双酚AF经Nrf2/HO-1信号通路诱导氧化应激并加重肝脏内脂质代谢紊乱

基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)探讨双酚AF(BPAF)染毒诱导肝组织内脂质代谢紊乱发生的分子机制。将50只SPF级雄性昆明小鼠分为对照组、溶剂对照组和3组BPAF染毒组(低、中、高剂量组)。对照组、溶剂对照组每日分别给予生理盐水、玉米油;低、中、高剂量组分别给予5、20、50 mg·kg^(-1)(以体质量计)BPAF,连续灌胃10周。染毒结束后,记录肝脏系数和体质量,检测血清中血脂(总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL))水平、肝功能相关指标(天门冬氨酸基转氨酶(AST)、丙氨酸氨基转氨酶(ALT)),检测肝组织氧化应激指标(丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS))水平、肝脂质(总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG))水平。HE染色和普鲁士蓝染色观察肝组织内病理学变化,RT-qPCR和Western blot检测肝组织中Nrf2、HO-1、谷胱甘肽过氧化物酶4(Gpx4)和PPARγ的蛋白和mRNA的表达。血清和肝匀浆液生化结果显示,BPAF导致小鼠脂质代谢、肝功能、氧化应激指标出现明显异常;HE染色显示肝细胞排列紊乱,细胞内存在大小不一的脂质空泡;普鲁士蓝染色显示各组肝组织内并未出现铁离子沉积;Western blot和RT-qPCR结果显示BPAF染毒组肝组织内PPARγ的mRNA和蛋白的表达显著升高,且肝组织内Nrf2、HO-1和Gpx4的mRNA和蛋白的表达显著降低。结果表明,BPAF能明显下调Nrf2/HO-1信号通路,加重脂质过氧化程度,从而导致小鼠肝脏出现脂质代谢紊乱。

灯盏细辛联合依帕司他对糖尿病肾病大鼠肾皮质中CAT、SOD、MDA表达的影响

目的:探究灯盏细辛联合依帕司他对糖尿病肾病(DN)大鼠CAT、SOD、MDA表达的影响,探讨其抗氧化应激的作用。方法:将50只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、灯盏细辛组、依帕司他组以及联合组,每组10只。除正常对照组外,其余各组采用喂养高脂高糖饲料、辅助一次性注射链脲佐菌素(STZ,55 mg/kg)的方法建立糖尿病肾病模型大鼠。造模成功后,依帕司他组给予依帕司他(100 mg/kg)灌胃,灯盏细辛组给予灯盏细辛(200 mg/kg)灌胃,联合组给予依帕司他(100 mg/kg)和灯盏细辛(200 mg/kg)灌胃,正常对照组和模型组给予5%CMC-Na混悬液灌胃,持续6周。记录造模前与治疗过程中各组大鼠的体质量、血糖以及24 h微量白蛋白(24 h UmAlb)含量;给药6周后处死大鼠,采用钼酸铵法检测肾皮质中过氧化氢酶(CAT)活性,采用WST1法检测大鼠肾皮质中超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用TBA法检测肾皮质中丙二醛(MDA)含量。结果:治疗后6周末,与模型组比较,联合组大鼠体质量与模型组比较,上升最显著(P<0.01),其次是依帕司他组,最后是灯盏细辛组,联合组与依帕司他组、灯盏细辛组比较具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);治疗后6周末,联合组的血糖,24 h UmAlb水平显著低于模型组、依帕司他组和灯盏细辛组(P<0.01,P<0.05);治疗后6周末,各组大鼠肾皮质氧化应激指标CAT、SOD和MDA水平比较,联合组大鼠肾皮质CAT和SOD水平明显高于模型组、依帕司他组和灯盏细辛组(P<0.01,P<0.05),MDA水平明显低于模型组、依帕司他组和灯盏细辛组(P<0.01,P<0.05)。结论:灯盏细辛联合依帕司他能有效纠正糖尿病肾病肾损伤,延缓病情发展,其机制可能与其上调CAT、SOD活性,降低MDA含量,进而调控糖尿病肾病肾组织氧化应激有关。

灯盏细辛联合依帕司他对糖尿病肾病模型大鼠的治疗作用及机制

目的:探讨基于多元醇通路(PP)中醛糖还原酶(AR)灯盏细辛联合依帕司他(EPST)对糖尿病肾病(DN)大鼠氧化应激以及肾功能的干预机制。方法:将50只SD大鼠,随机平均分为正常对照组以及各干预组(模型组、EPST组、灯盏细辛组和EPST+灯盏细辛组)。各干预组采用单次注射链脲佐菌素(STZ)55 mg/kg合并喂养高脂高糖饲料的方法制备大鼠DN模型。持续灌胃给药6周后,观察大鼠一般形态学变化;HE染色观察大鼠肾组织形态变化;血糖仪检测空腹血糖(FBG)水平;动物体重天平检测体重水平;全自动生化仪检测血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平;试剂盒检测肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平;ELISA检测24 h尿微量白蛋白(24 h UmAlb)和肾组织AR水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠出现“三多一少”糖尿病典型症状,肾小球肥大,肾小管呈空泡样变性,FBG水平升高(P<0.01),体重水平降低(P<0.01),24 h UmAlb、Scr和BUN水平升高(P<0.01),SOD和GSH水平降低(P<0.01),MDA水平升高(P<0.01),AR活性升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组整体状态好转,肾组织病理结构损害显著降低,FBG水平降低(P<0.01),体重水平升高(P<0.01),24 h UmAlb、Scr和BUN水平降低(P<0.01),SOD和GSH水平升高(P<0.01),MDA水平降低(P<0.01),AR活性降低(P<0.01),而EPST+灯盏细辛组的作用显著优于EPST或灯盏细辛组(P<0.05)。结论:灯盏细辛与EPST联合给药能改善DN大鼠肾功能以及提高其抗氧化能力,且治疗效果优于单独给药组,其作用机制可能与通过下调肾组织AR活性来抑制PP的激活,并协同减轻肾组织氧化应激有关。

双酚AF经口亚急性染毒对小鼠糖脂代谢的影响

目的探究双酚AF(BPAF)亚急性毒性对小鼠糖脂代谢影响。方法50只SPF级6周龄健康雄性小鼠随机分为5组,对照组、溶液对照组以及100、200和400 mg/kg/d BPAF染毒组,经口染毒14 d,进行葡萄糖耐量试验(OGTT实验),测定小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL),肝组织切片HE染色以及荧光定量PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、脂肪酸合成酶(FAS)、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PERCK)、叉头状转录因子(FoxO1)。结果BPAF染毒组与对照组和溶液对照组比较,BPAF染毒组体质量降低,TG[(3.067±0.581)、(2.896±0.734)、(3.498±0.698)mol/L]比[(2.322±0.303)和(2.284±0.253)mol/L]、TC[(1.052±0.049)、(1.488±0.219)、(1.188±0.192)mol/L]比[(0.645±0.077)和(0.736±0.144)mol/L]含量升高,PPAR-γ、ACC1、FAS、PERCK、FoxO1转录水平升高,且血清内TC、TG含量和肝脏内PPAR-γ、ACC1、FAS、FoxO1、PERCK转录水平与BPAF染毒剂量呈正相关(F=19.971、7.713、45.06、4216.845、399.476、382.564、190.869、156.971,P<0.05)。同时在肝脏切片观察到肝细胞胞质内出现大小不一的脂滴及大量炎细胞浸润;而200、400 mg/(kg·d)剂量组与对照组和溶液对照组比较,肝/体比值、空腹血糖(FBG)[(7.84±1.834)和(8.62±0.73)mol/L]比[(6.36±0.26)和(6.28±0.177)mol/L]水平升高,糖耐量实验中30 min血糖、60 min血糖水平降低,且400 mg/(kg·d)剂量组较200 mg/(kg·d)剂量组明显(F=21.342、9.627、29.91、10.148,P<0.05)。结论亚急性BPAF暴露严重干扰小鼠肝脏脂质代谢及葡萄糖稳态。