Oct4介导小鼠原代肝细胞去分化研究

目的通过Oct4介导小鼠肝细胞去分化为Sox17阳性细胞,探索肝胰重编程新途径。方法构建慢病毒载体pWPT-Oct4,包装和浓缩病毒;改良两步胶原酶灌流法分离小鼠原代肝细胞;Oct4-慢病毒浓缩液感染小鼠原代肝细胞,RT-PCR检测肝细胞及内胚层转录因子的表达。结果通过酶切、测序鉴定,证实成功构建包含Oct4慢病毒表达载体。感染肝细胞后,外源性Oct4出现表达,成熟的肝细胞转录因子(Alb、Ttr、Afp)表达下降,并表达内胚层早期标记物Sox17,而没有Oct4、Nanog及Sox2等多能性基因的内源性表达。结论 Oct4介导肝细胞去分化,并出现Sox17阳性细胞,为进一步将Sox17阳性细胞分化为胰岛素产生细胞奠定基础。

骨髓间充质干细胞移植促进糖尿病大鼠β细胞再生的机制

目的探索骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植促进糖尿病大鼠模型中β细胞再生的机制。方法正常SD大鼠给予单次大剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(65 mg/kg)注射,3 d后开始监测血糖,连续3 d随机血糖>28 mmol/L者选为实验对象。所有实验对象随机分为对照组(n=15),BMSC移植组(n=15),BMSC培养上清移植组(n=15)以及BMSC示踪组(以Dil染料标记BMSCs,n=5),分别接受PBS、MSC、MSC培养上清及Dil-BMSC的移植。结果 BMSC移植后30 d左右血糖水平有明显改善[(20.4±0.98)mmol/L,n=15],胰岛素水平有明显提高[(0.99±0.23)ng/ml,n=15],β细胞质量明显增长。富含BMSC分泌因子的BMSC上清输注后,糖尿病大鼠血糖有一定程度的降低[(26.2±1.53)mmol/L,n=15],胰岛素水平有所恢复[(0.341±0.08)ng/ml,n=15],β细胞质量较对照组有所增加。在胰腺仅检测到小部分BMSC,这部分归巢于胰腺的BMSC中检测不到与胰岛素的共标。结论 BMSC的分泌效应为BMSC促进糖尿病动物模型中β细胞再生的机制。

单次大剂量链脲佐菌素诱导的糖尿病模型β细胞凋亡的研究及意义探讨

目的详细阐述单次大剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的SD大鼠1型糖尿病模型中β细胞凋亡的时相变化。方法 SD大鼠腹腔一次性注射大剂量STZ(65 mg/kg),观察血糖及胰岛素水平的动态变化,在指定时间点处死大鼠,对胰腺行HE染色、免疫荧光染色及TUNEL染色。结果注射STZ后,SD大鼠血糖呈现出一个高-低-高的三相反应,伴随着胰岛素水平低-高-低的变化以及相应的病理学改变。STZ注射后6 h,β细胞凋亡率(由TUNEL染色衡量)大幅度上升,β细胞凋亡较为同步,此后β细胞凋亡率急剧下降,直到STZ注射后48 h,几乎检测不到β细胞的凋亡。结论单次大剂量STZ诱导的SD大鼠1型糖尿病模型β细胞凋亡在病程早期(STZ注射后6 h)即达高峰,且较为同步,相应出现了血糖水平、胰岛素水平以及胰岛病理结构的变化。

水泥凝结时间测定方法的探讨

通过一系列实验,提出了用提高水泥养护温度的办法代替传统的20℃的养护条件。既减少了测定的次数,又缩短了测定的时间,同时降低了测定的误差。

OCT4介导肝细胞去分化过程中巢蛋白的表达及意义探讨

目的探讨OCT4介导的原代肝细胞去分化过程中巢蛋白(nestin)的表达及其意义。方法体外分离培养小鼠原代肝细胞。包装、浓缩表达OCT4的慢病毒并感染肝细胞。观察细胞的形态变化,用RT-PCR法监测nestin、白蛋白(albumin,ALB)、甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)以及叉头框A2(FOXA2)的表达并进行定量分析。结果 OCT4慢病毒感染后,肝细胞内颗粒逐渐释出,并在7 d左右开始出现肝细胞增殖。在肝细胞ALB减弱,AFP、FOXA2增强的过程中,nestin从第3天持续至第9天,表达逐渐增强,从12 d起开始减弱,至18 d时上述基因的表达几近消失。结论 Nestin的表达伴随肝细胞去分化和增殖的过程。

机立窑改造新途径－立窑窑体放风结构

本文介绍了机立窑窑体放风结构和冷态试验、工业性试验的结果。这种新型结构可以有效地解决机立窑通风不均匀、偏火、烧成带熟料煅烧温度、卸料不均匀等问题，为机立窑生产优质、高产、低耗开辟了新的途径。

高温煅烧石膏对水泥强度的影响

在水泥工业生产中,常用二水石膏或天然硬石膏作水泥的缓凝剂,而采用高温煅烧石膏生产水泥,及其对水泥物理性能影响的研究似不多见。日本学者森二郎在'用高温煅烧石膏制造喷射水泥'的研究中指出:'煅烧石膏的结晶度及杂质对水泥的早期强度都有影响。二水石膏的晶体尺寸和高温煅烧石膏的晶体尺寸相当,而其活性却不相同。

Oct4介导小鼠原代肝细胞直接重编程为Pdx-1阳性细胞

目的:Oct4介导小鼠原代肝细胞直接重编程为Pdx-1阳性细胞的研究。方法:利用小鼠慢病毒载体pWPT-Oct4联合包装质粒包装病毒,含有PEG6000的病毒浓缩液对病毒原液进行浓缩;慢病毒浓缩液感染利用两步胶原酶灌流法分离培养的小鼠肝细胞;RT-PCR检测肝脏、胰腺谱系及多能性转录因子表达。结果:含有Oct4慢病毒感染小鼠原代肝细胞后,Oct4出现表达,肝细胞相关转录因子(Alb、Afp)表达逐渐下降,内胚层早期标志物Foxa2的表达随时间的增加而减弱,Sox17在感染后12d、18d出现表达,并表达胰腺发育过程中的关键性基因-胰十二指肠同源异盒蛋白-1(pancreatic duodenal homeobox-1,Pdx-1);不表达Nanog及Sox2等多能性基因。结论:在Oct4介导下成功去分化小鼠原代肝细胞,出现Pdx-1阳性细胞。

高温煅烧石膏提高水泥强度的影响因素

本文通过对山西临昆石膏经高温煅烧后可以提高水泥强度的机理研究，结论主要是山西临昆石膏中杂异离子的存在以及经高温煅烧后石膏本身的某些物化性能的改变。

机立窑预烘干快速升温明火锻烧操作方法的探讨

讨论了立窑的两种操作方法—明大煅烧法和采用窑外预烘干快速升温的明火煅烧法。对两种方法在传热、传质、燃料燃烧、熟料烧成动力学、操作和管理等方面进行了对比。以两种模拟煅烧方法得到的熟料进行了强度测量、Ｘ先衍射分析和电镜观察，分析上述测试结果可以得出以下结论：在机立窑上增设一台预烘干设备后，采用快速升温明火操作改进立窑的熟料质量，提高熟料产量和降低水泥的综合热耗等方面比采用暗火煅烧方法更具有优越性。

水泥熟料低温快速烧成研究

本文对在急剧升温煅烧水泥熟料过程中的煅烧温度和煅烧时间的确定,以及是否存在新生态活性氧化钙,促进C_3S的生成,加速熟料生成的速率等方面进行了一些实验研究和讨论,并提出了新的见解。