乙酰胆碱受体结构与功能的研究进展

乙酰胆碱受体是一种神经递质介导的离子通道受体 ,由 5个同源亚基组成。乙酰胆碱受体包括肌肉型和神经型两种。肌肉型乙酰胆碱受体是肌肉神经传导中的重要媒介物质以及自身免疫疾病重症肌无力的主要免疫原 ,神经型乙酰胆碱受体的突变也可导致某些疾病的发生。扼要介绍了近年来乙酰胆碱受体结构与功能的研究进展。

细胞毒素Gelonin的亚克隆、表达与纯化

将分别含有细胞毒素gelonin基因片断的重组子pUC-gell和pUC-gel Ⅱ,按照预先设计的酶切位点,通过亚克隆得到含有gelonin全基因的重组子pUC-gel。然后将pUC-gel与pET28a同时用NdeI/EcoRI双酶切,相关片段构建成表达重组子pET-gel,并进行DNA序列测定。工程菌 E.coli BL21/pET-gel表达产物经两步SP-Sepha-rose柱层析,可得电泳纯的重组 gelonin,分子质量为28000u。无细胞体系蛋白质合成实验表明,其地（使蛋白质合成抑制50％所需浓度）为35μg/L。酶联免疫实验为阳性。

蛋白质NMR样品制备技术

在结构基因组学和结构生物学的研究中,核磁共振技术被广泛地用于测定蛋白质在溶液中的空间结构及其动力学,研究蛋白质与配体的相互作用。但是,核磁共振技术的应用在很大程度上受到样品制备技术的制约。该文就蛋白质NMR样品的制备技术进行综述,主要介绍几种常用的重组蛋白质表达体系、蛋白质同位素标记技术以及缓冲液的选择等方面的进展。

截短型细胞毒素Gelonin的分子构象和生物活性

为了探索免疫络合物中具杀伤靶细胞的毒素,gelonin的结构与功能的关系,根据化学合成的gelonin基因序列和3维分子构象设计了N端区Gly,Leu,Asp和或C端区Asp,Lys,Asp,Pro,Lys缺失的gelonin.以重组质粒pEgel为模板,在相应引物存在下,用PCR法获得5′端区和或3′端区碱基序列缺失的gelonin基因片段.经克隆、表达和纯化得到3种截短型gelonin(GN3、GC5、GN3C5).CD谱和荧光谱表明,完整型gelonin(GO)与截短型gelonin的分子构象有明显的差异.它们的构象变化与类DNase活性和抑制肿瘤细胞生长的能力均为GO≥GN3>GC5>GN3C5.结果再一次证明了具有α+β型结构蛋白,gelonin的构象与生物活性的一致性.

重组植物毒素gelonin的纯化及性质研究

采用 pET2 8a载体系统在E .coliBL2 1中进行了植物毒素gelonin的原核表达 ,产物经SP Sepharose ,Superdex 75二步纯化 ,获得了电泳纯的重组植物毒素 gelonin。将重组的gelonin与从植物种子中提取的天然 gelonin进行了Westernblot,ELISA ,无细胞体系中蛋白质合成抑制实验以及超螺旋DNA裂解研究。结果都表明 ,重组植物毒素gelonin与天然

基因疫苗pcDNA-AChR_(α211)免疫小鼠建立重症肌无力动物模型

目的:用基因疫苗pcDNA-AChR_(α211)免疫C57BL/6小鼠建立实验性自身免疫性重症肌无力模型(EAMG)。方法:将人乙酰胆碱受体α亚基N端的主要免疫区(AChR_(α211))的基因片段插入到穿梭载体pcDNA3.0中,构建基因疫苗pcDNA-AChR_(α211)。大量提纯质粒pcDNA-AChR_(α211)后肌肉注射C57BL/6小鼠。用ELISA法检测小鼠血清中抗AChR_(α211)的IgG(ACh-RAb),并用PCR方法检测外源基因在小鼠各组织器官中的分布情况。结果:双酶切鉴定和序列测定表明构建了含正确目的基因阅读框的重组质粒pcDNA-AChR_(α211),ELISA分析表明该基因疫苗免疫的C57BL/6小鼠血清中含有AChRAb,且免疫三个月后在小鼠的肌肉、肝、脾、肾中仍可检测到目的基因AChR_(α211)的存在。结论:重组质粒pcDNA-AChR_(α211)作为基因疫苗能够诱导实验性自身免疫性重症肌无力。

船舶内装设计中的色彩运用

船舶内装设计在现在和过去的相当长的时间内不被重视,尤其是内装设计中的色彩设计更是被严重忽视。随着我国船舶建造综合能力的不断提升和船上人员对生活工作环境要求的日益提高,船舶居住和工作舱室的装饰显得格外重要。本着"以人为本"的理念论述了船舶内装人性化设计三个方面课题,并以我国设计制造的"海洋石油201"号大型海洋铺管船为例,说明该船内装设计以"海上彩虹"为主题,运用色彩学原理,结合人体工效学,突破传统,大胆创新,对该船的内装工程进行了包括舱室布置、内装方案效果图和施工节点在内的内装设计,取得了良好的效果。

AChR_(α211)的分泌表达及其对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用

目的 在毕赤酵母(P .pastoris)中分泌表达AChRα2 1 1 ,研究其对重症肌无力患者血清中AChRAb的清除作用。方法 以质粒pUC AChRα2 1 1 为模板,PCR扩增人AChRα2 1 1 DNA片段,插入真核表达载体pPIC9K中。重组质粒转入P .pastorisGS115后,经甲醇诱导分泌表达AChRα2 1 1 ,用SepharoseQ离子交换柱和Superdex 75分子排阻层析进行纯化。Westernblot和ELISA进行免疫活性分析后,将目的蛋白偶联于CNBr Sepharose 4B树脂上,研究该免疫吸附剂对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用。结果 双酶切鉴定和序列分析表明,AChRα2 1 1 DNA片段已正确插入到pPIC9K载体中。重组菌P .pastorisGS115 pPIC9K AChRα2 1 1 经甲醇诱导可分泌表达目的蛋白AChRα2 1 1 ,经阴离子交换柱和分子排阻层析可得95 %纯AChRα2 1 1 ,并制备成免疫吸附剂。Westernblot和ELISA分析表明,重组蛋白具有与天然AChRα亚基相似的免疫活性。免疫吸附实验表明该重组蛋白可特异性地去除肌无力患者血清中的AChRAb。结论 在P .pastoris中分泌表达并纯化重组蛋白AChRα2 1 1 ,制备成一种新的免疫吸附剂AChRα2 1 1 Sepharose ,可清除肌无力患者血清中的AChRAb。

八肋游仆虫中心蛋白的核磁共振研究

利用液体核磁共振方法对八肋游仆虫中心蛋白全长蛋白(EoCen),LC端结构域(EoCen-LC)和N端结构域(EoCen-N)进行了分析,并研究了蛋白与钙离子的相互作用情况.研究结果表明,未加入钙离子,全长蛋白,LC端结构域和N端结构域谱图重叠严重,峰型较差,说明未折叠成良好的三级结构,存在较大的构象交换或一定程度的聚集;与钙离子结合后全长蛋白,LC端结构域三级结构有所改善,但仍然无法用液体核磁共振方法进行进一步的结构研究.N端结构域与钙离子结合后谱峰分散性好,说明N端结构域具有较好的三级结构,能够应用核磁共振的方法进行结构解析.

SARS-CoV-2冠状病毒核衣壳蛋白的结构生物学研究进展

严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)引发的新冠肺炎(COVID-19)严重威胁着全球人类健康,研发特异性抗新冠肺炎药物迫在眉睫。在SARS-CoV-2病毒中,核衣壳蛋白含量最丰富,而且保守性高,它不仅可以将SARS-CoV-2基因组RNA组装成与病毒复制和繁殖密切相关的核糖核蛋白(RNP)复合物,还可以调控宿主细胞的免疫功能,是一个重要的药物靶标。本文综述了SARS-CoV-2病毒核衣壳蛋白的结构特征及其与RNA和其他蛋白质的相互作用,以及核衣壳蛋白在临床研究中的应用,以期为新冠肺炎的治疗提供新的药物靶点。

人β-防御素DEFB113的重组表达及活性鉴定

DEFB113为人β-防御素家族新成员,其生物学功能尚不清楚。为了探索一种可以较低成本和较高产量表达活性DEFB113多肽的方法,将编码DEFB113成熟肽的序列克隆到载体pTWIN1上,并转化至E.coliBL21(DE3)中进行表达。结果表明融合蛋白主要以可溶形式存在;重组载体中融合标签的几丁质结合域(CBD)和内含肽(intein)分别使亲和层析纯化和融合标签自剪切一步完成。最终得到DEFB113多肽的产率为6～7 mg/LLB。经活性鉴定,该重组DEFB113多肽对于S.aureus,E.coli K12D31和C.albicans均表现出较强的抑制作用;另外DEFB113无明显的溶血活性,是一种较理想的多肽抗生素。该研究为进一步研究DEFB113的生理功能以及其它人β-防御素结构与功能奠定了基础。

Raf激酶抑制蛋白的结构与功能研究进展

Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitory protein,RKIP)属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidy-lethanolamine binding protein,PEBP)家族,参与多种生理过程,可以交叉调控MAPK(mitogen-activatedprotein kinase)通路、GPCR(G-protein-coupled receptor)通路和NF-κB(nuclear factor-κB)信号通路。细胞信号转导通路的异常会促进肿瘤的发生与发展。RKIP在肿瘤发生、发展中发挥着重要作用,影响肿瘤细胞的转移和治疗,是一种新的肿瘤诊断标志物。开展RKIP的结构生物学研究有助于理解RKIP发挥生理功能的结构基础,对揭示人类重大疾病(肿瘤)的分子机制以及研发用于细胞信号转导异常相关疾病的药物,都有着极其重要的科学意义。主要阐述了RKIP的结构特点、生物学功能及其与肿瘤疾病的关系。