山茶油干预的阿尔茨海默病小鼠尿液代谢组学分析

目的:基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flightmassspectrometry,UPLC-Q/TOF-MS)技术,利用代谢组学方法探讨山茶油干预的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠尿液的代谢组学变化。方法:将小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性药组、山茶油组,除对照组外其余各组小鼠均由β-淀粉样蛋白25-35肽诱导AD,并取尿液样本。尿液沉淀蛋白后进行UPLC-Q/TOF-MS分析,获得小鼠尿液代谢物数据,使用SIMCA-P14.1软件进行主成分分析(principalcomponent analysis,PCA)和正交偏最小二乘判别分析,使用HMBD、MassBank、MetaboAnalyst、京都基因与基因组百科全书在线数据库对生物标志物进行鉴定、通路富集分析和代谢网络的构建。结果:在PCA得分图中,山茶油组样本点远离模型组样本点区域,更接近正常对照组样本点区域。鉴定得到48个生物标志物,主要涉及的通路有牛磺酸和次牛磺酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,半胱氨酸和蛋氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢等。结论:山茶油通过调节能量代谢、氨基酸代谢等改善了AD小鼠体内代谢,为山茶油干预AD的进一步研究提供参考。

β-谷甾醇对OVA诱导的过敏性哮喘大鼠模型中Th17/Treg免疫失衡的调节

目的:探讨β-谷甾醇对卵白蛋白(OVA)诱导的过敏性哮喘大鼠的干预作用及潜在作用机制。方法:SD雄性大鼠随机分为正常组(CON)、模型组(M)、阳性药地塞米松组(DEX,0.075 mg/kg)、β-谷甾醇组(Sit,50 mg/kg),采用腹腔注射OVA氢氧化铝溶液致敏,雾化吸入OVA激发建立过敏性哮喘大鼠模型。雾化激发前30 min灌胃给药,连续给药7 d后,检测大鼠咳喘指标、气管酚红排泌量;HE染色观察肺组织病理变化;流式细胞术检测大鼠原代肺细胞活性氧(ROS)、凋亡水平及外周血中Th17和Treg细胞比例;生化法检测大鼠肺组织中MDA含量及T-SOD、GSH-Px活力;ELISA检测Th17、Treg相关细胞因子(TNF-α、IL-4、IL-6、IL-17A、IL-35)水平。结果:与模型组相比,β-谷甾醇明显延长了过敏性哮喘大鼠的咳嗽及引喘潜伏期,减少了咳嗽及喘息次数,促进了气管酚红排泌;显著减轻了哮喘大鼠肺组织炎症浸润;显著降低了哮喘大鼠肺组织MDA含量、原代肺细胞ROS和凋亡水平,提高了T-SOD及GSH-Px活力;显著降低了Th17细胞比例及促炎细胞因子TNF-α、IL-4、IL-6、IL-17A水平,提高了Treg细胞比例及抑炎细胞因子IL-35水平。结论:β-谷甾醇能够改善OVA诱导的过敏性哮喘大鼠气道炎症和氧化损伤,其作用机制可能与β-谷甾醇对Th17/Treg免疫失衡及氧化应激反应的调节有关。

山药中熊果苷通过ERβ抑制LPS诱导NRK-52e细胞凋亡

目的探究山药中熊果苷(arbutin,Ar)对LPS诱导NRK-52e细胞凋亡的干预作用及潜在机制。方法建立LPS诱导的NRK-52e细胞损伤模型,将细胞分为正常组、LPS组(1 mg·L^(-1))、低剂量Ar(LPS,1 mg·L^(-1)+Ar,5μmol·L^(-1))和高剂量Ar(LPS,1 mg·L^(-1)+Ar,10μmol·L^(-1))及其对应的抑制剂THC组(1μmol·L^(-1)),检测细胞活力;流式细胞术检测ROS、细胞凋亡水平、Ca2+浓度及线粒体膜电位;In cell western技术检测细胞凋亡关键蛋白表达水平;结果Ar可有效调节LPS诱导的NRK-52e细胞ROS水平、Ca^(2+)浓度、凋亡关键蛋白和ERβ水平,抑制线粒体膜电位下降,但是该作用被雌激素受体β抑制剂THC所阻断,且Ar与ERβ具有较好的结合活性。结论Ar可能通过ERβ抑制LPS诱导NRK-52e细胞凋亡。

姜状三七皂苷R1对LPS/D-GalN诱导急性肝损伤的保护作用研究

目的:姜状三七皂苷R1对急性肝损伤的干预作用及其作用机制。方法:通过腹腔注射10μg/kg LPS和700 mg/kg D-GalN建立急性肝损伤小鼠模型,苏木素-伊红(HE)观察肝组织病理学变化;生化法检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平;小动物活体成像观察2-DG和PEG在小鼠体内的荧光强度;流式细胞术检测肝细胞的活性氧和凋亡水平。结果:与模型组比较,各剂量姜状三七皂苷R1可改善急性肝损伤小鼠肝脏病理损伤;降低小鼠血清ALT、AST水平和小鼠体内2-DG和PEG的荧光强度(P<0.01);降低肝细胞活性氧水平、血清MDA含量和小鼠肝脏组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2的水平(P<0.01,P<0.05);提高SOD和GSH-Px水平(P<0.05,P<0.01)。结论:姜状三七皂苷R1介导氧化应激和炎症来发挥抗急性肝损伤的作用。

基于网络药理学与肠道菌群的柏子仁脂肪油改善Aβ_(25-35)诱导小鼠脑损伤的作用研究

研究柏子仁脂肪油(Platycladi Semen oil,SP)对Aβ_(25-35)诱导小鼠脑损伤的保护作用及其机制,为临床治疗阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)提供理论依据。雄性昆明(KM)小鼠随机分为对照组、模型组(脑部注射200μmol·L-1Aβ_(25-35)溶液,0.15μL·g^(-1))、阳性药多奈哌齐组(10 mg·kg^(-1))及柏子仁脂肪油低、高剂量(0.5、1 mL·kg^(-1))组。探究各组小鼠的学习记忆功能、神经元损伤、Aβ1-42/Aβ1-40、p-Tau、细胞凋亡、氧化应激相关指标、免疫细胞及鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1,SPHK1)/鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)/鞘氨醇-1-磷酸受体5(sphingosine-1-phosphate receptor 5,S1PR5)通路相关蛋白或mRNA水平。接着利用气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析SP中的成分,并通过网络药理学、肠道菌群(gut mircrobiota,GM)16S rDNA测序及分子对接技术探讨SP干预AD的作用机制。结果显示SP可改善Aβ_(25-35)诱导小鼠的学习记忆功能,减少海马神经元损伤,降低脑内Aβ1-42/Aβ1-40、p-Tau、细胞凋亡和氧化应激相关指标的水平,并维持小鼠机体免疫细胞和GM的稳态。网络药理学和GM测序分析显示,SP对AD的治疗作用与鞘脂通路相关。同时,(Z,Z,Z)-9,12,15-十八碳三烯酸和(Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸是SP中含量最高的2种成分,与SPHK1和S1PR5有较好的结合活性。因此,推测SP通过调节肠道菌群,抑制SPHK1/S1P/S1PR5通路来发挥抗凋亡和抗氧化作用,从而改善Aβ_(25-35)诱导小鼠的脑损伤;并且(Z,Z,Z)-9,12,15-十八碳三烯酸和(Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸可能是SP发挥抗AD作用的物质基础。

地黄通过雌激素受体干预脂多糖诱导的脓毒症急性肾损伤

目的 研究鲜地黄和生地黄对脓毒症急性肾损伤的干预作用及与雌激素之间的关系。方法 120只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组,拮抗剂对照组,模型组、阳性药组、鲜地黄组、生地黄组以及相对应的+拮抗剂组,每组12只。小鼠以腹腔注射脂多糖(LPS)5 mg·kg^(-1)建立脓毒症急性肾损伤模型,阳性药组、鲜地黄组、生地黄组分别灌胃黄芪注射液4 g·kg^(-1)、鲜地黄水提物溶液10 g·kg^(-1)、生地黄水提物溶液5 g·kg^(-1),其余组灌胃等量蒸馏水,每日1次,连续6 d。+拮抗剂组小鼠在每日给药前0.5 h腹腔注射雌激素受体特异性拮抗剂(ICI 182780)0.5 mg·kg^(-1),其余各组注射等量生理盐水。观察各组肾组织病理变化,检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)和细胞因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-17A、干扰素(IFN)-γ水平,检测原代肾细胞凋亡和活性氧(ROS)水平,检测肾脏中Toll样受体4(TLR4)、caspase-11、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和IL-1β mRNA水平及TLR4/核因子(NF)-κB-信号转导与转录激活因子1 (STAT1)和caspase-11/NLRP3信号通路相关蛋白的表达。结果 与正常对照组相比,模型组小鼠出现肾小球萎缩、肾小管扩张、上皮细胞脱落等肾脏损伤,血清中Scr、BUN水平和细胞因子IL-6、TNF-α、IL-17A、IFN-γ水平显著升高,原代肾细胞ROS和凋亡水平升高,肾脏TLR4、caspase-11、NLRP3和IL-1β mRNA水平升高,相关通路蛋白TLR4、IFN-β、NF-κB p-p65、p-STAT1、caspase-11、NLRP3和IL-1β显著升高,IL-1受体拮抗剂表达水平显著降低(P <0.01)。鲜地黄和生地黄可有效抑制LPS诱导的肾脏损伤,显著降低BUN、Scr、细胞因子及原代肾细胞ROS和细胞凋亡水平,有效调节TLR4/NF-κB-STAT1和caspase-11/NLRP3信号通路的相关基因和蛋白表达水平(P <0.05),上述作用被雌激素受体拮抗剂减弱(P <0.05)。结论 鲜地黄和生地黄可能通过雌激素受体调节TLR4/NF-κB-STAT1和caspase-11/NLRP3通路减轻LPS诱导的脓毒症急性肾损伤。

牛膝及其炮制品对肝衰竭大鼠的作用差异研究

目的:比较牛膝不同炮制品对肝衰竭大鼠的作用差异,初步探讨牛膝炮制机理。方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、水飞蓟宾44 mg/kg组、牛膝组、盐牛膝组、酒牛膝组(均为4 g/kg)。灌胃给药,连续7 d,末次给药后禁食24 h,除正常对照组外,其余各组大鼠腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS 10μg/kg)和氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GalN 900 mg/kg),8 h后解剖。HE染色观察肝脏组织病理学变化;Elisa检测血清与肝脏组织中IL-2、IL-6、IL-18、IFN-γ、TNF-α含量;试剂盒检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量;蛋白印迹法检测肝脏组织中B细胞淋巴瘤-2基因(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、凋亡蛋白活性因子-1抗体(FAS)、FAS相关死亡域蛋白(FADD)、Caspase8蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠肝脏组织病理损伤严重,血清中AST、ALT活性和MDA含量明显升高,SOD、GSH-Px活性明显降低,血清和肝脏组织中TNF-α、IL-6、IL-2、IL-18、IFN-γ的浓度明显升高,肝脏组织BAX、Caspase-3、Caspase-9、FAS、FADD蛋白表达明显上调,BCL-2、Caspase8蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,牛膝不同炮制品组大鼠肝脏组织病理损伤有所改善,血清中AST、ALT活性和MDA含量明显降低,SOD、GSH-Px活性显著升高,血清和肝脏组织中TNF-α、IL-6、IL-2、IL-18、IFN-γ的浓度明显降低,肝脏组织BAX、Caspase-3、Caspase-9、FAS、FADD蛋白表达显著下调,酒牛膝4 g/kg组BCL-2、Caspase-8蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),其中以酒牛膝效果最好,优于牛膝和盐牛膝。结论:牛膝、酒牛膝、盐牛膝对肝衰竭大鼠的保护作用存在差异,酒牛膝作用强于盐牛膝,牛膝炮制后可能影响其作用趋向(部位)。

葶苈大枣泻肺汤对哮喘大鼠免疫炎症和肠道菌群的影响

从免疫炎症和肠道菌群角度探究葶苈大枣泻肺汤对哮喘的干预作用机制,为指导临床合理用药提供理论依据。通过腹腔注射卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏液和雾化激发构建哮喘大鼠模型,分为正常组(control,CON)、模型组(model,M)、地塞米松组(dexamethasone,DEX,0.075 mg·kg^(-1))和葶苈大枣泻肺汤组(Tingli Dazao Xiefei Decoction,TLDZ,3.5 g·kg^(-1))。首先通过咳嗽、喘息、酚红排泌、苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H&E)、马松染色(Masson)和过碘酸雪夫氏染色(periodic acid Schiff,PAS)观察葶苈大枣泻肺汤对大鼠哮喘症状、肺脏和气管病理变化的影响;ELISA检测大鼠血清中转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、白细胞介素(interleukin,IL)6和IL-10水平及肺泡灌洗液中γ干扰素(interferonγ,IFN-γ)、免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)、IL-4、IL-17A和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)水平;qRT-PCR检测肺组织中IL-5、IL-13和IL-33的mRNA水平;然后采用流式细胞术结合免疫组化检测脾脏中巨噬细胞和中性粒细胞水平和外周血中自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)、辅助性T细胞(helper T cell,Thc)、树突状细胞(dendritic cell,DC)、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)和辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)水平;接着通过16S rDNA高通量测序分析哮喘大鼠肠道菌群。病理学和炎症因子结果显示,葶苈大枣泻肺汤可有效减轻大鼠哮喘症状,改善肺部组织病理变化,减少杯状细胞和胶原纤维产生,抑制哮喘大鼠炎症反应;免疫细胞结果显示,葶苈大枣泻肺汤可有效增加哮喘大鼠NK、Thc、DC和Treg细胞水平并降低巨噬细胞、中性粒细胞和Th17细胞水平;肠道菌群结果显示,葶苈大枣泻肺汤可增加哮喘大鼠乳酸杆菌、瘤胃球菌、克里斯滕森菌、双歧杆菌和真杆菌属水平,降低厚壁菌、Mucispirillum、Romboutsia和脱硫弧菌属水平。因此,推测葶苈大枣泻肺汤可通过调节哮喘大鼠体内免疫炎症反应和肠道菌群从而改善大鼠哮喘症状。本文中所有动物实验都获得河南中医药大学伦理学委员会批准。

基于网络药理学及实验验证的“麻黄-葶苈子”药对治疗支气管哮喘的作用研究

网络药理学结合体内实验探究“麻黄-葶苈子”药对治疗哮喘的作用机制,为临床用药提供理论依据。首先,利用网络药理学预测“麻黄-葶苈子”治疗哮喘的潜在靶点,构建“中药-活性成分-靶点-通路-疾病”的关系网络,并对潜在靶点进行Gene Oncology(GO)功能分析和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)信号通路富集分析,分子对接模拟关键候选活性成分与核心基因的结合活性。然后,通过腹腔注射卵白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏液和雾化激发构建OVA哮喘大鼠模型,分为正常组、模型组、地塞米松组(dexamethasone,DEX,0.075 mg·kg^(-1))和“麻黄-葶苈子”药对组(MT,配伍比例1∶1.5),苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)和过碘酸雪夫(PAS)染色观察“麻黄-葶苈子”对哮喘大鼠肺脏和气管病理变化及杯状细胞增生情况的影响,酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清中转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素6(IL6)和白细胞介素10(IL10)水平,进而通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测网络药理学预测的核心基因丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、cyclin D1(CCND1)、表皮生长因子受体(EGFR)、IL6、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)的mRNA和蛋白表达水平。网络药理学分析表明“麻黄-葶苈子”治疗哮喘的潜在核心基因为MAPK8、CCND1、IL6和EGFR,并且可能与PI3K/Akt信号通路相关,“麻黄-葶苈子”药对中活性成分槲皮素和β-谷甾醇作用于哮喘的靶点较多,且分子对接结果显示槲皮素和β-谷甾醇与MAPK、PI3K和Akt具有较好的结合活性;体内实验结果表明“麻黄-葶苈子”可有效改善OVA哮喘大鼠症状,改善肺部组织病理变化,减少杯状细胞产生,减轻哮喘大鼠炎症反应,抑制MAPK8、CCND1、EGFR和IL6的表达,调节PI3K/Akt信号通路。因此,推测“麻黄-葶苈子”可能通过调节PI3K/Akt信号通路改善大鼠哮喘症状,抑制哮喘大鼠炎症反应,槲皮素和β-谷甾醇可能是“麻黄-葶苈子”治疗哮喘的候选活性成分。

猫眼草酚D抑制小鼠急性肺损伤的作用及其机制研究

目的:探讨怀菊花茎叶中猫眼草酚D(chrysosplenol D,CD)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)所致小鼠急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的预防作用并初步探讨其作用机制。方法:用LPS诱导ALI模型,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化;流式细胞术检测原代肺细胞凋亡和活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;酶法检测肺组织中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量;ELISA法检测肺泡灌洗液中炎症因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;Western blot法检测Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)-NOD样受体热蛋白结构域3(NOD-like receptor thermal protein domain 3,NLRP3)炎症小体通路相关蛋白。结果:在脂多糖诱导的急性肺损伤模型中,猫眼草酚D能使肺脏病理变化有所改善;原代肺细胞凋亡率和ROS水平降低;GSH-Px, SOD水平显著升高,MDA降低;IL-6,IL-1β和TNF-α水平显著降低;TLR4,NLRP3和髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)及IL-1β蛋白水平降低。结论:怀菊花茎叶中猫眼草酚D可能通过调节TLR4-NLRP3通路降低炎症、氧化应激与凋亡水平从而改善脂多糖诱导的急性肺损伤。

草麻黄、中麻黄、木贼麻黄对风寒表证大鼠的干预作用比较研究

目的:比较草麻黄、中麻黄、木贼麻黄对风寒表证大鼠的干预作用,为指导临床用药提供理论依据。方法:将SD大鼠通过“风扇吹风加寒冷刺激”构建风寒表证模型,以大鼠出现蜷卧或团缩聚卧状态、自发活动减少、弓背耸毛、打喷嚏,体温升高为造模成功。造模成功大鼠,随机分为模型对照组、对乙酰氨基酚0.46 g/kg、草麻黄、中麻黄及木贼麻黄2.34 g/kg组,另设正常对照组。分别灌胃给予相应药物或生理盐水,连续5 d。观察大鼠的基本状态,分别从呼吸系统、中枢神经系统、消化系统以及循环系统评价草麻黄、中麻黄及木贼麻黄对风寒表证大鼠的影响。结果:三种麻黄可有效降低风寒表证大鼠体温,不同程度地从呼吸系统、中枢神经系统、消化系统及循环系统改善风寒表证大鼠,草麻黄效果较好,木贼麻黄和中麻黄次之。结论:草麻黄对风寒表证治疗作用效果优于中麻黄和木贼麻黄,与临床用药一致。

草麻黄、中麻黄及木贼麻黄水提物对风寒表证大鼠机体免疫作用的差异研究

本实验采用"风扇吹风加寒冷刺激"构建风寒表证模型,比较草麻黄、中麻黄及木贼麻黄水提物对风寒表证大鼠机体免疫作用的差异,为麻黄的临床用药提供理论支撑。当大鼠出现蜷卧或团缩聚卧状态、自发活动减少、弓背耸毛、打喷嚏、体温升高时即为模型成功。造模成功后,将雄性SD大鼠随机分为正常(CON)、模型(FHBZ)、对乙酰氨基酚(Y,455 mg/kg)、草麻黄(CMH,2340 mg/kg)、中麻黄(ZMH,2340 mg/kg)及木贼麻黄(MZMH,2340 mg/kg)组,连续灌胃给药5d。利用流式细胞术检测大鼠肺和脾脏细胞凋亡水平及外周血和脾脏内自然杀伤细胞(natural killer cells,NKs)、树突状细胞(dendritic cells,DCs)、髓系来源的抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)、辅助性T细胞(helper T cells,Ths)、细胞毒性T细胞(cytotoxic T cells,Tcs)以及调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)的水平变化。研究结果显示,三种麻黄均能显著降低风寒表证大鼠肺和脾脏细胞的凋亡水平,调节大鼠机体内免疫细胞水平(P<0.01),且草麻黄的作用效果优于中麻黄和木贼麻黄,与临床用药一致。

石胆草碳苷B改善阿尔茨海默病小鼠模型的研究

目的:探究石胆草碳苷B(CB)对淀粉样β蛋白片段25-35(Aβ_(25-35))诱导阿尔茨海默病(AD)的干预作用及其作用机制,为临床治疗AD提供实验基础。方法:将40只雄性昆明小鼠随机分为正常组、模型组、多奈哌齐组(10 mg·kg^(-1))、CB组(10 mg·kg^(-1))。除正常组外,其余各组小鼠脑内注射Aβ_(25-35)(300μmol·L^(-1))建立AD小鼠模型。Y迷宫、新物体识别实验检测小鼠学习记忆能力;HE染色、尼氏染色和电镜观察海马病理变化;酶联免疫吸附法检测脑内Aβ_(1-42)/Aβ_(1-40)、磷酸化Tau蛋白(p-Tau)水平;生化法检测血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量或活性;流式细胞术检测脑内活性氧(ROS)水平;蛋白免疫印迹法(WB)检测脑内LC_(3)B,Beclin-1和P62相关自噬蛋白水平。体外培养PC-12细胞,结合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA),观察CB对Aβ_(25-35)诱导PC-12细胞的影响是否与自噬有关,从而进一步阐释CB干预AD的作用机制。结果:行为学结果显示CB可显著改善Aβ_(25-35)诱导小鼠的学习记忆能力,HE及尼氏染色显示CB可显著改善海马损伤及神经元萎缩,试剂盒检测结果显示CB可显著降低小鼠脑内Aβ_(1-42)/Aβ_(1-40),p-Tau和氧化应激水平,WB结果显示CB可显著增强自噬水平;体外实验结果表明,CB可显著提高PC-12细胞迁移能力及增殖能力,但在加入3-MA后其作用显著减弱。结论:CB可能通过增强自噬来减轻Aβ_(25-35)诱导的AD模型损伤。

怀菊花茎叶中聚炔类生物碱对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响

目的:研究怀菊花茎叶中聚炔类生物碱对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响及其调控机制。方法:利用实时无标记细胞分析仪检测怀菊花茎叶中4个聚炔类生物碱诱导A549细胞凋亡的半抑制浓度(IC50)。取对数生长期A549细胞,分为对照组(CON)和各给药组:C1,C2,C3,C4(20μmol·L^(-1)),处理48 h后,采用流式细胞术检测活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位变化和细胞凋亡率。细胞免疫荧光技术检测抗凋亡蛋白Bcl-2的相对表达水平,并利用分子对接技术预测C1~C4与Bcl-2蛋白的结合模式。结果:与对照组相比,怀菊花茎叶中4个聚炔类生物碱均能显著抑制A549细胞增殖和抗凋亡蛋白Bcl-2表达,并显著提高A549细胞ROS水平,降低线粒体膜电位,提高细胞凋亡率(P<0.05或P<0.01),分子对接结果显示C1~C4均能够与Bcl-2蛋白中关键氨基酸残基相互作用。结论:怀菊花茎叶中4个聚炔类生物碱可能通过激活线粒体细胞凋亡程序,发挥其促进A549细胞凋亡的作用。