衰老相关基因Klotho的研究进展

随着衰老研究及分子生物学的迅猛发展,衰老机制的研究已经走向分子与基因水平。Klotho基因是哺乳动物体内第一个过表达延长生命、低表达加速衰老的衰老抑制基因。Klotho基因在抗衰老及衰老相关疾病的发生中发挥着极为重要的作用,现将这方面的研究综述如下。

钩“益火补土”法之隐微

依据五脏分属五行而论,心属火,脾属土,火与土者母子相生也。火不生土,应有心火或命门之火衰微,不能温煦脾土及外因所致脾胃寒盛火微之分,其益火之法亦当有补心、温肾以暖脾土之别。对益火补土法内涵的阐释虽观点颇不相同,但旨在为治疗脾土疾病提供新思维。

复合因素法建立肾脾阳虚大鼠模型的实验观察

目的观察肾脾阳虚模型大鼠的血清指标变化及温补脾肾方药的调节作用。方法 40只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、维生素E组和桂附理中丸组,造模采用氢化可的松肌注加大黄水煎液灌胃复制肾脾阳虚大鼠模型、维生素E组灌胃V-E混悬液,桂附理中丸组灌胃桂理丸混悬液。结果肾脾阳虚大鼠血清SOD活力显著下降、MDA含量明显升高(P<0.01)。结论肾脾阳虚可导致氧自由基过量聚积,脂质过氧化产物增多进而发生衰老。

肾气丸药理作用与机制的相关研究进展

肾气丸始载于《金匮要略》,为温补肾阳的代表方,全方由肉桂、附子(制)、熟地黄、山茱萸(制)、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻八味中草药组成,具有温助肾气,补肾助阳的功效。现代药理表明,肾气丸可改善肾藏象系统功能、调节内分泌、增强免疫、抑制炎症等功效,具有较好的延缓衰老的功效。

多元化教学法在中医基础理论教学中的实践浅谈

中医基础理论不仅是关于中医学的基本理论、基本知识的学科,也是阐释和介绍中医学基本思维方法的课程。基于中医基础理论课程自身的特点,开展灵活运用、有机组合多元教学法的实践,使其发挥最佳教学效果,以期达到让学生更好的学习与掌握中医基础理论。

从内质网应激角度研究竹节参总皂苷对自然衰老大鼠结肠炎症反应的调节作用

目的:观察竹节参总皂苷对自然衰老大鼠结肠炎症反应的影响,并从内质网应激反应研究其可能机制。方法:将SD雄性大鼠分为5组:青年组(6月龄)、自然衰老组(24月龄)及竹节参总皂苷低、中、高剂量组。采用D-乳酸试剂盒检测大鼠血清D-乳酸水平,RT-PCR法检测各组结肠炎症因子IL-1β、TNF-α mRNA表达,Western blot法检测各组结肠COX-2和内质网应激反应标志蛋白GRP78、CHOP和p-eIF2α的表达。结果:与青年组比较,自然衰老大鼠血清D-乳酸水平,结肠炎症因子IL-1β、TNF-α mRNA水平,COX-2蛋白表达水平,内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP、p-eIF2α表达均显著增高,给予竹节参总皂苷干预后大鼠血清D-乳酸水平,结肠炎症因子IL-1β、TNF-α mRNA水平,COX-2和内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP、p-e IF2α表达与自然衰老组比较均显著降低。结论:自然衰老大鼠肠黏膜屏障功能发生障碍,结肠存在炎症反应和内质网应激反应,而竹节参总皂苷可降低肠道炎症,其机制可能与降低内质网应激反应相关。

从AMPK介导的自噬研究淫羊藿总黄酮对自然衰老大鼠小肠屏障功能的调节作用

目的:从AMPK介导的自噬探讨淫羊藿总黄酮对自然衰老大鼠小肠屏障功能的调节作用。方法:SD大鼠按其不同发育阶段分为6月龄成年对照组,24月龄衰老组及淫羊藿总黄酮低、中、高剂量(10、20、60 mg/kg)组。用D-乳酸试剂盒检测各组血清D-乳酸含量;采用免疫组化检测各组小肠Claudin-1、Occludin、p-AMPK表达情况;Western blot检测小肠自噬相关蛋白Lc3Ⅱ、Beclin1表达情况。结果:与成年组比较,衰老组血清D-乳酸含量显著升高,小肠Claudin-1、Occludin、p-AMPK、Lc3Ⅱ、Beclin1表达显著降低(P<0.01);与衰老组比较,淫羊藿总黄酮中、高剂量组血清D-乳酸水平显著降低,小肠紧密连接蛋白与自噬相关蛋白的表达显著升高(P<0.01)。结论:淫羊藿总黄酮可能通过上调AMPK介导的自噬,增加肠上皮细胞间紧密连接蛋白的表达,从而改善衰老大鼠肠道黏膜屏障功能障碍。

淫羊藿总黄酮对衰老大鼠小肠干细胞及其微环境的调节作用

目的:探讨淫羊藿总黄酮对衰老大鼠小肠干细胞及其微环境变化的调节作用。方法:SD大鼠按其不同发育阶段分为6月龄成年组、24月龄衰老组及淫羊藿总黄酮低、中、高剂量组。采用常规HE染色,高碘酸-Schiff试剂(PAS)染色,免疫组化(荧光),Western bolt检测各组别小肠干细胞数量,增殖分化功能及其微环境相关信号的变化。结果:与成年组比较,衰老组小肠绒毛长度、隐窝深度、V/C值、杯状细胞数量及PCNA表达量降低,小肠干细胞数量显著减少,干细胞微环境Wnt/β-catenin和BMP信号均呈下调趋势。给予淫羊藿总黄酮后,与衰老组比较,小肠隐窝干细胞数量有所增加,增殖分化功能有所提升,表现为绒毛长度、隐窝深度、V/C值、杯状细胞数量及PCNA表达量增加,小肠干细胞微环境Wnt/β-catenin和BMP信号均呈上调趋势。结论:衰老过程中,小肠干细胞数量减少,增殖分化功能降低,干细胞微环境信号通路的蛋白表达减少;淫羊藿总黄酮可改善小肠干细胞的增殖分化功能,上调干细胞微环境Wnt/β-catenin和BMP信号通路相关蛋白表达。

肾脾阳虚对实验大鼠血清SOD活力、MDA含量及海马组织形态的影响

目的采用肌注氢化可的松和灌胃大黄水煎液复合方法复制肾脾阳虚模型大鼠,观察肾脾阳虚对大鼠血清SOD活力、MDA含量及海马组织形态的影响。方法 40只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、维生素E组和桂附理中丸组。正常对照组大鼠肌肉注射生理盐水,同时灌胃生理盐水,其余组大鼠肌肉注射氢化可的松,同时灌胃大黄水煎液,维生素E组灌胃维生素E混悬液,桂附理中丸组灌胃桂附理中丸混悬液,共30 d。检测血清SOD活力、MDA含量,在透射电镜下观测海马CA1区超微结构的变化。结果肾脾阳虚模型组大鼠血清SOD活力显著低于正常对照组、MDA含量显著高于正常对照组(P<0.01),桂附理中丸组大鼠血清SOD活力明显高于模型组(P<0.05),而MDA水平明显低于模型组(P<0.05)。肾脾阳虚模型大鼠大脑海马CA1区细胞器及神经元出现衰老表现,桂附理中丸组大鼠海马CA1区细胞轮廓清晰,无细胞器及神经元细胞衰老征象,用药效果明显优于维生素E组。结论模型组大鼠出现血清SOD活力降低、MDA含量增多,说明肾脾阳虚可导致氧自由基过量聚积,脂质过氧化终产物增多,进而发生衰老。肾脾阳虚模型大鼠海马细胞衰老的病理改变明显,表明肾脾阳虚可导致大鼠衰老,并与海马神经元细胞受自由基攻击受损密切相关。温补肾脾方药可以提高机体的抗氧化能力,减轻自由基损伤,改善大脑海马组织神经元细胞的病理改变,从而延缓其衰老进程。

衰老对大鼠小肠形态学及黏膜免疫相关细胞数量的影响

目的探讨大鼠小肠黏膜形态学及黏膜免疫相关细胞数量的增龄变化。方法雄性SD大鼠按发育阶段不同分为6月龄成年组和24月龄老年组,每组10只。采用常规HE染色,高碘酸-Schiff试剂(PAS)染色对肠黏膜结构进行观察及相关指标的测量,并对免疫相关细胞的数量和分布进行检测。结果随着年龄的增长,小肠各段绒毛高度、黏膜层厚度均降低,空肠与回肠不同月龄绒毛高度变化差异有统计学意义(P<0.05)。十二指肠隐窝深度随月龄增加而增加,差异无统计学意义(P>0.05)。空肠、回肠隐窝深度随月龄升高显著降低(P<0.05)。十二指肠、空肠绒毛高度/隐窝深度(V/C值)随月龄增加均显著性降低(P<0.05),回肠V/C值增大,但差异无统计学意义(P>0.05)。相同月龄不同肠段相比,绒毛高度、绒毛宽度、黏膜层厚度以及肌层厚度从十二指肠到空肠、回肠呈现递减趋势。随着年龄增长,上皮内淋巴细胞和杯状细胞均减少。相同月龄不同肠段相比,上皮内淋巴细胞和杯状细胞的数量从十二指肠到回肠逐渐增多。结论在衰老过程中,小肠的形态学结构发生了一系列的退行性改变,黏膜免疫相关细胞的数量减少,黏膜免疫功能有所下降。

肾气丸对衰老大鼠小肠干细胞及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的调节作用

目的:探讨肾气丸对衰老大鼠小肠干细胞及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的调节作用。方法:使用SD大鼠,根据不同发育阶段分为6月龄成年对照组、22月龄衰老模型组及肾气丸低、高剂量组。采用HE染色观察小肠基本形态及测量相应指标,采用免疫组织化学法检测各组大鼠小肠PCNA、Bmi 1、β-catenin、GSK-3β的表达情况。结果:与成年组比较,衰老模型组绒毛长度、绒毛宽度、隐窝深度、绒毛/隐窝值(V/C值)均显著降低,PCNA、Bmi 1、β-catenin表达显著降低,而GSK-3β表达显著升高。与衰老模型组比较,肾气丸各组绒毛长度、绒毛宽度、隐窝深度、绒毛/隐窝值(V/C值)均显著升高,PCNA、Bmi 1、β-catenin表达显著均升高,GSK-3β表达显著降低。结论:肾气丸可改善衰老大鼠小肠干细胞增殖功能并上调Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达。

肾脾阳虚对实验大鼠脑组织Klotho基因表达的影响

目的通过采用肌注氢化可的松和灌胃大黄水煎液复合方法复制肾脾阳虚模型大鼠,观察肾脾阳虚对模型大鼠大脑海马组织形态及Klotho基因表达的影响,探讨肾脾阳虚模型大鼠衰老的机制。方法 40只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、维生素E组和桂附理中丸组。正常对照组大鼠肌肉注射生理盐水,同时灌胃生理盐水,其余组大鼠肌肉注射氢化可的松,同时灌胃大黄水煎液,维生素E组灌胃维生素E混悬液,桂附理中丸组灌胃桂附理中丸混悬液,共30 d。透射电镜下观测海马CA1区超微结构的变化。取大脑海马组织实时荧光定量PCR检测Klotho mRNA的表达,Westernblot法和免疫组织化学染色方法检测Klotho蛋白表达。结果肾脾阳虚模型大鼠大脑海马CA1区细胞器及神经元出现衰老表现,桂附理中丸组大鼠海马CA1区细胞轮廓清晰,无细胞器及神经元细胞衰老征象,用药效果明显优于维生素E组。与正常对照组比较,模型组大脑海马Klotho表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,桂附理中丸组大鼠Klotho表达水平明显升高(P<0.05)。结论肾脾阳虚模型大鼠大脑海马细胞衰老的病理改变明显,表明肾脾阳虚可导致大鼠衰老。肾脾阳虚可导致模型大鼠大脑海马Klotho表达水平下降,温补肾脾方药可上调Klotho的表达,改善大脑海马组织神经元细胞的病理改变,发挥延缓衰老的作用。Klotho蛋白低表达是肾脾阳虚模型大鼠衰老的可能机制。

大鼠不同部位小肠形态学的增龄变化

目的：观察大鼠小肠增龄形态学的改变.方法：选择3、9、24月龄大鼠小肠组织制作石蜡切片,H-E染色,显微镜下测量小肠绒毛高度（V）、隐窝深度（C）、V/C值、绒毛宽度、黏膜层厚度、黏膜下层厚度、肌层厚度.结果：从十二指肠到回肠,绒毛宽度、绒毛高度、黏膜层厚度、V/C值依次下降而隐窝深度则依次上升.大鼠空肠和回肠绒毛高度、隐窝深度、黏膜层厚度,从3月龄到9月龄呈增高趋势,9月龄到24月龄降低.空肠和回肠绒毛宽度随月龄升高呈下降趋势.回肠黏膜下层厚度随月龄增高而降低,空肠3月龄到9月龄呈降低趋势,24月龄稍有升高但低于3月龄.十二指肠绒毛高度、隐窝深度、黏膜层厚度、黏膜下层厚度24月龄最高,绒毛宽度3月龄到9月龄呈降低趋势,24月龄增高但低于3月龄.小肠肌层厚度3月龄到9月龄呈增长趋势,9月龄到24月龄降低.结论：随着年龄的增长,大鼠小肠管壁发生一些形态学的退行性改变如肌层厚度变薄,绒毛宽度变窄,空肠和回肠绒毛高度、黏膜层厚度和隐窝深度降低.

“肾脾相关”的理论内涵

整体观念是中医的指导思想,认识肾脾及其相互关系也应从此出发。肾脾不单单是两个脏,它们各自都存在于一个复杂的系统即"肾藏象"和"脾藏象"中,肾脾分别是这两个系统的核心,两者关系包括经脉相通、肾阳温煦脾阳、谷气充养阳气、共主水液代谢、共司气血化生5个方面。了解肾脾的生理、病理特点及其相互关系,对指导临床实践具有重要的意义。

肾脾虚损导致衰老的机理探析

五脏是人体生命活动的中心,五脏生理功能正常,则人的生命活动就正常,从而维持人的健康与长寿。反之,如果五脏虚损,五脏的生理功能失常,则人的生命活动就失常。

温补肾脾方药对肾脾阳虚模型大鼠Akt信号通路的影响

目的:通过采用肌注氢化可的松和灌胃大黄水煎液复合方法复制肾脾阳虚模型大鼠,观察温补肾脾方药对肾脾阳虚模型大鼠大脑海马组织形态及Akt/FOXO3a信号通路的影响,探讨肾脾阳虚模型大鼠衰老的可能机制。方法:40只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、维生素E组和桂附理中丸组。正常对照组大鼠肌肉注射生理盐水,同时灌胃生理盐水,其余组大鼠肌肉注射氢化可的松,同时灌胃大黄水煎液,维生素E组灌胃维生素E混悬液,桂附理中丸组灌胃桂附理中丸混悬液,共30 d。取其大脑海马组织,透射电镜下观测海马CA1区超微结构的变化。Westernblot法和免疫组织化学染色方法检测Akf、FOXO3a蛋白表达。结果:肾脾阳虚模型大鼠大脑海马CA1区细胞器及神经元出现衰老表现,桂附理中丸组大鼠海马CA1区细胞轮廓清晰,无细胞器及神经元细胞衰老征象,用药效果明显优于维生素E组。与正常对照组比较,模型组大鼠大脑海马磷酸化Akt蛋白表达明显升高(P<0.05>,磷酸化FOXO 3a蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,桂附理中丸组大鼠大脑海马磷酸化Akt蛋白明显降低(P<0.05),磷酸化FOXO 3a蛋白显著降低(P<0.01)。结论:肾脾阳虚模型大鼠大脑海马细胞衰老的病理改变明显,肾脾阳虚可导致模型大鼠磷酸化的Akt、FOXO3a蛋白表达增强,降低机体的抗氧化能力,从而导致衰老。温补肾脾方药可以抑制Akt、FOXO3a蛋白的磷酸化,增强抗氧化酶活力,改善大脑海马组织神经元细胞的病理改变,发挥延缓衰老的作用。

肾气丸对衰老大鼠十二指肠黏膜消化酶的影响

目的:探讨肾气丸对衰老大鼠十二指肠黏膜消化酶的影响及其可能机制。方法:使用SD大鼠,根据不同发育阶段分为6月龄青年对照组,22月龄衰老模型组及肾气丸低、高剂量组。采用酶组织化学染色法检测各组大鼠十二指肠黏膜碱性磷酸酶IAP活性;采用RT-PCR检测各组大鼠十二指肠IAP、乳糖酶Lct、小肽转运体1(PepT1)、Notch配体Jagged1、Notch信号核转录因子Rbpj、小肠上皮分化标记物Villin mRNA的表达;采用PAS染色法检测各组大鼠十二指肠上皮杯状细胞数量。结果:与青年对照组比较,衰老模型组十二指肠IAP活性及IAP、Lct、PepT1、Jagged1、Rbpj、Villin mRNA表达均降低,上皮杯状细胞数量增多。与衰老模型组比较,肾气丸高剂量组IAP活性显著升高,肾气丸高、低剂量组IAP、Lct、PepT1、Jagged1、Rbpj、Villin mRNA表达显著升高,上皮杯状细胞数量显著减少。结论:肾气丸可改善衰老大鼠十二指肠黏膜消化酶的表达,其机制可能为上调十二指肠Notch信号使吸收细胞分化增多,并提高十二指肠黏膜上皮分化能力。

衰老对小肠结构与功能影响的研究进展

小肠是消化系统重要的组成部分。在自然衰老过程中,小肠会发生一系列退行性改变,这些改变是老年人诸多消化道疾病发生发展的基础。深入研究衰老对小肠结构与功能的影响,对提高小肠相关疾病的诊疗水平具有重要意义。本文拟就衰老对小肠结构与功能影响的研究进展做一综述。

竹节参总皂苷对自然衰老大鼠小肠上皮细胞紧密连接蛋白的调节作用及其机制研究

目的:研究竹节参总皂苷对衰老大鼠肠道上皮细胞紧密连接蛋白表达的调节作用及其可能机制。方法:SPF级SD大鼠分为成年组(6月龄)、衰老模型组(24月龄)及竹节参总皂苷高、中、低剂量组5组。免疫组织化学方法检测各组大鼠回肠上皮细胞间紧密连接蛋白Occludin、ZO-1,抗氧化应激相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO-1,线粒体相关蛋白Sirt1、PGC-1α,及p-AMPK蛋白的表达情况。结果:与成年组大鼠比较,自然衰老大鼠Occludin、ZO-1、Nrf2、HO-1、NQO-1、Sirt1、PGC-1α、p-AMPK蛋白表达均显著降低(P<0.01)。与自然衰老大鼠比较,竹节参总皂苷各组大鼠Occludin、ZO-1、Nrf2、HO-1、NQO-1、Sirt1、PGC-1α、p-AMPK表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:自然衰老大鼠细胞间紧密连接蛋白表达减少引起的回肠黏膜屏障功能障碍可能与线粒体氧化应激密切相关,而竹节参总皂苷可能通过调节衰老大鼠线粒体氧化应激的水平,从而上调肠上皮细胞间紧密连接蛋白的表达,改善衰老大鼠肠道黏膜屏障功能障碍。