以可转化人工染色体(TAC)载体为基础的百脉根基因组文库的构建及筛选

可转化人工染色体(transformation-competentartificial chromosome,TAC)载体是具有克隆和转移大片段DNA特征的新型载体,是植物基因克隆和转化的有效工具。该研究把它用于豆科植物百脉根(Lotus japonicus)基因组文库的构建。此文库由1.8×105个克隆组成,平均插入片段大小为15 kb左右,约覆盖百脉根基因组6倍。文库保存在12块96孔板中,每个孔中约含150个不同的重组克隆。用与花发育相关的同源基因Ljcenl片段为探针,筛选得到6个阳性克隆,酶切后验证这些阳性克隆,结果表明这些克隆含有同一个基因片段。此基因组文库可直接用于植物转化,为百脉根功能基因组的研究打下基础。

当谈论电影作者时,我们在谈论什么

听两位老师一说，我觉得他们是真正的作者。我是个教书匠，是一个学究型的人。我在想，就从整个纪录片历史来讲，其实从上个世纪20年代到30年代弗拉哈迪的《北方的纳努克》，一直到后面的60年代，成为一个主流话语的“直接电影”和“真实电影”的新势头，形成了一个轴心话语。为什么在后来的三十多年的纪录片中会形成一个“直接电影”的新势头，或者说是以观察体的电影为主，这么一个现象，我到现在也没有想清楚。

诱导多能干细胞体外向生精细胞自发分化潜能的研究

目的:探讨诱导多能干细胞(iPS)体外培养自发分化过程中生精细胞相关基因的表达,评估iPS体外向生精细胞自发分化的潜能。方法:经类胚体(EB)形成,体外诱导iPS向生精细胞分化,实时定量PCR和PCR检测生精细胞相关基因的表达。结果:实时定量PCR和PCR结果显示iPS经EB形成诱导分化后生精细胞不同时期的相关基因均有不同程度表达。iPS体外培养自发分化后生精细胞相关基因出现4种时间表达特征:Oct4基因表达量呈波浪状上升;Dppa3和Stra8基因表达量随诱导时间延长而下降;Dazl基因表达量呈波浪状下降;减数分裂前期基因Tex14、Msy2,减数分裂期基因Scp1、Scp3以及单倍体基因Akap3随着诱导时间延长先表达增加,而后表达下降。结论:iPS在经EB自发分化过程中表达生精细胞不同时期的相关基因,并且表达雄性配子单倍体基因,具有向雄性配子的分化潜能。

小鼠睾丸消化细胞异体移植重构生精小管的研究

目的:采用免疫缺陷小鼠作为受体,通过对小鼠睾丸消化细胞异位移植后不同时期移植物的研究,观察生精小管重构、生精细胞归巢及精子发生情况。方法:取新生ICR小鼠的睾丸消化成单细胞悬液,将其与Matrigel基质胶混匀后移植于雄性裸鼠背部皮下,术后裸鼠行去势。移植后分别于4、6、8、10周处死5只裸鼠,计算移植成功率,取移植物测量直径,并进行HE染色和免疫组化检测,观察生精小管的重构、生精细胞归巢及精子发生情况。结果:20只受体鼠接受睾丸消化细胞移植后全部存活。睾丸消化细胞移植后10周内可见明显隆起的包块,包块直径由第4周的(3.91±0.71)mm增加到(6.69±0.50)mm,移植物表面有血管生成。对移植物石蜡切片进行HE染色可见生精小管样结构,部分生精小管管腔内可见由精原细胞发育至精子细胞的各级生殖细胞,未见明显精子产生。对8周移植物进行免疫组化观察,可见生殖细胞标志物Mvh、支持细胞标志物Gata4和间质细胞标志物P450Scc表达。结论:新生小鼠睾丸消化细胞移植于裸鼠背部皮下后可重构生精小管,为研究睾丸组织工程及睾丸发育和精子发生过程中睾丸各组成细胞之间的相互作用提供了理想的研究模型。

百脉根LjCYC1基因克隆及其蛋白核定位(英文)

通过筛选百脉根(Lotus japonicus)基因组文库,克隆了UjCYC1(Lotus japonicus Cycloidea-like1)基因。LjCYC1是金鱼草(Antirrhium)CYC(Cycloidea)基因的同源基因,CYC属于TCP[TB1(teosinte branched 1),CYC,PCFs(PCF1 and PCF2)]基因家族,编码转录调控子控制金鱼草花的对称性。基因组序列分析表明,LjCYC1的开放阅读框(ORF)由两个外显子和一个内含子组成,其cDNA编码的LjCYC1蛋白包含了370个氨基酸。蛋白序列分析显示,LjCYC1包含一个TCP结构域和一个R结构域,属于TCP结构域蛋白家族的CYC/TB1亚家族;LjCYC1氨基酸序列与CYC相比,一致性和相似性分别为39.0％和42.6％。不同长度的LjCYC1-cDNA与报告基因GUS融合后,通过粒子轰击(particle bombardment)方法在洋葱表皮细胞瞬时表达融合蛋白,观察到包含了TCP结构域的融合蛋白能够进行细胞核定位,提示LjCYC1可能作为转录因子行使功能;TCP结构域自身不能完成核定位过程,还需要结构域两侧旁邻氨基酸序列的协助。

Ndrg1基因缺失对腰椎到骶椎结构转换的影响

目的研究Ndrg1和Ndrg2基因在老鼠脊椎发育过程中的作用。方法以Ndrg1－／－鼠和Ndrg1／2－／－鼠为模型，取胚胎期10．5 d野生型胚胎，应用整体胚胎原位杂交技术确定Ndrg1、Ndrg2基因在小鼠体节的表达谱。取10．5 d的Ndrg1－／－和野生型鼠胚胎，应用整体胚胎原位杂交技术和实时定量聚合酶链式反应（qRT‐PCR）技术检测 Hoxc8、Hoxc9、Hoxc10、Hoxc11基因在体内的表达。将出生后6 d的Ndrg1－／－、Ndrg1／2－／－、野生型鼠窒息处死后，去除皮肤、内脏及结缔组织，对骨架进行阿尔新蓝和茜红素染色，观察小鼠椎体同源转换情况。结果在胚胎期10．5 d ，Ndrg1在颈椎和胸椎体节处显著表达，在腰椎和骶椎体节处表达相对较弱，而Ndrg2在腰椎和骶椎体节处有较强表达，在颈椎和胸椎体节处表达较弱。Ndrg1－／－鼠可育，且无明显生长缺陷。骨架染色结果表明，Ndrg1－／－鼠在L6～S1过渡区域发生椎体同源转变，而在 Ndrg1／2－／－鼠中也发生类似转变。与 Ndrg1－／－或Ndrg2－／－鼠相比，Ndrg1／2－／－鼠在脊椎特性上无叠加缺陷表现。此外，与野生型鼠相比，Ndrg1－／－鼠Hoxc8～11基因表达水平改变。结论 Ndrg1基因在腰椎到骶椎体节过渡区域特化过程中起一定作用，且与Ndrg2基因在脊椎分化过程中无冗余作用。

中国怪诞人格:狂士、隐士文化批判

中国文化史上有许多可以称之为“怪才”的个体和趣味相投的怪诞群体。从“独与天地精神往来”逍遥自在的庄子们到不为五斗米折腰的陶渊明、“薄名教、任自然”的嵇康、阮籍,后世“怪才”也代有辈出,明清之际,又有李贽以其“童心”本色表现其充满冲突与失衡的人格力量,而多才多艺的徐文长也因政治迫害狂而自杀九次,最终写出“如寡妇之夜哭”的鬼文,郑板桥在民间的种种传奇早足以塑造出一个捉摸不透的“半仙”形象,“一官归去来,三绝诗书画”的人怪、艺绝都是标准人辈无法步其后尘的。至于怪诞的群体,魏晋有“竹林七贤”,拈花微笑整日隐逸山林。

其实对话并没有开始

以1990年吴文光的《流浪北京》算起，中国独立纪录片的发展已经历了22年（今年2012年），这22年关于纪录片的争论有如下几次：①1997年陈汉元提出的“故事与状态”；②1990年吕新雨提出的“纪录片与中国现实”；③近些年吴文光提出的“影像书写”，梳理这三次纪录片理论的脉络与细节不是本文的核心，以后再写。这几年，关于纪录片争论比较多的有两个：纪录片的方法与纪录片的伦理。

中国独立纪录片:在直接电影之后

电影不会来源于某次宣言，虽然有道格玛95（Dogme95）宣言，不过那只是些技术标准，某种超写实的规范。电影有倾向没有流派，

深圳影视三十年

把深圳三十年的影视创作放在一个社会学的角度考察,最有价值的问题有两个:第一,三十年影视作品中的深圳是什么?作品中的深圳人是怎么生活的?第二,三十年影视作品创作中,它的创作过程呈现出深圳的政治、经济、文化形态是什么?简单的说,就是深圳影视三十年有什么样台前和幕后。尤其是作为镜像反射之后的"幕后",更具城市文化批评的文本意义。

回到生命:岁月、生活和人——纪录片《渡口编年·贺家》的拍摄

一、百年渡口停渡《渡口编年》,顾名思义,渡口就是我老家的渡口。1998年股份制改制,渡口轮船公司要求职工下岗,要改革成私人性质的承包单位。自1998年开始,我跟踪拍摄轮船公司的三个工人家庭二十年,其中,周家、陶家都是下岗职工,贺家交不起承包费从渡口撤出来了。拍摄了二十年,故取名《渡口编年》。

私影像:从自我进入灵魂的跋涉

一电影不会来源于某次宣言,虽然有“道格玛95”(Dogme95)宣言,不过那只是些技术标准,某种超写实的规范。电影有倾向没有流派,虽然有“意大利新现实主义”,有“新浪潮”,其实是一个麻袋里装的不同的土豆,这种情况在法国“新小说”方面也是如此。“没有什么重要的时代是理论制造出来的;它们开始于一个游戏,一次冲突,或一个旅程。”如果要问当代中国独立纪录片是如何勃兴起来的,我的回答是当代中国现实。

Wnt信号通路调控脂肪发育与代谢的研究进展

肥胖是形成Ⅱ型糖尿病和心血管疾病的重要风险因子.Wnt信号通路是调控多个细胞发育与分化的重要信号因子.本研究介绍了脂肪组织结构、脂肪细胞分化的调控因子、经典和非经典Wnt信号通路.从肥胖与糖尿病的临床观察、脂肪分化与发育、线粒体代谢与炎症反应的角度,阐述了经典和非经典Wnt信号通路对脂肪发育和代谢的影响.

Wntless基因抑制棕色脂肪组织发育和能量代谢

目的研究Wntless (Wls)介导的Wnt信号通路对棕色脂肪组织(BAT)发育分化及能量代谢的影响。方法运用Cre-loxP系统,在Myf5^+的棕色脂肪前体细胞敲除Wls基因。取敲除小鼠WlsMyf5^Δ/Δ和Wls^fl/fl对照小鼠的BAT进行形态观察、免疫组化分析、实时定量PCR以及Western印迹检测,观察其细胞分化状态;取BAT的血管基质部分(SVF)细胞进行体外棕色化诱导、油红O染色、实时定量PCR和细胞呼吸实验,分析细胞体外分化潜能和氧耗水平;对小鼠进行红外热成像,测定肛温以及氧耗呼吸代谢,分析小鼠产热和能量代谢状态;对小鼠进行核磁共振体脂检测,葡萄糖和胰岛素耐量试验,检测小鼠脂肪含量和糖代谢能力。结果Wls基因敲除小鼠体型偏小,体重偏轻,瘦脂比升高,棕色脂肪组织体积较小,背部体温升高;敲除小鼠BAT的分化增强,产热增加,解耦联蛋白1(Ucp1)的mRNA和蛋白表达水平上升,其SVF细胞体外棕色化明显增强;敲除小鼠体脂量下降,糖代谢能力升高,但整体氧耗呼吸能量代谢没有明显变化。结论Wls介导的Wnt信号通路能通过抑制小鼠棕色脂肪组织分化,降低其产热和葡萄糖代谢。

Foxp2对骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)是一类重要的成体干细胞,具有形成成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)的能力,并且能够分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞。Foxp2属于Foxp蛋白家族,是一类保守的转录因子,在生物器官发育的多个过程中发挥重要作用。Foxp2基因最初被认为是一个与人类语言和认知能力调控相关的基因,有研究发现它的突变也会影响颅面骨的塑形和发育。因此本课题致力于研究Foxp2在MSC的增殖和成骨分化过程中的作用。结果表明,在骨髓间充质干细胞当中敲除Foxp2基因,导致干细胞增殖能力上升,而成骨分化能力下降;相反在间质细胞系C3H10T1/2和MC3T3当中过表达Foxp2,能抑制细胞的增殖,但可以促进其成骨分化。最后观察得出结论:Foxp2对MSC的成骨分化有促进作用,但会抑制MSC的增殖能力。这些研究结果将为理解颅骨与大脑组织的协同发育过程提供理论基础,也为骨质疏松的治疗提供线索。

底层感

毋庸置疑,中国当代文坛无论是体验型的作家还是绕过体验的作家,无论是“旧潮”的作家还是“新潮”的作家,都面临着一场疲惫。这是一个价值转型时期必然遇到的疲惫,这种疲惫是一个作家人文背景的或除旧或迷乱或虚空造成的,摆脱它的方法只有一个:培养我们坚挺的精神穿透力。

王安忆、莫言的疲惫

一个作家写出了具有一定影响的作品之后,我们是否有必要苛求太甚,让他们永远“轰动”,作为评论者没有权利强人所难。否定某作家,在我看来几乎是不可能的事,因为我们不能从一种设想的理想模式去肯定或否定人,一个人一辈子有几处闪光点就已经很不错了。

艺术的民间状态

我常想,除了我们浩如烟海的印刷品之外,这世界还有没有隐者的文学存在,我们那些常常在废旧商店以斤、以吨出卖的印刷文学为什么看起来那么面孔相似,那么小器十足?那些用来点缀橱窗的沉思者和永恒微笑的复制品之外。

我拍《工厂青年》

纪录片的社会议题与电影形式有其复杂的诞生过程。纪录片《工厂青年》选择了"不干预"的态度进入了形式与内容的探索。导演的三十年文学修养与纪录片电影实践的结合,在一个否定之否定过程中,形成了现代主义美学与现实主义现实互动,在当代纪录片中独树一帜。

那些直截了当的话——赫尔佐格和他的电影

一、文人与文盲这就是赫尔佐格,他说他就是他的电影。他吃过皮鞋,因为打赌输了;他拍片时将演员催眠;在亚玛逊拍片子,他用人力把大船从一条河流翻过大山拉到另一条河流;火山爆发了,人们在逃生,他和摄影师却往火山狂奔。他拍摄的人物,是侏儒,盲人,疯子(还有偏执狂),极限挑战者,其实,这些人都部分代表了他。