实现自控分离对人血浆蛋白质量的影响

目的对低温乙醇血浆蛋白分离工艺实现自控后分离的人血浆蛋白各项质量指标和收获率进行评价。方法按照《中国药典》三部(2005版)规定的方法和标准,对低温乙醇工艺实现自控后分离的人血浆蛋白样品各项指标进行测定,并将测定结果与自控前的制品进行比较。结果连续测定实现自控后分离的71批人血白蛋白和52批静注人免疫球蛋白(IVIG)样品,并与实现自控前的82批人血白蛋白、29批静注人免疫球蛋白(IVIG)成品检定结果进行比较,发现人血白蛋白及IVIG的纯度和收获率均有明显提高,多聚体含量明显下降,其他指标(离子含量、吸光度等)均无明显改变,且制品质量稳定,符合《中国药典》三部(2005版)要求。结论低温乙醇分离蛋白实现自控后,进一步提高了人血浆蛋白的质量,使分离过程更加容易控制,制品质量更加趋于稳定。

离子交换吸附法提取人凝血酶原复合物工艺优化

目的优化人凝血酶原复合物的离子交换吸附工艺,提高PCC回收率。方法采用单因素试验的方法 ,以人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ吸附率为考察指标,初步优选吸附温度、吸附时间、凝胶用量和血浆pH四个工艺参数。结果优化试验结果为血浆温度20℃、吸附时间60 min、凝胶用量1.5 g/L、血浆pH7.4。结论确定了人凝血酶原复合物提取工艺的条件。

镧氨羧络合物对荷瘤小鼠生物活性的影响

本文探讨了镧氨羧络合物ＩＬａＤＣＴＡ、Ⅰ－ＬａＮＴＡ和Ⅰ－ＬａＥＤＴＡ对荷Ｓ＿（１８０）肿瘤小鼠红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力、红细胞内ＳＯＤ酶活及不同器官中丙二醛（ＭＤＡ）含量的影响。发现Ⅰ－ＬａＤＣＴＡ能促进红细胞粘附肿瘤细胞的能力，而Ⅰ－ＬａＥＤＴＡ、Ⅰ－ＬａＮＴＡ则起抑制作用；对ＳＯＤ酶活及ＭＤＡ含量也因络合物化学结构的不同结果各异。

FⅢ制作工艺优化对静注人免疫球蛋白(pH4)收率和关键质量指标的影响分析

目的优化静注人免疫球蛋白(pH4)FⅢ制作工艺参数,保证产品质量的同时,提高产品收率。方法将FⅡ+Ⅲ沉淀溶解后的乙酸钠、醋酸缓冲液和乙醇的加液时间分别由4 h、2 h、4 h延长为5 h、3 h、5 h;FⅡ+Ⅲ沉淀溶解温度由-0.5℃提高至1℃,FⅢ制作温度由-5.5℃提高至-5.0℃;对优化前后的人免疫球蛋白原液收率和关键质量指标(纯度、分子大小分布、抗补体活性、Fc生物学活性和激肽释放酶原激活剂)进行统计分析。结果加液时间延长和温度提高分别使人免疫球蛋白原液收率提高了19.6%和12.9%,且关键质量指标均未发生显著变化。结论 FⅢ制作过程加液时间和温度参数的优化,有效提高了人免疫球蛋白原液收率,未影响产品质量。

血浆蛋白含量对低温乙醇工艺蛋白收率的影响

目的:探讨血浆蛋白含量对低温乙醇分离工艺生产的人血白蛋白及免疫球蛋白回收率的影响。方法:以2017年1月至2018年12月所有投产批次的混合血浆为样本,根据血浆蛋白含量分成11组:54.0~54.4、54.5~54.9、55~55.4、55.5~55.9、56~56.4、56.5~56.9、57~57.4、57.5~57.9、58~58.4、58.5~58.9和59~59.4g/L。检测计算每组内所有批次血浆蛋白总量和经低温乙醇工艺分离得到的人血白蛋白和人免疫球蛋白总量,并分别计算蛋白回收率。分析不同血浆蛋白含量与人血白蛋白和人免疫球蛋白回收率的关系。结果:血浆蛋白含量在较低的范围内,人血白蛋白收率较高,其中在55.5~55.9g/L之间,收率最高,随着血浆蛋白含量提高,人血白蛋白收率下降;血浆蛋白含量在56.5~56.9g/L之间,人免疫球蛋白收率最高,过高和过低的血浆蛋白含量,均不利于人免疫球蛋白收率的提升。结论:血液制品低温乙醇工艺生产人血浆蛋白和人免疫球蛋白产品时应对混合血浆蛋白含量进行控制,血浆蛋白含量应控制在55.5~56.9g/L之间,才能平衡人血白蛋白和人免疫球蛋白收率的关系,获得较高的综合收率。

人凝血酶原复合物制备工艺中吸附用凝胶使用次数研究

目的研究DEAE Sephadex A-50凝胶使用次数。方法将同一批次DEAE Sephadex A-50凝胶连续使用5次,检测DEAE Sephadex A-50凝胶吸附前后血浆中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ效价、吸附前凝胶内毒素、pH和外观,进而评价凝胶质量。结果同一批次DEAE Sephadex A-50连续4次吸附人混合血浆,与第1次吸附结果进行比较,血浆中凝血因子Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ3种因子吸附效率均为100%,凝血因子Ⅶ吸附效率(71±6)%(P>0.05);凝胶内毒素检测合格,pH在7.0±0.4范围内。随着吸附次数增加,凝胶颜色加深,由白灰偏白逐渐变为白灰偏灰。同一批次DEAE Sephadex A-50使用第5次时,凝血因子Ⅸ吸附效率为80%,吸附效率降低。结论同一批次DEAE Sephadex A-50凝胶连续使用4次,其吸附能力、凝胶内毒素和pH均符合要求,凝胶颜色逐渐加深。

血浆蛋白分离组分沉淀物料平衡限度的建立

目的:建立低温乙醇工艺生产血液制品过程中各组分沉淀物料平衡限度范围。方法:根据2015-2018年连续生产的91批人血白蛋白及静注人免疫球蛋白(pH4)过程中各组分沉淀产出量,计算出单位重量血浆产出各组分沉淀的产出率,确定组分沉淀物料平衡限度,计算公式为:血浆量(kg)×(-Х±3SD)。结果:FⅠ,FⅡ+Ⅲ,FⅢ,FⅡ,FⅣ,FⅤ沉淀量的物料平衡范围分别为血浆量×(0.07187±3×0.00228)、血浆量×(0.09383±3×0.00193)、血浆量×(0.07419±3×0.00267)、血浆量×(0.02560±3×0.00238)、血浆量×(0.08601±3×0.00393)、血浆量×(0.10218±3×0.00187)。结论:低温乙醇工艺分离血浆蛋白过程中,各组分沉淀产出量均在物料平衡限度范围内,建立了组分沉淀量的物料平衡检查方法,对提高血液制品的质量控制具有重要意义。

加速试验法考察人凝血酶原复合物与内包材的相容性

目的:本研究通过加速试验进行人凝血酶原复合物与内包材的相容性试验,探讨药物的稳定性,确定内包材是否对产品的质量产生影响,为制剂设计、包装、运输、贮存提供必要的资料。方法:加速试验要求供试品1批,内包材3批,在温度(25±2)℃条件下放置6个月。在试验期间,于第3个月、6个月末分别取样一次,按加速稳定性重点考察项目进行检测,并与0月结果进行比较。结果:在(25±2)℃条件下放置6个月后,相关金属离子、有机物等相关迁移物均未检出,各凝血因子效价无明显变化,其他各生化检测指标符合《中国药典》(2015年版三部)要求,各指标检测结果变化无显著性差异(P>0.05)。产品质量均符合标准。结论:选用目前的包装系统对PCC质量无不良影响,所选包装容器中的药品质量稳定、可控,能够保持其使用的安全性和有效性。内包材对制剂质量无明显影响,总体相容性良好。

离子交换层析法制备高纯度人凝血因子Ⅷ的研究

目的：从血浆冷沉淀中采用离子交换层析法纯化人凝血因子Ⅷ。方法：冰冻血浆在2~8℃环境下融化,离心法收获冷沉淀。用注射用水溶解冷沉淀,探索了5种冷沉淀溶解液预纯化的方法。冷沉淀溶解液经S/D病毒灭活后采用离子交换层析纯化人凝血因子Ⅷ,经超滤、配制、除菌分装、冻干、干热病毒灭活,获得人凝血因子Ⅷ成品,分别检测流穿液、洗涤液和洗脱液中人凝血因子Ⅷ效价和蛋白含量。观察了冻干和不同干热条件前后凝血因子Ⅷ活性的变化。观察人凝血因子Ⅷ冻干品的外观和复溶时间。结果：冷沉淀中人凝血因子Ⅷ的回收率为40%~70%。5种冷沉淀溶解液预纯化方法中,用盐酸调节p H至6.6、6.3的方法人凝血因子Ⅷ回收率较高。离子交换层析流穿液中FⅧ损失率小于5%,而洗涤液中FⅧ损失率较高,最高损失率超过20%。人凝血因子Ⅷ中蛋白质含量较低,均小于0.65 mg·m L-1,比活性为50~100IU·m L-1。吐温-80和TNBP的残留量均符合《中国药典》的要求。冻干过程中人凝血因子Ⅷ效价下降大约1%~5%。100℃,30 min干热处理对FⅧ效价的破坏小于80℃,72 h。人凝血因子Ⅷ冻干品外观和复溶时间均达到中国药典标准。结论：采用离子交换层析法从血浆冷沉淀中分离出高纯度人凝血因子Ⅷ,可以进行工艺放大研究。