CA4P诱导大肠癌细胞死亡机制研究及相关通路检测

为探究康普瑞汀磷酸二钠(CA4P)诱导大肠癌SW480细胞死亡机制及相关通路的检测,体外培养SW480细胞,分别给予不同浓度的CA4P进行刺激。采用CCK-8法测定不同浓度药物对SW480细胞活性的抑制率。采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)测定SW480细胞凋亡率。采用显微镜观察药物作用24、48h后细胞形态。采用Western blotting检测SW480细胞自噬相关蛋白LC3B、Atg7和Beclin-1的表达情况。Path Scan对相关的激活通路进行检测。CCK-8结果显示,药物浓度>50μmol/L时,体外CA4P对大肠癌细胞的抑制率呈递增趋势;FCM检测表明,CA4P作用后,细胞凋亡率无明显变化;显微镜观察在药物作用24h,48h后,SW480细胞的形态发生显著改变。Western blotting结果显示,CA4P刺激SW480使得自噬相关蛋白LC3B、Beclin-1、Atg7表达水平升高,差异具有统计学显著性意义(P<0.05),phospho-p53表达上调。PathScan结果表明,细胞内信号通路Erk1/2、Akt、p53被激活,AMPKα被抑制。CA4P诱导大肠癌细胞死亡可能是通过自噬途径,并且可能与Erk1/2、Akt、p53的上调和AMPKα的下调有关。

雷公藤甲素对人结肠癌细胞EKR1/2、Akt、p53及AMPKα磷酸化水平的影响

目的:观察雷公藤甲素(Tp)对人结肠癌细胞EKR1/2、Akt、p53及AMPKα等信号通路分子的影响。方法:体外培养人结肠癌SW480细胞,用40 nmol/L Tp刺激24 h,分别于刺激0、24 h时对细胞进行拍照,观察细胞形态,应用Path Scan分别检测细胞内信号通路分子ERK1/2的Thr202/Tyr204位点、Akt的Thr308和Ser473位点,AMPKα的Thr172位点及p53的Ser15位点的磷酸化水平,并通过Western blot验证p53蛋白在人结肠癌细胞SW480,SW620和HCT116细胞中的磷酸化水平。结果:40 nmol/L Tp刺激24 h后,人大肠癌SW480细胞变大、形态不规整、触角变长,细胞表型发生改变;Path Scan结果表明,Tp刺激24 h时,SW480细胞ERK1/2的Thr202/Tyr204位点、Akt的Thr308和Ser473位点及p53的Ser15位点磷酸化水平增高,AMPKα的Thr172磷酸化水平降低;Western blot实验结果显示,Tp刺激24 h时,人结肠癌SW480、SW620和HCT116细胞中p53蛋白的磷酸化水平上调。结论:Tp可能是通过ERK1/2、Akt、p53和AMPKα信号通路影响结肠癌细胞表型改变。

康普瑞汀磷酸钠对U87细胞增殖和迁移的影响以及信号通路研究

目的研究药物康普瑞汀磷酸钠(CA4P)对人胶质瘤细胞U87细胞增殖迁移的影响以及相关信号通路。方法体外培养U87细胞并用不同浓度的CA4P处理,CCK8方法检测不同药物浓度对细胞活性的影响,划痕和transwell实验检测不同药物浓度对U87细胞迁移能力的影响,Western blot检测不同浓度处理后U87细胞中E-Cadherin蛋白。Path Scan对相关激活的通路进行检测。结果 CA4P能够明显抑制体外U87细胞增殖。划痕和transwell实验表明CA4P能够在体外抑制U87细胞的迁移能力,CA4P浓度为50 nmol/L和100 nmol/L能显著抑制迁移(P<0.001)。不同浓度的CA4P作用细胞24 h后,E-Cadherin的蛋白水平随着CA4P的浓度增加而增高。Path Scan结果表明,细胞内信号通路Akt, Bad, SAPK/JNK, S6 ribosomal Protein被激活。结论CA4P能够抑制人U87细胞的增殖和迁移,并且可能与Akt, Bad, SAPK/JNK的上调和S6 ribosomal Protein下调有关。