英夫利西单抗糖化方法开发验证及其在抗体药物中的普适性

糖化修饰作为一种非酶促糖修饰,通过还原性糖与蛋白氨基酸残基共价结合,普遍发生于抗体药物生产储存等过程,显著影响产品的质量和功能。硼酸亲和色谱(BAC)法虽然是检测抗体类药物糖化修饰的主要技术,但其在测定英夫利西单抗糖化水平时仍面临准确性挑战,在一定程度上限制了其在质量控制上的应用。本研究深入探讨了影响该单抗BAC方法准确性的因素,明确了该单抗BAC方法糖化检测不准确的原因,并针对性地对流动相的组成和浓度进行了优化,成功开发出一种改进的BAC方法,能够更精准地测定英夫利西单抗的糖化水平。该方法的准确性通过基于质谱的快速多属性方法确认,并通过了严格的方法学验证。验证结果表明该方法具有良好的准确性、精密度、耐用性等。此外,通过对不同类型抗体药物进行测试,证实了该方法在常规抗体药物糖化检测中的广泛适用性。本研究不仅解决了英夫利西单抗糖化检测的关键技术难题,还确认了该方法的普适性,为抗体药物的质量控制提供了一种新的快速、准确的技术方案。这些研究结果有助于推动相关技术平台的改进和理念的更新,从而增强产品开发和质控的能力。

多糖基化位点抗体药物质控中基于单四级杆的多属性分析方法开发与验证

抗体药物已经成为生物制品的重要组成部分,此类产品具有复杂的质量属性,尤其是具有多糖基化位点的抗体药物,其质量控制面临更高挑战。虽然基于高分辨质谱的多属性分析方法(Multi-attribute method,MAM)已在抗体药物的质控中获得应用,但针对多糖基化位点抗体药物的快速且简便的检测技术仍较为少见。开发一种基于单四级杆的多属性分析方法,对于提升这类药物的质控效率具有重要意义。本研究以双糖基化位点的治疗类单抗CMAB009为模型。通过基于高分辨质谱的MAM对其进行了深入的预表征分析,成功获取了其主要质量属性。随后将预表征信息用于基于单四级杆的MAM开发。该方法在单次分析中有效监测了多种产品质量属性,其准确性通过基于高分辨质谱的方法进行了确认。随后我们对该方法进行了严格的方法学验证。验证结果显示,该方法具有良好的专属性、线性、准确度以及精密度等。基于单四级杆的MAM不仅有效地解决了多糖基化位点单抗药物的多属性检测难题,还展示了一定的方法普适性,为不同糖基化位点抗体药物的质量控制提供了一种新的、简便的技术方案。本研究结果预计将推动相关技术平台的改进和理念的更新,从而增强产品开发和质控的整体能力。

CMAB008单抗阳离子交换层析介质寿命确认

建立CMAB008单抗阳离子交换层析介质寿命确认方案,采用实际生产的工艺参数进行缩小模型试验,以考察Nuvia S层析介质循环到100次后性能指标是否还满足层析需要。按试验方案对Nuvia S层析介质循环到100次,分别在使用前和循环使用20、40、50、70、90次后对层析柱进行柱效测试,以考察随循环次数的增加,层析介质对层析柱对称因子、理论塔板数的影响;对循环1、50、51、100次的层析柱进行动态载量测试,以考察洗脱峰的ProteinA残留、HCP残留、DNA残留、毛细管电泳纯度、SEC-HPLC纯度、活性、得率;以不同上样量20 g/L(循环8、48、88次)、40 g/L(循环9、49、89次)、80 g/L(循环61、62、63次),不同流速110 cm/h(循环10、50、92次)、149 cm/h(循环61、62、63次)、170 cm/h(循环11、59、93次)上样以考察阳离子交换层析洗脱峰SEC-HPLC纯度、得率。结果表明,使用前和循环使用20、40、50、70、90次后柱效测试中,所有对称因子、理论塔板数均在可接受的标准范围内;循环1、50、51、100次的层析柱动态载量测试结果均高于起始动态载量的80%,洗脱峰的ProteinA、HCP、DNA残留检测未有增高趋势,毛细管电泳纯度、SEC-HPLC纯度、活性以及得率未有下降趋势;上样测试结果显示,洗脱峰的SEC-HPLC纯度无明显变化趋势,均大于98%,得率均大于85%。这些试验结果均符合CMAB008原液纯化工艺要求。结果证明,Nuvia S层析介质在循环到100次时性能指标没有下降,可以保证纯化CMAB008单抗产品的质量。

聚山梨酯对单克隆抗体药物稳定性的影响

目的评估不同种类聚山梨酯(polysorbate,PS)对不同类型单克隆抗体(简称单抗)药物稳定性的影响。方法以单抗A(mAbA,IgG1前抗体药物)、单抗B(mAbB,IgG1单抗)和单抗C(mAbC,IgG1单抗,Fc N297A突变)3种单抗药物作为模型蛋白,分别在其各自的制剂处方中添加不同种类及含量的PS,并进行影响因素研究,通过考察蛋白聚集体、不溶性微粒等质量属性的变化,综合评估PS对单抗药物稳定性的影响。结果PS20和PS80对于抑制3种单抗中聚集体及电荷异质体生成的作用差异均无统计学意义(P>0.05),而mAbB中加入PS80,mAbC中加入PS20分别能起到更显著地抑制不溶性微粒增加的效果(P<0.05);PS20含量的高低对于mAbC中电荷异质体及不溶性微粒的检测指标影响显著(P<0.05)。结论不同类型的单抗对于不同种类、不同含量PS的敏感度不同,因此在进行单抗制剂处方设计时,需选择适合的PS种类及含量,以进一步提高单抗制剂的稳定性。