一测多评法同时测定赶黄草浸膏中5种成分的含量

目的建立赶黄草浸膏中同时测定5种成分的一测多评含量测定方法。方法高效液相色谱法,采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%甲酸溶液梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),柱温30℃,检测波长280 nm。以乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷为内参物,建立赶黄草浸膏中该成分与没食子酸、短叶苏木酚酸、2,6-二羟基苯乙酮-4-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-木糖苷及槲皮素-3'-O-α-L-鼠李糖苷的相对校正因子,进行含量测定,实现一测多评,同时采用外标法测定这些成分的含量,比较计算值与实测值的差异,验证所建方法的准确性和可行性。结果 21批赶黄草浸膏中,除短叶苏木酚酸外,其他5种成分采用校正因子计算的含量值与外标法实测值之间无显著差异,可以用一测多评法进行含量测定。结论所建一测多评法可以用于赶黄草浸膏中特定的5种主要成分的含量测定。

蓍草化学成分研究

采用硅胶、凝胶和半制备液相等色谱方法对蓍草Achillea alpina L.地上部分进行化学成分研究。根据理化性质和波谱学方法鉴定化合物的结构分别为墙草碱（1）,8,9-dehydropellitorine（2）,（E,E）-2,4-undecadien-8,10-diynoic acid isobutylamide（3）,（E,E）-2,4-tetradecadien-8,10-diynoic acid isobutylamide（4）,sintenin（5）,4＇,5,7,8-四甲氧基黄酮（6）,猫眼草黄素（7）,芒柄花素（8）,aurantiamide（9）,金色酰胺醇酯（10）,artemetin（11）,半齿泽兰素（12）。化合物1~5为首次从该植物中分离得到,化合物6~10为首次从该属中分离得到。

URA3基因影响青蒿酸酿酒酵母工程菌中试发酵产量

CRISPR/Cas9基因编辑技术已经被广泛应用于工程酿酒酵母的基因插入、基因替换和基因敲除,通过使用选择标记进行基因编辑具有简单高效的特点。前期利用CRISPR/Cas9系统敲除青蒿酸生产菌株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)1211半乳糖代谢负调控基因GAL80,获得菌株S.cerevisiae 1211-2,在不添加半乳糖诱导的情况下,青蒿酸摇瓶发酵产量达到了740 mg/L。但在50 L中试发酵实验中,S.cerevisiae 1211-2很难利用对青蒿酸积累起到决定性作用的碳源-乙醇,青蒿酸的产量仅为亲本菌株S.cerevisiae 1211的20%–25%。我们推测因遗传操作所需的筛选标记URA3突变,影响了其生长及青蒿酸产量。随后我们使用重组质粒pML104-KanMx4-u连同90 bp供体DNA成功恢复了URA3基因,获得了工程菌株S.cerevisiae 1211-3。S.cerevisiae 1211-3能够在葡萄糖和乙醇分批补料的发酵罐中正常生长,其青蒿酸产量超过20 g/L,与亲本菌株产量相当。研究不但获得了不加半乳糖诱导的青蒿酸生产菌株,同时首次发现了营养缺陷型标记URA3基因显著影响乙醇补料的中试发酵中青蒿酸的产生,也为酵母作为底盘来进行其他天然产物的生产提供了借鉴。

荜茇总生物碱对6-羟基多巴胺致帕金森病大鼠多巴胺能神经元损伤的保护作用研究

目的:探讨荜茇总生物碱(PLA)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)致帕金森病(PD)大鼠多巴胺能神经元损伤的保护作用及其可能的机制。方法:采用脑立体定位单侧纹状体注射6-OHDA建立大鼠PD模型,将PD大鼠随机分为PLA组(PLA50 mg·kg-1·d-1),美多巴组(美多巴50 mg·kg-1·d-1)及模型组,每组15只,每日灌胃给药1次,连续6周。另随机选取15只大鼠在纹状体仅注射生理盐水作为假手术组。采用阿朴吗啡(APO)诱导的大鼠旋转及转棒实验进行行为学观察,酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化检测大鼠黑质中TH阳性细胞数及纹状体中TH阳性纤维密度,用分光光度法检测大鼠黑质及纹状体内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、还原型谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)的含量。结果:帕金森病大鼠在APO诱导后出现明显的旋转行为,且在转棒上的滞留时间缩短,黑质区TH阳性细胞数及纹状体TH阳性纤维密度明显减少,组织内SOD,GSH-Px,CAT的活力降低,NOS的活力升高,MDA,NO含量升高,GSH含量降低,总抗氧化能力明显降低。PLA能明显改善PD大鼠的行为学异常,增加黑质区TH阳性细胞数及纹状体TH阳性纤维密度,提高组织内SOD,GSH-Px,CAT的活力,降低NOS的活力,降低MDA和NO含量,提高GSH含量,总抗氧化能力明显提高。结论:荜茇总生物碱对6-OHDA致PD模型大鼠的黑质细胞具有保护作用,其机制可能与抗氧化活性有关。

荜茇中3种酰胺类生物碱在不同种属肝微粒体中代谢差异比较

胡椒碱、荜茇明宁碱和墙草碱是荜茇中主要的酰胺类成分,具有多种药理活性,为了阐明这3种成分在5个不同种属肝微粒体中代谢差异,应用超高效液相色谱串联双压线性离子阱静电场轨道阱质谱(UHPLC-LTQ-Orbitrap MS)采集这3种化合物的全扫描图谱及二级三级质谱图,获取碎片离子信息,结合其质谱裂解规律和代谢产物精确质谱数据,比较3种生物碱分别在人、恒河猴、比格犬、大鼠以及小鼠肝微粒体中的代谢差异,并快速鉴定出3个胡椒碱代谢产物、2个荜茇明宁碱代谢产物及1个墙草碱代谢产物。结果显示荜茇中酰胺类生物碱的主要代谢类型为苯环亚甲二氧基开环脱甲基和氧化反应,且在种属间存在代谢率差异,该研究为进一步阐明荜茇中胡椒碱类成分体内代谢途径提供了实验依据。

链霉菌的全局调控蛋白DasR

链霉菌能够产生多种次级代谢产物,在临床、农牧业、生物技术等领域具有重要应用价值;对链霉菌的调控网络进行深入研究有助于提高次级代谢产物产量并发现新的次级代谢产物。链霉菌中次级代谢产物生物合成按调控通路分为全局调控与途径特异性调控,其中全局调控蛋白可靶向多种通路特异调控基因和生物合成基因,在链霉菌的生命活动中发挥着更为普遍、复杂的调控作用,因此研究全局调控对于进一步认识链霉菌复杂调控网络具有重要的意义。DasR作为一个全局调控蛋白,在链霉菌的营养感应、形态分化和次级代谢中发挥重要作用,本文从DasR的结构、序列和作用特点出发,联系链霉菌生长发育和次级代谢、营养感应和初级代谢等讨论DasR的研究进展。