丁苯酞通过调控小胶质细胞极化在创伤性脑损伤中的神经保护作用研究

目的探讨丁苯酞(3-n-butylphthalide,NBP)调控小胶质细胞的极化反应在创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)中的神经保护作用。方法27只雄性C57BL/6小鼠随机分配(每组9只):假手术组(Sham组)、TBI组和NBP组。Sham组和TBI组给予植物油,NBP组给予等体积100 mg/kg NBP,连续7 d。TBI 3 d后,干湿法评估小鼠脑水肿情况。应用改良版小鼠神经功能缺损评分(modified neurological severity score,mNSS)和转棒疲劳试验检测小鼠损伤后第1、3、7天的神经运动功能恢复情况。免疫组织化学法检测损伤皮层周围区抗离子钙结合适配器分子1(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1)标记的小胶质细胞活化情况,免疫荧光染色检测胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)标记的星形胶质细胞活化情况。通过精氨酸酶1(arginase-1,Arg1)与Iba1,诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)与Iba1双重染色检测损伤周围区小胶质细胞M1型标志物iNOS及M2型标志物Arg1表达量;髓鞘碱性蛋白(myelinbasic protein,MBP)检测髓鞘丢失情况。结果在mNSS实验中,与TBI组相比,NBP组分别在损伤后的第1、3、7天,小鼠的神经功能评分逐渐降低(P第1天=0.012,P第3天=0.020,P第7天=0.046)。与TBI组相比,匀速转棒实验中,NBP组小鼠停留时间在第3天明显增加(P第3天=0.031);随NBP治疗时间延长,小鼠在第3、7天的匀加速转棒中停留时间逐渐增加(P第3天=0.024,P第7天=0.039)。进一步病理学检测发现,与TBI组相比,NBP组损伤区MBP髓鞘完整性部分恢复(P=0.026);小胶质细胞和星形胶质细胞活化标志物Iba1和GFAP表达降低(PIba1=0.007,PGFAP=0.006)。与TBI组相比,NBP组M2型的小胶质细胞标志物Arg1增加(PArg1/Iba1=0.004),M1型小胶质细胞标志物iNOS减少(PiNOS/Iba1=0.012)。结论NBP可以部分改善TBI小鼠神经运动功能障碍,抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的活化,促进小胶质细胞向M2表型的极化。

硫化氢对创伤性脑损伤小鼠的神经保护作用研究

目的探究硫化氢(hydrogen sulfide,H_(2)S)通过改善神经炎症反应对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)小鼠神经保护作用的影响。方法将27只雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,假手术组(Sham组),模型组(TBI+Nacl组)和硫化氢的供体NaHS给药组(TBI+NaHS组),每组各9只。采用重锤坠落法构建中度TBI模型。干湿法测量脑含水量评估脑水肿情况,改良小鼠神经功能缺损评分(modified Neurological Severity Score,mNSS)和转棒实验评估小鼠的神经运动功能,免疫荧光染色检测小胶质细胞和星形胶质细胞的反应活性以及髓鞘丢失情况。结果TBI后1天,与Sham组相比,TBI模型组脑含水量明显增多[(85.62±2.35)%比(77.91±1.86)%,P=0.0237]。与TBI组相比,TBI+NaHS组脑含水量降低[(78.69±0.17)%比(85.62±2.35)%,P=0.0338]。TBI后第1,3和7天,与TBI组相比,TBI+NaHS组小鼠mNSS分值逐渐降低(P_(第1天)=0.0002;P_(第3天)=0.0019;P_(第7天)=0.0019)。匀速转棒实验中,与TBI组相比,TBI+NaHS组小鼠第1天和第7天转棒停留时间增加(P_(第1天)<0.0001;P_(第7天)=0.0347)。匀加速转棒实验中,与TBI组相比,TBI+NaHS组小鼠第1天,3天和7天转棒停留时间明显增加(P_(第1天)=0.0001;P_(第3天)=0.0007;P_(第7天)<0.0001)。TBI后7天,与TBI组相比,TBI+NaHS降低了小胶质细胞标志物离子钙结合衔接分子1(ionized calcium binding adapter molecule,IBA1)和星形细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达(P_(IBA1)=0.0172;P_(GFAP)=0.0006),同时NaHS增加了髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)水平(P=0.002)。结论H_(2)S可通过降低胶质细胞的免疫活性,减少神经炎症的发生和提高髓鞘的完整性,进而改善TBI小鼠的神经运动功能。