大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞的分离培养及鉴定

探讨大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞体外分离及培养的方法。采用0.125%胰酶多次消化法收集新生SD大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞。高内涵细胞成像法检测细胞增殖能力,免疫荧光、Western blot和RT-PCR法检测波形蛋白表达水平,CD90标记成纤维细胞、鉴定细胞纯度。最新消化分离得到的细胞呈亮球形,轮廓清晰,单个散在或聚集成团分布,90 min后即有大量细胞贴壁,其中部分细胞已开始伸展。5~6 d可形成单层细胞,传代后的细胞呈长纺锤形或多边形。波形蛋白表达呈强阳性。传代3代的细胞培养体系中成纤维细胞约占87%。含5%FBS的DMEM/F12培养基培养24 h即可检测到细胞的大量增殖。胰酶消化法是获得大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞的有效方法。

超声成像在早期干燥综合征小鼠模型中的评价作用

目的探讨颌下腺超声成像在评价干燥综合征动物模型中的作用和价值。方法C57BL/6雌性小鼠建立SS模型,在d 0、21、28和35对小鼠进行唾液量、饮水量和体重等常规指标检测,d 35检测颌下腺指数和病理改变,同时运用Vevo 2100小动物超声成像系统,对小鼠颌下腺部位进行纵切超声检查,将超声观察的结果与常规检测指标进行相关性分析。结果SS小鼠造模d 28出现唾液量明显减少,饮水量显著增多,造模d 35颌下腺指数明显增高,颌下腺发生SS的典型病理改变。超声扫描在造模d 21发现SS组颌下腺轴面面积较正常组明显增高,颌下腺血流信号在d 28和35较正常组明显增多。分析表明,超声观察的结果与常规检测指标具有显著相关性。结论颌下腺的超声成像可能为SS动物模型的评价提供早期线索和半定量指标,在评价SS模型病情变化以及治疗SS的药效学基础研究中具有重要价值。

G蛋白偶联受体激酶2杂合子敲除小鼠构建及表型鉴定

目的应用CRISPR/Cas9技术构建G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)杂合敲除(GRK2^+/-)小鼠,用于疾病病理机制及药物靶点研究。方法构建靶向敲除GRK2基因的载体,在体外将先导RNA和Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,在小鼠GRK2基因的第3个外显子上造成基因突变,通过PCR及基因测序测定F0代基因型,成功获得13bp和19bp敲除两种GRK2^+/-小鼠。因GRK2纯合子敲除胚胎期死亡,将19bp敲除F0代小鼠与C57BL/6小鼠回交,获得稳定的19bp敲除F1代GRK2^+/-小鼠用于扩繁及实验。结果 GRK2^+/-小鼠基因型稳定,体重较同龄C57BL/6小鼠低,Western blot检测证实GRK2^+/-小鼠心脏、脾脏、胸腺、肝脏、巨噬细胞及肾脏组织中GRK2蛋白的表达均显著降低。结论该研究利用CRISPR/Cas9技术成功建立了GRK2^+/-小鼠模型,为进一步研究GRK2在多种脏器、细胞发育中的作用,疾病发病机制及药物作用靶点提供了重要的动物模型。