应用多重实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌毒力基因

目的:建立一种快速、准确、简便的蜡样芽胞杆菌毒力基因检测方法,为蜡样芽胞杆菌更深入的研究提供依据和便利。方法:采用Taq Man探针法设计了三重hbl A,hbl C,hbl D基因,三重nhe A,nhe B,nhe C基因,三重ces,ent FM,bce T基因的多重实时荧光PCR体系检测蜡样芽胞杆菌毒力基因。结果:多重体系对蜡样芽胞杆菌毒力基因的检测具有良好的特异性和灵敏性,其最低检出限为63 CFU/m L。结论:利用上述体系对蜡样芽胞杆菌的毒力基因进行检测能够省时省力,特异性、灵敏性良好,具有实际应用价值。

季铵盐类消毒剂的研究现状

季铵盐类消毒剂是一种常用消毒剂,已被应用于各个领域。该研究介绍了季铵盐类消毒剂的发展,消毒机理,检测方法及在使用时的注意事项,并对季铵盐类消毒剂应用前景及研究作了展望。

银白色葡萄球菌实时荧光PCR快速检测方法的建立

本文旨在建立一种银白色葡萄球菌实时荧光 PCR 检测方法。根据对 NCBI 数据库中银白色葡萄球菌非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因序列的比对分析,设计引物及探针,并基于所设计的引物及探针建立 Taq-man 实时荧光 PCR 的检测方法。结果表明,本实验所建立的方法特异性较强,只能扩增出银白色葡萄球菌,而其他常见菌株的检测结果呈阴性;该方法的灵敏度为10 pg/uL;在对实验室通过传统方法分离的金黄色葡萄球菌的检测中,发现有两个分离菌株呈阳性,其结果与普通 PCR 方法完全一致。

巧克力样品中沙门氏菌的检测与结果分析

目的验证分析本实验室对巧克力样品中沙门氏菌的检测能力。方法依据沙门氏菌检测作业指导书进行样品前处理,依据GB4789.4-2016、SN/T1870-2016进行后续检测和结果判断。结果样品通过荧光定量PCR法进行快速初筛,同时结合传统平板分离法和飞行时间质谱技术进行鉴定,将鉴定的阳性沙门氏菌进行血清分型,检出2种血清型O:4,12H:i,2和O:60H:r,e,n,x,z15,分别为鼠伤寒沙门氏菌和Ⅲb沙门氏菌。结论所采用的方法能准确鉴定出沙门氏菌,获得满意结果。

重组酶聚合酶扩增技术的研究进展

重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase polymerase amplification,RPA)是一种新型等温扩增技术,它具有操作简单、特异性强、灵敏度高、检测时间短等优点,并且可以在非实验室的条件下完成核酸扩增。目前,RPA技术已经被应用于病毒、致病菌、转基因等领域的检测。通过对不同核酸扩增技术的对比,对RPA技术的扩增原理,RPA扩增产物的检测方法以及RPA技术应用研究作一简单综述,旨在为RPA技术的推广提供参考。

单核细胞增生李斯特氏菌荧光RPA快速检测方法的建立

本研究旨在建立一种单核细胞增生李斯特氏菌荧光RPA检测方法。根据NCBI数据库中单核细胞增生李斯特氏菌actA基因序列的比对分析,选择同源性好的片段以此设计引物及探针,建立检测单核细胞增生李斯特氏菌的RPA方法。结果表明,本实验所建立的方法特异性较强,只对单核细胞增生李斯特氏菌为检出阳性,对其他菌种无扩增,该方法的检出限为2.3×10^(2)cfu/mL。在对实验室分离菌株的检测分析中,其检测结果与传统培养方法一致。在人工污染样品的检测中,经过4 h的培养后,该方法可检出DNA浓度为2.3×10^(2)cfu/mL的单核细胞增生李斯特氏菌。本研究所建立的RPA检测方法能够快速准确地检测单核细胞增生李斯特氏菌,为基层检测实验室和疫情突发现场单核细胞增生李斯特氏菌的快速检测提供了有效的技术手段。

食品中蜡样芽胞杆菌的毒力基因分布研究

为了调查食品中蜡样芽胞杆菌的污染状况,以及蜡样芽胞杆菌毒力基因的分布情况,采集了419份食物样本,从样本中分离出32株蜡样芽胞杆菌,检出率为7.6%。应用hblA、hblC、hblD三重基因,nheA、nheB、nheC三重基因,entFM、bceT、ces三重基因的实时荧光PCR体系对阳性样本进行毒力基因分布的研究。结果表明,hblA、hblC、hblD基因检出率均为53.1%;nheA、nheB、nheC基因检出率分别为65.6%、90.6%、87.5%;entFM和bceT基因检出率分别为96.9%和53.1%,携带ces基因的仅有一株。除ces基因外,携带上述八种基因的菌株占阳性菌株的34.4%。