良方温经汤调控CHCHD4表达干预寒凝血瘀型子宫内膜异位症乏氧的机制研究

探究良方温经汤调控卷曲螺旋卷曲螺旋结构域4(CHCHD4)表达干预寒凝血瘀型子宫内膜异位症(EMs)乏氧环境的机制。冰水浴法制备大鼠寒凝血瘀证模型,在此基础上采用自体移植法建立EMs模型,随机分为模型组,良方温经汤低、中、高(4.7、9.4、18.8 g·kg^(-1))剂量组及少腹逐瘀汤组,另设假手术组,每组10只,灌胃给药4周。造模期间进行大鼠一般情况观察及阴道涂片,并通过激光散斑衬比成像(LSCI)检测耳部及子宫血流,以判断寒凝血瘀证候情况;给药结束后观察大鼠一般情况;卡尺测量异位病灶面积;免疫组织化学法检测CHCHD4、乏氧诱导因子^(-1)α(HIF^(-1)α)的定位与表达;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹检测CHCHD4、HIF^(-1)αmRNA和蛋白的表达。进行EMs患者异位子宫内膜间质细胞(ESCs)原代培养,构建CHCHD4过表达质粒,转染建立CHCHD4过表达ESCs模型。将细胞分为空白对照组、CHCHD4过表达组、CHCHD4过表达+空白血清组、CHCHD4过表达+良方温经汤血清组,蛋白免疫印迹检测CHCHD4、HIF^(-1)α蛋白的表达;并检测葡萄糖消耗量及乳酸水平;MTT法检测细胞增殖情况。结果显示,与正常大鼠相比,造模大鼠出现精神萎靡、饮食饮水减少、动情周期紊乱,耳部及子宫微血管血液循环受阻等寒凝血瘀证候表征。与假手术组相比,模型组大鼠异位病灶隆起,CHCHD4、HIF^(-1)αmRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,各给药组大鼠寒凝血瘀表征均有改善,异位病灶面积显著缩小(P<0.05或P<0.01),CHCHD4、HIF^(-1)αmRNA与蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。在细胞模型中,与空白对照组相比,CHCHD4过表达组CHCHD4、HIF^(-1)α蛋白表达、葡萄糖消耗量、乳酸水平、细胞增殖活力均显著升高(P<0.01);与CHCHD4过表达组相比,空白血清组各指标均无明显变化,良方温经汤血清组CHCHD4、HIF^(-1)α蛋白表达显著下降(P<0.05或P<0.01),葡萄糖消耗量、乳酸水平显著降低(P<0.01),细胞增殖活力显著下降(P<0.01)。由上可知,良方温经汤对寒凝血瘀型EMs的治疗作用与降低CHCHD4表达,进而改善异位病灶及异位ESCs乏氧有关。