不同裂解方法对精子蛋白提取的影响

为寻找一种适合精子蛋白提取的裂解方法,运用不同的裂解液、裂解时间和裂解方法,分别对相同数量的精子进行总蛋白的提取,BCA法测蛋白含量,考马斯亮蓝染色检测蛋白丰度和质量,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白进行分离,免疫印迹法检测LonP1和β-actin抗体蛋白表达以验证裂解液的裂解效果.结果表明,精子蛋白提取时使用1%SDS裂解液,在尽可能短时间进行超声后煮沸,可以提取到最大限度的高浓度、高质量的精子蛋白,这无疑为后续研究精卵作用机制、受精机理的最终探明奠定了坚实的基础。

男性精浆超氧化物歧化酶活性与各项精子参数间的关系

目的研究不育患者精浆中超氧化物岐化酶(SOD)的活性与精液质量分析各参数之间的关系,为男性不育患者寻找病因及诊治方法提供依据。方法从2016年1～6月到泰州市人民医院生殖中心进行精子质量分析的男性中,排除无精症患者及因炎症感染而导致的白细胞增多者,随机抽取84例,对其精子参数及其精浆超氧化物岐化酶活性进行相关性研究。其中少弱精35例,单纯弱精症29例,正常精液质量(正常组) 20例,采用计算机辅助精子分析仪检测精子浓度、精子活力、精子总数等参数,用全自动生化分析仪检测精浆SOD的活性。结果单纯弱精组、少弱精组精子前向运动百分比(PR%)、浓度、总数与正常组的精液质量比较差异均具有统计学意义(P均<0.05);单纯弱精组和少弱精组精子浓度、总数、精液体积水平比较差异均具有统计学意义(P均<0.05);精浆SOD活性与精子总数、精液浓度、精子前向运动百分比呈正相关(r=0.254、0.336、0.251,P均<0.05);与年龄及精液体积呈负相关(r=-0.264、-0.376,P均<0.05);少弱精组精浆SOD活性为(18.6±5.83) U/mL,单纯弱精组为(18.72±4.60) U/mL,均明显低于正常组的(22.4±3.69) U/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);较高年龄组患者的SOD活性为(18.62±5.07) U/mL,略低于年轻组的(20.11±5.37) U/mL,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论精浆SOD活性与精子质量密切相关;SOD活性检测有助于分析精液质量下降的原因,帮助临床制定治疗方法。

表达肝细胞生长因子的人羊水干细胞培养上清对大鼠神经元突起生长的影响

目的:研究过表达肝细胞生长因子(HGF)的人羊水干细胞(hAFSCs)上清对大鼠背根节(DRG)神经突起生长的影响。方法:从人羊水中收集贴壁细胞,通过形态学、核型分析、细胞表面标记分子等手段鉴定hAFSCs。将hAFSCs通过慢病毒感染得到过表达HGF的HGF-hAFSCs,收集hAFSCs、HGF-hAFSCs培养上清液离心过滤后,用于DRG组织块的体外培养,比较hAFSCs上清液组(hAFSCs)、HGF-hAFSCs上清液组(HGF-hAFSCs)和单纯培养液对照组(Control)对DRG神经突起生长的影响。结果:从人羊水中获得的细胞为hAFSCs,其核型正常,表达CD29、CD73、CD90和CD105,不表达CD34和CD45。慢病毒感染72 h后,感染效率约为80%;经嘌呤霉素筛选,获得过表达HGF的hAFSCs。实时荧光定量PCR结果显示,HGF-hAFSCs组与hAFSCs组的细胞相比,HGF mRNA表达有显著性增加(P<0.001);ELISA结果显示,HGF-hAFSCs上清液中HGF的浓度为3.44 ng/ml,而hAFSCs组上清液未检测到,两组有显著性差异(P<0.001)。DRG组织内神经突起长度测量显示,hAFSCs组突起为(251.60±7.94)μm,对照组突起为(52.74±6.77)μm,而HGF-hAFSCs组突起较前两组都显著增加(P<0.001),为(306.57±10.65)μm。结论:利用hAFSCs过表达HGF有助于DRG神经的突起生长,为神经损伤提供了一种新的治疗方案。

小粒径、高稳定性多隔室及单室脂质体的制备工艺

小粒径、高稳定性脂质体的获得一直是脂质体制备技术领域的一项挑战。本文以脂质体粒径为控制对象,利用单因素实验对影响粒径的工艺条件进行优化,采用改良薄膜分散法制备了粒径约110 nm的多隔室脂质体,并通过上调水合温度至55℃,实现了多隔室脂质体向单室脂质体的转变。利用动态光散射(DLS)和透射电子显微镜(TEM)技术检测了多隔室和单室脂质体的分散性和形态学特征。该制备工艺简单,可同时实现多隔室脂质体和单室脂质体的制备,制得的多隔室和单室脂质体粒径均一、表面光滑、分散性良好,且具有良好的储存稳定性。

生理浓度氨基酸对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

猪作为模式动物由来已久，相比小鼠等模式生物在生理学、解剖学和疾病发生机理等方面都与人类极为相似，使其比其他动物模型在生物和医学研究领域中都具有更为重要的研究和应用价值。体外成熟卵母细胞是进行转基因猪、克隆猪等研究的重要支持，

弱畸精子症患者精子中GLUT8的表达与精子活力和形态参数关系的研究

目的研究弱精子症(asthenospermia,AS)和畸形精子症(teratozoospermia,TM)患者精子与正常生育男性精子中葡萄糖转运蛋白8(glucose transporter 8,GLUT8)蛋白表达量的变化,探讨精子GLUT8的表达与精子活力和畸形率的相关性。方法采用计算机辅助精液分析系统(computer-assisted semen analysis system,CASA)检测各组精子运动参数。采用病例对照研究法,收集2019年12月至2020年12月期间于南京医科大学附属泰州市人民医院生殖医学科男科实验室进行精液常规检查的AS患者、TM患者和正常生育男性的精液样本。按照精子活力,分为正常活力精子(normal viable spermatozoa,NV)组与AS组,每组各41例;按照精子形态,分为正常形态精子(normal morphology spermatozoa,NM)组与TM组,每组各40例。Western blotting法检测NV组、AS组、NM组和TM组的GLUT8蛋白表达量,每组各7例。比较NV组和AS组、NM组和TM组的精子参数及GLUT8蛋白的差异。结果NV组与AS组的精子参数在活力(62.64%±37.14%、14.41%±11.89%)、活动率(55.62%±12.31%、24.40%±12.75%)、曲线速度[(87.22±12.35)µm/s、(71.75±18.35)µm/s]、直线速度[(40.22±6.71)µm/s、(33.31±10.11)µm/s)]、平均路径速度[(47.66±6.49)µm/s、(39.42±10.25)µm/s]、精子头部侧向摆动幅度[(2.88±0.49)μm、(2.35±0.66)μm]差异均有统计学意义(均P<0.001)。NM组与TM组的精子参数比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。AS组中GLUT8蛋白表达量(0.26±0.17)低于NV组(2.00±0.38,P=0.002),而NM组与TM组GLUT8蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论AS患者精子中GLUT8蛋白表达量下降,而GLUT8蛋白的表达量与精子形态之间并无显著联系。