串联质谱技术在遗传代谢病筛查中的应用价值

目的探讨串联质谱(MS/MS)技术在遗传代谢病(IEM)筛查工作中的应用价值。方法利用MS/MS技术对4 135例可疑IEM患儿的血液样本进行氨基酸、酰基肉碱谱检测筛查。结果4 135例患儿筛查发现阳性病例102例,阳性率为2.5%。其中有机酸代谢病20例,占19.6%(20/102);氨基酸代谢病30例,占29.4%(30/102);脂肪酸氧化障碍疾病52例,占51.0%(52/102)。结论 MS/MS技术在IEM的筛查诊断中高效、准确,是IEM筛查的有效工具。

儿童急性髓系白血病FLT3-ITD突变分析及其临床意义

目的探讨FLT3-ITD在AML患儿的临床意义。方法收集我院2013年-2015年收治的45例AML患儿骨髓样本,提取全基因组DNA,采用PCR扩增产物克隆测序法检测FLT3-ITD基因突变情况,解析序列,整理并分析其插入的重复序列,同时分析FLT3-ITD阳性患儿的临床特征及对预后的影响。结果 45例初诊AML患儿中,FLT3-ITD突变阳性患儿4例(8.9%),表现为杂合突变和纯合突变,解析出4条插入序列,插入长度范围为18-99bp。阳性患儿伴染色体正常核型1例,异常核型3例,突变型患儿白细胞及骨髓原始细胞比例高于野生型患儿,差异有统计学意义,但在性别、年龄、血红蛋白、血小板无显著差异。结论 FLT3-ITD突变检测有助于急性白血病基因分型,是儿童AML预后不良的一个危险因素,可作为预后的分子标志物。

miR-194在增龄性胸腺萎缩中的表达及靶基因研究

目的:检测增龄性胸腺萎缩过程中miR-194与PTPN12的表达水平变化,并分析二者相互作用,阐明其中的分子调节机制。方法:选用C57BL/6小鼠,分为4组:1月龄组、6月龄组、10月龄组和19月龄组,每组6只,雌雄各半。麻醉后取出胸腺组织,用CD45抗体与LS柱吸附洗脱,筛选出胸腺上皮细胞。实时荧光定量PCR与Western blot方法检测随年龄增长,胸腺上皮细胞中miR-194与PTPN12基因的表达变化趋势。体外实验共转染miR-194与PTPN12荧光素酶报告载体到HEK293细胞内,分别于24、48 h后检测自发荧光值。结果:随月龄增长,miR-194表达出现下调趋势(P<0.05),而PTPN12基因表达出现上调趋势(P<0.05),且二者呈负相关性(P<0.05)。体外荧光素酶报告基因结果显示,miR-194与PTPN12基因3'UTR区域发生直接作用,并在48 h结合效率最高。结论:PTPN12是miR-194靶基因之一,参与了增龄性胸腺萎缩过程,是调节胸腺上皮细胞功能的重要因子。

Ikaros和FUT4在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及其相关性研究

目的:通过分析临床样本Ikaros功能状态与岩藻糖基转移酶Ⅳ(fucosyltransferaseⅣ,FUT4)表达水平的相关性,探讨Ikaros调控FUT4表达的可能分子机制,为儿童ALL的个性化治疗靶点提供理论依据。方法:采用巢式PCR及克隆测序法鉴定儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL) Ikaros的表达亚型,计算功能型比率;通过荧光定量PCR检测FUT4 mRNA的相对表达水平,以血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患儿的骨髓样本为对照组,利用ΔΔCt法分析初诊未治的ALL患儿FUT4相对表达水平;分析Ikaros的功能状态与FUT4表达的相关性。结果:110例ALL中,功能亚型Ikaros以Ikaros1(Ik1)和Ikaros2(Ik2)为主,无功能亚型以Ikaros6(Ik6)为主,其Ik6的表达率为20. 91%,其中3例患儿单纯表达Ik6(2. 73%);功能型与Ik6杂合表达比例为18. 18%,且在复发患儿中Ik6表达比例升高。初诊ALL的FUT4的表达水平高于对照组,随着治疗缓解其表达降低,复发患儿的FUT4表达升高。通过2者的相关性分析,Ikaros的功能型比例与FUT4呈负相关(r=-0. 6329),而Ik6的表达量与其成正相关(r=0. 6605)。结论:显性负向型Ik6是预后的独立危险因素,与儿童ALL复发密切相关,Ikaros调控FUT4的表达且呈负相关可能是儿童急性淋巴细胞白血病预后的机制之一。

宫内发育迟缓新生儿血代谢产物的研究

目的比较宫内发育迟缓(intrauterine growth restriction,IUGR)新生儿与适于胎龄儿(appropriate for gestational age,AGA)代谢产物水平的差异,探讨新生儿代谢产物的变化与IUGR的联系,以及新生儿组织和器官损害的可能的代谢机制,为临床干预提供理论依据。方法研究纳入2015年12月至2019年12月至江西省儿童医院新生儿科住院的320例IUGR新生儿与302例同期住院的适于胎龄儿,完善血串联质谱检查,比较两组新生儿代谢产物浓度的差异。结果与对照组相比,氨基酸代谢中缬氨酸、瓜氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸浓度明显增加,差异有统计学意义;肉碱代谢中游离肉碱、乙酰肉碱、丙酰肉碱、丁酰肉碱、已酰肉碱、辛酰肉碱、月桂烯酰肉碱、肉豆蔻酰肉碱、肉豆蔻烯酰肉碱、棕榈酰肉碱、棕榈烯酰肉碱、十八碳酰肉碱与十八碳烯酰肉碱浓度明显增加,差异有统计学意义。结论在IUGR新生儿中存在氨基酸和肉碱、酰基肉碱的代谢异常。

罕见病异戊酸血症的诊治进展与预防

2020年2月29日是第十三个国际罕见病日,目前世界上有超过7000种罕见病,其共同特征如下:⑴对人体危害大;⑵对症治疗的药物少导致药物难寻;⑶几乎没有有效的根治方法。由于罕见病的特殊性,加之儿童疾病诊断的复杂性,儿科疑难罕见病异戊酸血症(IVA)的诊治过程可谓“难上加难”,大多数罕见病进行正确的遗传咨询和产前诊断可有效预防。近年来基因组学、代谢组学的发展为诊治IVA提供了广阔前景。

胸腺发育与衰老相关基因调控的研究进展

胸腺是人体内重要的中枢免疫器官，是T淋巴细胞成熟的场所。在骨髓中产生的淋巴造血祖细胞通过血液进入胸腺，与胸腺基质细胞相互作用，最终形成成熟的CD4^＋／CD8^＋T细胞，返回到血液中参与细胞免疫。现在已发现许多基因参与胸腺发育、衰老，如Foxn1、Hox、Writ4等。这些基因在胸腺组织内形成一个网络，相互制约影响，调控着胸腺的发育及衰老。到目前为止，发育衰老的机制还不完全清楚，其在胸腺发育衰老过程中扮演着重要角色，因而研究胸腺发育衰老过程相关基因的调控机制非常必要。

46，XY，-9，＋der（9）t（4；9）（q21；p24）mat一例

患儿男，8个月，系第4胎第3产，足月低体重儿，出生时体重2．3kg，有窒息史。患儿生长发育迟缓，体重不足4kg，奶摄入量每次60mL。鼻梁宽，嘴小，下颚内收，双手大拇指异常，右手大拇指无指甲，左手大拇指指甲部分缺失。

质谱检测联合下一代测序在新生儿遗传代谢病诊断中的应用

目的评估质谱检测联合下一代测序在新生儿遗传代谢病诊断中的应用价值。方法回顾性分析江西省儿童医院新生儿科2017年3月至2019年9月收治的19例遗传代谢病新生儿的临床信息、血尿代谢产物检测及基因检测结果。血尿代谢产物分别通过液相色谱-串联质谱及气相色谱-质谱技术检测,全血样本采用基于下一代测序的新生儿遗传病基因panel检测。结果19例患儿中,有12例患儿的代谢产物质谱检测结果与基因检测结果一致;2例患儿的质谱检测结果与基因检测结果不一致;4例质谱检测未提示病种,经过基因检测得出与患儿临床表型部分相符的疾病诊断;1例未行质谱检测的患儿,因基因检测而考虑遗传代谢病诊断,并以此为依据进行随诊。结论质谱检测可以相对快速诊断遗传代谢病以指导临床治疗,而下一代测序可对质谱检测结果进行验证,并从基因角度解释病因,从而指导进一步治疗及遗传咨询。

环氧化酶-2基因启动子区甲基化水平在子宫内膜异位症中的作用

目的检测环氧化酶-2(COX-2)基因启动子区CRE位点甲基化状况,探讨其在子宫内膜异位症(EMs)发生中的作用。方法收集南昌大学第一附属医院40例子宫内膜异位症患者的子宫内膜作为病例组,同期40例正常子宫内膜作为对照组,采用焦磷酸盐测序技术检测病例组和对照组子宫内膜组织中COX-2基因启动子区CRE位点甲基化频率;采用实时定量PCR及免疫组化技术分别检测病例组和对照组子宫内膜组织中COX-2 mRNA及蛋白的表达;分析COX-2基因启动子区CRE位点甲基化频率与COX-2表达水平的相关性。结果对照组内膜组织COX-2基因启动子区CRE位点的甲基化频率(40.81%±6.10%)显著高于病例组(14.74%±2.84%),P<0.05;而对照组COX-2 mRNA表达水平(0.98±0.37)及蛋白表达水平(1.00±0.73)显著低于病例组的mRNA表达水平(2.63±0.44)及蛋白表达水平(2.74±1.18),P均<0.05。随着COX-2基因启动子区CRE位点甲基化频率升高,COX-2基因表达水平下降,二者呈负相关(P<0.05)。结论 COX-2基因启动子区CRE位点去甲基化与EM s患者在位内膜COX-2高表达相关,在EM s的发生、发展中具有重要作用,提示子宫内膜异位症是一种表观遗传性疾病。

4号环状染色体合并6、7号染色体平衡易位一例

患儿女．7岁．因健康体检来院就诊。患儿系第3胎第1产．足月低体重．出生时仅1．7kg，有窒息史。1岁6个月会独走，2岁会叫爸妈。来本院就诊时体检：身高体重无异常，五官无异常，心肺无异常．四肢无畸形。智力发育无异常，学习成绩中上等。现父30岁．母29岁．非近亲结婚。

尿黑酸尿症一家系基因诊断及分析

目的 探讨尿黑酸尿症的临床特征和基因突变特点.方法 收集先证者及其家系成员临床资料,尿气相色谱分析尿液,采用PCR方法对尿黑酸1,2-二氧化酶（HGD）基因所有外显子检测,确定基因突变位点,Polyphen软件预测其蛋白质功能,分析基因型与表型的关系.结果 患者临床表现仅尿液为红褐色,而无皮肤、关节及脏器改变,尿气相色谱提示尿黑酸尿症（AKU）,HGD基因检测提示该家系先证者的HGD基因第2外显子c.34A＞ C（p.N12H）及第4外显子c.240A＞ T（p.Q80H）及第12外显子c.910A ＞G（p.K304E）错义突变,先证者表型正常的母亲及姐姐发现携带第2外显子c.34A＞ C（p.N12H）错义突变,先证者表型正常的父亲发现携带第12外显子c.910A＞G（p.K304E）错义突变.蛋白质功能预测后提示2号外显子c.34A＞C（p.N12H）致病性突变位点.结论 此家系中先证者为HGD基因复合杂合子突变致病,其第2外显子c.34A＞C（p.N12H）来自于母亲,第12外显子c.910A＞ G（p.K304E）错义突变来自于父亲,其父母及姐姐均为表型正常的杂合子携带者.发现2个国际上尚未报道的新HGD基因突变（p.N12H与p.K304E）,且发病年龄最早,仅有黑尿表现.

一例Treacher-Collins综合征患儿的TCOF1基因突变检测

目的探讨1例Treacher-Collins综合征患儿的临床特征和基因突变特点。方法收集患儿及其父母的临床资料，并对TCOF1基因所有的外显子进行检测，分析其基因型与临床表型的对应关系。结果患儿主要临床表现包括颧骨发育不全、眼裂向外倾斜、小下颌、外耳发育不全、小耳、腭裂等。基因检测提示患儿携带TCOF1基因第14外显子c．2261insG（p．E95X）插入突变，既往未见报道。患儿表型正常的父母TCOF1基因全外显子检测未发现突变。结论明确了1例颅面畸形患儿的致病原因，为其遗传咨询和生育指导提供了依据。

178例儿童急性淋巴细胞白血病细胞与分子遗传学特征研究

目的研究儿童急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic 1eukemia，ALL）细胞与分子遗传学特征及临床意义。方法应用常规细胞遗传学、实时定量PCR、荧光原位杂交等技术，对178例儿童ALL细胞与分子遗传学特征进行分析，并探讨其临床意义。结果178例儿童ALL遗传学异常者92例占51.69％，其中融合基因TEL-AMLl／t（12；21）（pl3：q22）阳性35例（38.04％），BCR-ABL／t（9；22）（q34；q11）阳性9例（9.78％）；E2A／PBXl／t（1；19）（q23；p13）阳性9例（9.78％）；MLL-AF4／t（4；11）（q21：q23）阳性3例（3.26％；），HOXllL2／t（5；14）（q35；q32）阳性7例（7.61％）；SIL-TALl（1p32-）阳性5例（5.43％）、E2A-HLF／t（17；19）（q22；pl3）阳性1例（1.09％）。复杂核型异常4例（4.35％），包括：t（8；14）（q24；q32），der（15）t（1；15）（p11；q11）；t（6；10）（p25；p11），11p＋；t（2；14）（p11；q32），9p-；t（9；11）（q21；p15）。高超二倍体（48-65）17例（18.48％），近三倍体（65～78）2例（2.17％），其它有2p-／5p-／6p＋／9p-／9q-／10p-／1lp＋／17p＋／＋5／＋8等。结论儿童ALL具有其特有的细胞与分子遗传学特征，临床上将常规细胞遗传学、分子生物学、荧光原位杂交等技术等相结合，将对白血病的诊断、治疗选择和预后判断及微小残留病检测等具有十分重要的意义。

MAT2A基因在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨甲硫氨酸腺苷转移酶2A(MAT2A)在胃癌组织及癌旁组织中的表达及意义。方法:分别应用real-time PCR及Western blot技术检测48例胃癌组织和30例癌旁正常胃组织中MAT2A m RNA与蛋白的表达。结果:real-time PCR与Western blot结果显示,胃癌组织中MAT2A m RNA相对表达量明显高于癌旁正常胃组织(3.99±2.52 vs.1.17±1.04);MAT2A蛋白相对表达量明显高于癌旁正常胃组织(0.62±0.05 vs.0.20±0.02),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:MAT2A在胃癌组织中表达上调,提示其在胃癌发病机制中起了重要的作用,其作用机制值得进一步研究。

染色体复杂易位一例

患儿 男,3岁3个月，因精神发育迟缓就诊。查体：外貌无明显异常，身高、体最较同龄儿偏低，不会走路和说话，对外界反应差。细胞遗传学检查：在征得其监护人知情同意后，抽取患儿外周血样3mL,常规外周血淋巴细胞培养72h，制备染色体，G显带分析，计数30个分裂相，镜下分析15个分裂相。

染色体核型异常一家系两例

先证者女，12天。因“反应差、吃奶少，哭声小10余天”入院。先证者为第2胎第2产，足月顺产，无宫内窘迫史，羊水Ⅱ度污染，出生时无窒息。母亲23岁，体检无特殊，父母为非近亲婚配，表型无异常，否认家族遗传病史。查体：前额突起，枕部后突，上腭弓高，下颌短小。呼吸46次／分。剧哭时口唇发绀，心音低钝。原始反射减弱，四肢肌张力正常。

罕见的完全性8号三体综合征一例

患者 男，13岁，系第3胎第3产，孕43周顺产，无缺氧窒息史。因“多饮多尿13年，反复口腔溃疡10余年，发热1天”入院。查体：体重26kg，身高不详。慢性病容，眼间距宽，双眼外眦上斜，眼球稍突，外耳廓小，左手通贯掌，表情幼稚，反应迟钝。既往史：曾于当地医院进行双侧扁桃体摘除及“隐睾”手术。患者学习成绩差、多动。

染色体异常核型一例

患儿 女，9个月，系第3胎第3产，足月顺产，无窒息史。3个月会抬头，7个月会坐，现不会爬。无反复发热、腹泻和其他慢性疾病史。无多饮多尿，无夜间哭闹。体检；身高65．6cm，体重7．0kg，均低于同龄同性别儿童的第三个百分位数。

miR-181a在衰老萎缩的胸腺细胞中的表达及功能

目的探讨miR-181a在胸腺增龄性萎缩过程中的表达,及其与靶基因ZFP36l2的相互作用关系,阐明胸腺增龄性萎缩过程分子调节机制。方法 C57BL/6小鼠分为1月龄组、9月龄组、15月龄组,每组各6只。取出胸腺并分离细胞,经CD45抗体染色,LS柱吸附洗脱筛选出胸腺细胞。实时荧光定量PCR法检测胸腺细胞中miR-181a与靶基因ZFP36l2随年龄增长的表达变化趋势,并进行相关性分析。体外应用HEK293细胞转染荧光素酶报告载体,48 h后检测自发荧光值。结果随年龄增长,miR-181a呈现表达下调趋势(P<0.05),而靶基因ZFP36l2则呈现出表达上升趋势(P<0.05)。对miR-181a与ZFP36l2表达量进行相关性分析,发现两者呈负相关性(P=0.04)。体外细胞转染荧光素酶报告基因证实,miR-181a与ZFP36l2 3’UTR区域结合(P<0.05)。结论 miR-181a与靶基因ZFP36l2与胸腺增龄性萎缩过程密切相关,是调节胸腺细胞功能的重要因子。