HPV16 E6-295T/G和E6-350T/G变异位点影响IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的研究

目的探讨HPV16(Human Papillomavirus Type 16)E6-295T/G和E6-350T/G变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。方法在宫颈癌细胞C33A(HPV阴性)中分别转染真核表达载体295G/350G-GV230、295T/350G-GV230和295T/350T-GV230作为实验组,以NC-GV230作为对照组。通过免疫组织化学法、Western blot方法检测HPV16 E6295T/G、350T/G不同变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。通过IBM SPSS Statistics 26软件对实验结果进行统计学分析,P<0.05为差异具有统计学意义,免疫组织化学法定量采用image J软件进行阳性细胞计数。结果Western blot结果显示,免疫分子干扰素κ(Interferon Kappa,IFNκ)的表达,HPV16 E6-295G/350G变异组较HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组降低(P<0.01,P<0.05)。HPV16 E6-295G/350G变异组的免疫分子主要组织相容性复合体I类(Major Histocompatibility Complex Class I,MHC-I)的表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(P<0.05)。HPV16 E6-295G/350G变异组的信号转导子和转录激活子1(Signal Transducer and Activator of Transcription 1,STAT1)表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(P<0.05,P<0.01)。变异组HPV16 E6-295G/350G与HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G变异组相比,干扰素调节因子9(Interferon Regulatory Factor 9,IRF9)表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论HPV16病毒E6蛋白质可以降低IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9的蛋白质表达水平,E6基因T295G/T350G变异降低这些分子的表达作用最强。

HPV16 E6-295T/G、E7-647A/G多态性位点在子宫颈鳞状细胞癌中的分布及对IRF9的影响

目的分析HPV16 E6-295T/G、E7-647A/G多态性位点在子宫颈鳞状细胞癌、CIN1中的分布及其在维吾尔族与汉族之间分布的特点,探讨其对IRF9表达的影响。方法运用TCGA数据库及GEPIA数据库分析子宫颈癌组织中IRF9的表达及其与子宫颈癌肿瘤分级的关系;收集67例维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌标本、21例维吾尔族CIN1标本,68例汉族子宫颈鳞状细胞癌标本和28例汉族CIN1标本,从收集的标本中提取DNA,PCR扩增E6和E7基因,PCR产物纯化后测序。将HPV16感染阳性标本进行免疫组化检测。结果维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌标本中E6-295T/G、E7-647A/G变异分别为31例(46.27%)和7例(10.45%),CIN1标本中变异均为7例(33.33%)。汉族子宫颈鳞状细胞癌标本中E6-295T/G、E7-647A/G变异分别为12例(17.65%)和37例(54.41%),CIN1变异分别为8例(28.57%)和13例(46.43%)。维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌中E6-295T/G的变异率高于汉族,汉族子宫颈鳞状细胞癌中E7-647A/G的变异率高于维吾尔族,差异有统计学意义(P<0.05)。CIN1标本中两民族间E6-295T/G和E7-647A/G的变异,差异无显著性(P>0.05)。免疫组化结果显示,IRF9在子宫颈鳞状细胞癌中的表达高于CIN1(P<0.05),子宫颈鳞状细胞癌标本中E6-295G/E7-647A变异组IRF9的表达高于E6-295T/E7-647G变异组和E6-295T/E7-647A未变异组(P<0.05)。E6-295T/E7-647G变异组与E6-295T/E7-647A未变异组的IRF9蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。结论维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌中HPV16 E6-295T/G变异高于汉族,汉族E7-647A/G变异高于维吾尔族。HPV16 E6-295T/G变异的子宫颈鳞状细胞癌组织中IRF9蛋白表达水平增高,可能在子宫颈癌的发生中起作用。

SH3BGRL1基因过表达在宫颈癌中对癌细胞增殖和迁移影响的研究

目的探讨在宫颈癌细胞及组织中的SH3BGRL1基因表达水平和其与HPV感染的关系,探讨SH3BGRL1基因对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响。方法采用正常宫颈组织、宫颈癌组织制作芯片,并采用免疫组织化学染色(Immunohistochemical staining,IHC)分析SH3BGRL1蛋白质的表达情况。转染SH3BGRL1过表达质粒的细胞为实验组,转染空载体质粒为对照组(NC组)。Western blot方法检测SH3BGRL1基因在HeLa、SiHa两种癌细胞中蛋白质表达水平,qRT-PCR方法检测SH3BGRL1基因在HeLa、SiHa两种癌细胞中的mRNA的表达水平,使用第二代杂交俘获技术(hybrid capture system-2,HC-2)检测组织中HPV感染情况;MTT实验方法对宫颈癌细胞的增殖能力进行测定,划痕实验方法检测宫颈癌细胞的迁移能力。结果SH3BGRL1在宫颈癌组织中低表达,差异明显(P<0.05);但该基因的表达与HPV感染未发现明显关联(P>0.05);在基因SH3BGRL1过表达之后,SiHa、HeLa细胞增殖水平受到抑制,且迁移水平也受到抑制(P<0.05)。结论SH3BGRL1基因在宫颈癌组织和细胞中表达水平降低,促进了细胞的增殖和迁移,且与HPV感染无关联。提示该基因可能参与了宫颈癌的发生和发展。