低iN OS和IL-1β等炎性因子的表达,抑制MG的激活和极化,减轻炎症因子的表达,缩短癫痫大鼠大发作时间。

人参皂苷Rg1对心肌细胞的影响及其信号传导机制

目的:从细胞和分子层面探讨人参皂苷Rg1(G-Rg1)对心肌细胞的影响及其信号传导机制。方法:体外培养大鼠H9c2心肌细胞,按实验要求随机分13组,每组5个平行孔,分别为空白对照组,单纯缺血缺氧2 h、6 h、12 h、24 h、48 h组,G-Rg1 5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L组,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的特异性抑制剂(YC-1)组,YC-1+G-Rg1组,蛋白激酶B(Akt)蛋白的磷酸化特异性抑制剂(Wortmannin)组,Wortmannin+G-Rg1组。检测G-Rg1、缺血缺氧以及YC-1对心肌细胞活力及心肌细胞损伤的影响。同时用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌细胞内HIF-1α、葡萄糖载体蛋白-1(GLUT-1)和血红素氧合酶-1(HO-1)的信使核糖核酸mR NA表达水平变化。用蛋白质免疫印迹法检测HIF-1α、GLUT-1和HO-1、活化转录因子-6(ATF-6)、抑制CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和Akt等细胞信号通路蛋白表达水平变化。结果:缺血缺氧时间与心肌细胞活力呈负相关(r=-0.8580,P<0.05),与乳酸脱氢酶溢出率呈正相关(r=0.9201,P<0.05)。G-Rg1 10μmol/L组较单纯缺血缺氧24 h组细胞活力明显回升(87.8%、62.6%,P<0.05),细胞培养上清乳酸脱氢酶(LDH)含量明显减少(25.0%、74.8%,P<0.05),且上调了HIF-1α、GLUT-1、HO-1的mR NA表达水平(P<0.05)。蛋白质免疫印迹法分析显示:YC-1+G-Rg1组较G-Rg1组,心肌细胞活力下降(68.0%,87.8%,P<0.05),细胞培养上清LDH含量增加(56.4%,25.0%,P<0.05),同时YC-1拮抗了G-Rg1对HIF-1α、GLUT-1、HO-1、ATF-6和CHOP的蛋白表达水平的调控(P<0.05);Wortmannin可拮抗G-Rg1对HIF-1α和CHOP的蛋白表达水平的调控(P<0.05),及对Akt两个磷酸化位点的激活作用(P<0.05)。结论:心肌细胞损伤程度与缺血缺氧时间有关;G-Rg1对心肌细胞具有保护作用,其机制激活HIF-1α及其下游因子的表达并抑制了内质网应激效应,可能与G-Rg1激活Akt有关。

枫叶黄酮对老年痴呆动物模型的抗氧化作用及分子机制

目的:构建β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)联合D-半乳糖(D-gal)致痴呆模型,探讨枫叶黄酮抗氧化作用的分子机制。方法:36只成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为3组:假手术组、模型组、治疗组。采用侧脑室注射β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)联合腹腔注射D半乳糖(D-gal)构建SD大鼠痴呆模型后经枫叶黄酮治疗,采用Morris水迷宫实验(MWM)检测大鼠学习记忆能力;用化学比色法检测大脑皮质丙二醛(MDA)和内源性巯醇抗氧化物(酶):谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、谷胱甘肽过氧化酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量;免疫印迹法检测大脑皮质中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族相关蛋白:细胞外信号调节蛋白激酶(extra-cellular signal-regulated protein kinase,ERK)、p38、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的磷酸化水平。结果:模型组与假手术组比较:大鼠的逃避潜伏期明显延长(P<0.05),在第Ш象限逗留的时间明显减少(P<0.05),跨越平台次数明显减少(P<0.05);大脑皮质MDA含量增加(P<0.05),GR、GSH-PX的含量降低(P<0.05);p38、JNK磷酸化增强,ERK磷酸化水平降低。而枫叶黄酮治疗后:大鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),在第Ⅲ象限逗留的时间明显增加(P<0.05),跨越平台次数明显增加(P<0.05);大脑皮质MDA含量降低(P<0.05),GR、GSH-PX的含量升高(P<0.05);p38、JNK磷酸化被抑制,ERK的磷酸化增加。结论:枫叶黄酮能改善学习记忆能力,对抗大鼠神经系统衰老。其作用可能是通过上调痴呆模型大鼠大脑皮质内源性巯醇抗氧化物(酶)GR和GSH-PX的含量,抑制p38、JNK磷酸化并增强ERK磷酸化而实现的。

匹罗卡品诱导癫痫大鼠模型小胶质细胞的激活与极化

目的探讨癫痫大鼠模型发作不同时间点,小胶质细胞的激活和极化情况.方法 80只雄性SD大鼠随机分为5组:即对照组、癫痫发作后1 d、3 d、7 d、14 d模型组.采用氯化锂-匹罗卡品联合制备癫痫模型,对照组给予相同剂量的生理盐水,发作相应时间点取材,免疫荧光染色观察小胶质细胞激活的形态学变化,免疫组织化学染色检测i NOS和Arg-1的表达变化.结果癫痫发作后不同时间点均有小胶质细胞的激活,细胞突触减少,胞体变圆,大部分呈阿米巴样;与对照组相比,模型组在癫痫发作后不同时间,i NOS的表达均有升高,Arg-1的表达均下降,3 d最为明显,差异有统计学意义(P<0.05).结论在匹罗卡品诱导的癫痫大鼠模型中,小胶质细胞在癫痫发作后不同时间出现明显激活和极化.

白藜芦醇对慢性阻塞性肺疾病大鼠模型的保护作用

目的探讨白藜芦醇对丙烯醛雾化吸入构建的慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型肺组织的抗炎抗氧化作用。方法用丙烯醛雾化吸入构建COPD大鼠模型。不同浓度的白藜芦醇(5、15、45 mg/kg)预处理COPD大鼠模型,逆转录PCR法检测不同浓度白藜芦醇对COPD大鼠模型肺组织炎性蛋白酶诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA表达影响,用化学比色法检测不同浓度白藜芦醇干预下COPD大鼠模型肺组织中谷胱甘肽(GSH)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量变化。结果不同浓度的白藜芦醇显著抑制COPD大鼠模型肺组织一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA水平,上调大鼠肺组织中内源性巯醇抗氧化物还原型谷胱甘肽(GSH)水平,减少丙二醛(MDA)含量。结论白藜芦醇通过降低促炎因子水平、上调内源性巯醇抗氧化物含量,从而对COPD模型大鼠肺组织发挥抗炎、抗氧化作用。

双掌长肌1例

在解剖学教学过程中，在1例中年男性尸体标本上见其右侧前臂双掌长肌变异（图1）。现报道如下：

17β-雌二醇对高同型半胱氨酸诱导人成骨肉瘤MG63细胞损伤的保护作用及机制

目的探讨17β-雌二醇(17β-E2)对高同型半胱氨酸(HHcy)诱导人成骨肉瘤MG63细胞损伤的保护作用及其分子机制。方法体外培养的人成骨肉瘤MG63细胞经17β-E2干预后,再以不同浓度和(或)不同时间的HHcy处理后,采用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸盐(H2DCFDA)探针检测细胞内活性氧(ROS)水平变化;通过Hoechst 33342/碘化丙啶(PI)核双染法观察计数凋亡和坏死细胞;采用免疫印迹法检测促凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的表达变化。结果 1.17β-E2可明显抑制HHcy诱导的MG63细胞内ROS的增加,抑制效果随剂量和时间而增强;2.17β-E2可明显下调促凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的表达,对抗HHcy诱导的MG63细胞的凋亡和(或)坏死。结论 17β-E2可通过抑制ROS的产生,下调凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的表达而增强MG63细胞抗HHcy所诱导的氧化损伤作用。

白藜芦醇抑制脂多糖诱导破骨前体细胞Raw264.7的激活

目的探讨白藜芦醇(Res)对脂多糖(LPS)诱导的破骨前体细胞Raw 264.7细胞系释放炎性细胞因子的抑制作用。方法采用LPS刺激Raw 264.7细胞构建炎症模型,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定细胞,采用MTT检测Res对Raw 264.7细胞的毒性影响,免疫荧光双标以及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测不同浓度Res(1μmol/L和5μmol/L)对细胞炎性因子:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)与细胞炎性蛋白酶:诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和环氧合酶-2(COX-2)、炎性信号蛋白核因子-κB(NF-κB)蛋白与mRNA的表达变化。结果不同浓度的Res(1μmol/L和5μmol/L)在翻译水平和转录水平上明显抑制了LPS诱导的细胞炎性蛋白酶i NOS和COX-2表达,同时了抑制细胞炎性因子IL-1β与炎性信号蛋白NF-κB的上调。结论 Res可能通过NF-κB调控LPS诱导的Raw 264.7细胞炎性细胞因子的释放进而抑制破骨前体细胞的激活,进而具有抗骨质疏松的作用。

线粒体脑肌病合并乳酸血症和卒中样发作的影像学表现

目的分析线粒体脑肌病患者的影像表现,以期为该病的诊断和临床治疗提供影像学依据.方法回顾性分析临床确诊的1例线粒体脑肌病患者的MRI表现,并结合文献报道,分析病变区血管影和基底节钙化.结果线粒体脑肌病合并乳酸血症和卒中样发作(mitochondrial encephalomyopathy with lactic acidosis and stroke,MELAS)好发于颞、枕、顶叶,表现为长T1、长T2信号,弥散像上呈高信号,ADC图上呈等及低信号,增强扫描无强化或脑回样强化,MRA上表现为病变区血管影增多,CT可表现为双侧基底节钙化.结论 MELAS的影像学表现具有一定特异性,但确诊仍需结合临床.

局部解剖学解剖操作课的教学实践

局部解剖学是综合阐述人体各个局部结构、器官特点及其毗邻关系的学科。医学具有的实践性特征，决定了实践性教学内容将在其中占有较重比例，加强实验教学，对提高学生的综合素质，培养学生的创新精神与实践能力具有重要作用，学习局部解剖学在条件许可的情况下必须进行实地解剖操作，这是提高教学质量的关键。在昆医解剖学教研室，很早以前就开设了局部解剖学的解剖操作课。

同型半胱氨酸对小鼠骨骼肌组织PDK1的影响

目的研究高同型半胱氨酸血症中骨骼肌组织PDK1的变化,探讨同型半胱氨酸对葡萄糖摄取的影响.方法 20只6周健康小鼠随机分为对照组(10只)和高同型半胱氨酸血症组(10只).3个月饮水中加入蛋氨酸(1.5%)复制高同型半胱氨酸血症模型,测定进食状态下血糖浓度.免疫组化检测骨骼肌细胞PDK1、PDK1磷酸化和Akt磷酸化的改变.Western Blot检测骨骼肌细胞PDK1与PDK1磷酸化和Akt与Akt磷酸化的表达.结果与对照组比较,高同型半胱氨酸血症组进食血糖浓度增加(P<0.05),高同型半胱氨酸血症组骨骼肌细胞中PDK1、p-PDK1(Ser-241)和p-Akt(Thr-308)平均灰度值增加(P<0.05);高同型半胱氨酸血症组骨骼肌组织PDK1、p-PDK1(Ser-241)和p-Akt(Thr-308)蛋白质水平下调(P<0.05),Akt的表达无差异(P>0.05).结论同型半胱氨酸可能通过降低骨骼肌组织PDK1的表达和PDK1磷酸化,抑制对葡萄糖的摄取.

医学生人体解剖学自主学习量表的研制

目的:根据自主学习的理论基础,编制一个适合医学生的人体解剖学学习自主性量表。方法:通过文献资料法、访谈法、问卷调查法、数理统计法,编制医学生自主学习量表,运用项目分析、因子分析、信度分析、效度分析方法进行量表的项目和结构验证。结果:对昆明医科大学医学专业的医学生进行抽样调查,建构了一个包含学习动机和学习策略两个方面的12个因子、64个题目的医学生人体解剖学学习自主性量表,分析结果表明:(1)量表具有较高的信度和效度;(2)医学生人体解剖学学习自主性包括12个因子,它们分别为自我效能、内在目标、学习控制、外在目标、学习意义、学习焦虑、常用方法、学习求助、学习计划和安排、学习总结、学习评价、学习管理。结论:本研究通过调查研究和数据分析,研制出一个针对人体解剖学科的医学专业的自主学习量表常模,为医学生人体解剖学自主学习测评提供了一个可供参照的依据。

天麻素对大鼠大脑中动脉栓塞后癫痫发作率的影响

目的观察天麻素对大鼠大脑中动脉栓塞后癫痫发作率和病死率的影响及其对脑缺血后神经功能的保护作用。方法将150只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和天麻素治疗组,每组50只,模型组和天麻素治疗组采用线栓法制备大脑中动脉栓塞模型,天麻素治疗组提前给予100 mg/kg的天麻素预处理,假手术组仅暴露而不闭塞大脑中动脉,术后精心护理,评估3组术后24 h内癫痫发作率和病死率。结果模型组和天麻素治疗组大鼠脑缺血后癫痫的发作率和病死率均高于假手术组,天麻素治疗组癫痫发作率和病死率低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论天麻素可降低大脑中动脉栓塞后癫痫发作率和病死率,发挥脑保护作用。

解剖学教学中开展双语教学的必要性和可行性

英语作为一门国际语言，其重要性早就不言而喻．随着我国加入WTO，经济全球化，我国同世界其它国家的联系越发紧密．为了与世界接轨，加强彼此的科技交流，培养出适应激烈竞争的现代化医务人才，推动双语教学，提高学生的英语（包括专业英语）水平，已成为我国高等教育改革的重要目标之一．结合实际分析解剖学双语教学的必要性和可行性，认真规划，大胆尝试，有针对性地进行改进，是提高双语教学的重要途径．

蛋白激酶C介导磷脂酶C-γ1参与高温诱导热休克蛋白70表达

目的研究蛋白激酶C(PKC)是否介导磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70(HSP70)表达的信号转导通路.方法以基因敲除方法建立的缺失PLC-γ1基因(plcg1-/)-及野生型PLC-γ1基因(plcg1+/)+小鼠胚胎成纤维细胞为模型,Western免疫印迹-增强化学发光法检测高温诱导时PLC-γ1的磷酸化激活,PKC激酶检测试剂盒测定PKC激活程度,并以酶联免疫吸附(ELISA)法及MTT法测定PKC抑制剂白屈莱红碱(chelerthrine chloride,CH)和激活剂佛波醇-12-豆蔻酰-13乙酸(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)对HSP70表达及细胞热耐力的影响.结果plcg1+/+细胞经高温处理,PLC-γ1出现磷酸化激活、PKC活性显著增强(P<0.01);plcg1-/-细胞PKC活性也有所增强,但明显低于plcg1+/+细胞(P<0.01).PKC抑制剂或激活剂能增强或降低两种细胞热耐力,对高温引起的两种细胞HSP70合成都有明显抑制或促进作用.结论蛋白激酶C可介导磷脂酶C-γ1参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70表达的信号传递.