基于流式量子点微球技术的甲乙型流感病毒抗原检测方法的建立和初步应用分析

目的建立基于流式量子点微球技术的甲型流感病毒(FluA)和乙型流感病毒(FluB)抗原联检方法,为常见呼吸道病毒抗原多重检测打下基础。方法分别使用自制的不同量子点编码微球和小鼠抗FluA/FluB核蛋白(NP)单克隆抗体进行偶联,在流式细胞仪上对已知浓度的甲乙型流感病毒抗原分别和同时进行检测,对检测条件进行优化,建立甲乙型流感病毒抗原联检方法,利用此方法对临床样本进行检测,与实时荧光定量PCR法(quantitative real-time PCR,qPCR)进行比对,验证此方法的临床性能。结果建立了甲乙型流感病毒抗原联检方法,该方法的甲乙型流感病毒抗原的检出限分别为26.1 pg/ml和10.7 pg/ml,测量范围均为15.3~250000 pg/ml。对临床样本检测,与qPCR比对一致性良好,阳性符合率为57.4%,阴性符合率为100%,总符合率71.6%,并优于临床常用胶体金试剂(阳性符合率为56.49%,阴性符合率为99.75%)。结论此流式量子点微球多重检测方法可以用于甲乙型流感病毒抗原的联检,其灵敏度较高、特异度好、检测范围广,可以为呼吸道常见病毒多重检测打下良好基础,在临床上具有应用前景。

类风湿性关节炎患者血清中IL-35、VitD、IL-33及其受体ST2表达水平及临床意义

目的:了解类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清中白细胞介素-35(IL-35)、25-羟基维生素D3[25-(OH)VitD3]、IL-33及其受体ST2(ST2)表达水平,并探讨其临床意义,为RA的诊断提供参考依据。方法:选择2017年3月-2019年4月来医院风湿科门诊或住院部就诊并确诊为RA患者129例为RA组,同期来医院体检的健康人群100名为HC组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-35、IL-33及ST2水平,采用化学反光分析仪检测25-(OH)VitD3水平,并对检测结果进行统计分析。结果:RA组患者IL-35和25-(OH)VitD3水平分别为(23.80±10.97)pg/ml和(34.68±6.63)nmol/L,明显低于HC组的(91.54±22.52)pg/ml和(62.91±13.75)nmol/L,而IL-33和ST2水平分别为(29.56±3.83)pg/ml和(18.32±3.49)ng/ml,明显高于HC组的(6.37±0.91)pg/ml和(7.05±0.74)ng/ml,差异均有统计学意义(P<0.05);IL-35和25-(OH)VitD3水平随着RA患者病情严重程度的加重而降低,而IL-33和ST2水平随着RA患者病情严重程度的加重而升高,差异有统计学意义(P<0.001);RA男性患者25-(OH)VitD3水平为(45.79±8.36)nmol/L,明显高于女性患者的(31.01±6.27)nmol/L,差异有统计学意义(P<0.05),而IL-35、IL-33及ST2水平差异无统计学意义(P>0.05);经Pearson相关分析,IL-35与25-(OH)VitD3水平呈明显正相关(P<0.05),与IL-33和ST2水平呈明显负相关(P<0.05),而IL-33与ST2水平呈明显正相关(P<0.05)。结论:RA患者IL-35和25-(OH)VitD3水平明显降低,而IL-33和ST2水平明显升高,且与病情密切相关。因此,加强IL-35、25-(OH)VitD3、IL-33及ST2水平监测,对RA患者的诊断及病情判断具有一定的参考价值。

HBsAg与尿液中HBV-DNA的相关性及联合检测对HBV-GN患者诊断效果的研究

目的探索乙型肝炎表面抗原(HBsAg)定量检测与尿液中乙型肝炎病毒(HBV)DNA(HBVDNA)的相关性及联合检验对HBV相关肾性炎(HBV-GN)的诊断效果。方法回顾性分析2016年6月至2017年12月就治于该院肾内科及感染科的肾炎患者110例,其中HBV-GN组60例,非HBV相关肾性炎(Non-HBV-GN)组50例。采用发光法检测患者HBsAg及HBV e抗原(HBeAg),采用荧光定量多聚酶链式反应(PCR)技术检测患者尿液中的HBV-DNA拷贝数,对比分析两组患者乙型肝炎标志物的差异;用Spearman相关系数分析HBV-GN组患者HBsAg水平与尿液HBV-DNA拷贝数的相关性;采用SPSS22.0作受试者工作特征曲线(ROC曲线),评价HBsAg定量、尿液HBV-DNA检测及联合检测对HBV-GN的诊断效果。结果 HBV-GN组以膜性肾病为主(51.7%);而Non-HBV-GN组以毛细血管内增生性肾炎为主(30.0%),两组的肾炎病理分型构成比差异有统计学意义(P<0.05)。HBV-GN组血清HBsAg、HBeAg及尿液HBV-DNA的定量和定性检测均高于Non-HBV-GN组(均P<0.05),其中血清HBsAg定量、尿液HBVDNA的定量和定性检测差异有统计学意义(P<0.05)。HBeAg(+)患者的HBsAg定量与尿液HBV-DNA拷贝水平有相关性(r=0.718,P<0.05);HBeAg(-)患者亦有相关性(r=0.314,P<0.05)。HBsAg定量与尿液HBV-DNA拷贝水平联合检测的灵敏度为0.79,特异度为0.78,均优于单一检测,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论乙型肝炎患者HBsAg定量与尿液HBV-DNA拷贝水平相关性强,二者联合检测对诊断HBV-GN具有重要价值。

广东省深圳地区类风湿关节炎患者血清25-(OH)VitD3水平及其受体基因rs2228570 T/C位点多态性的相关性研究

目的了解深圳地区类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者25-羟基维生素D3[25-(OH)VitD3]水平及维生素D受体(VDR)基因rs2228570 T/C位点多态性,并探讨其与RA发病之间的相关性。方法选择126例RA患者作为RA组,另选取120例健康体检者作为对照组。分别检测血清25-(OH)VitD3水平及VDR基因rs2228570T/C位点多态性。结果RA组血清25-(OH)VitD3水平(31.57±9.36nmol/L)明显低于对照组(65.92±14.57nmol/L),两者差异有统计学意义(t=9.1542,P=0.0137),其中RA组男性(42.16±11.75nmol/L)明显高于女性(27.50±8.12nmol/L),两者差异有统计学意义(t=6.1374,P=0.0209),而对照组男性(63.95±13.80nmol/L)略低于女性(66.58±15.09nmol/L),两者差异无统计学意义(t=0.9452,P=0.1295)。RA组高度活动组25-(OH)VitD3水平(19.37±5.82nmol/L)明显低于中度活动组(30.69±8.63nmol/L),而中度活动组明显低于低活动组(38.32±10.78nmol/L),不同组别间差异有统计学意义(F=17.9351,P=0.0082)。RA组VDR基因rs2228570 T/C位点CC基因型和C等位基因检出率(41.27%和54.76%)明显高于对照组(17.50%和32.08%),两者差异有统计学意义(χ^(2)=6.0547,4.9752,均P<0.05)。RA组VDR基因rs2228570 T/C位点CC基因型和C等位基因检出率男性(28.57%和44.29%)明显低于女性(46.15%和58.79%),两者差异有统计学意义(χ^(2)=3.9728,3.1086,均P<0.05)。RA组CC基因型血清25-(OH)VitD3水平(18.95±4.59nmol/L)明显低于TC和TT基因型(38.62±11.03nmol/L和41.98±11.92nmol/L),差异有统计学意义(t=5.0164~5.8126,均P<0.05),而TC和TT基因型之间差异无统计学意义(t=1.2068,P=0.1178)。结论广东深圳地区RA患者25-(OH)VitD3水平明显降低,且VDR基因rs2228570T/C位点存在多态性分布,与25-(OH)VitD3水平之间存在一定关系,其中CC基因型可能是该地区RA发病的危险易感基因之一。

系统性红斑狼疮导致血清新型冠状病毒IgM和IgG抗体假阳性1例分析

新型冠状病毒肺炎已经成为人类疾病史上的第六次大流行疾病,中华人民共和国国家卫生健康委员会发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》,在原有对新型冠状病毒肺炎确诊需要核酸检测或测序基础上增加了血清学检测作为依据,即新型冠状病毒特异性IgM和IgG抗体阳性,或新型冠状病毒特异性IgG抗体由阴性转为阳性或恢复期较急性期4倍及以上升高也可确诊,并一直沿用。血清学检测由于检测条件容易实现、速度快、可以大量检测、患者接受度高等优点,与核酸检测联合成为新型冠状病毒肺炎确诊的一种重要方法,多篇文献也肯定了血清学抗体检测在临床诊断和流行病学方面的价值[1-2],但临床应用中血清学抗体检测假阳性造成对诊断干扰的案例鲜有报道。本例患者入院时在新型冠状病毒核酸不能及时检测情况下先行血清抗体检测,可以及时获知病毒感染情况,以免造成院内感染。

基于环介导等温扩增和干式试剂技术的结核分枝杆菌快速检测方法的建立

本研究使用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)和干式试剂技术,研发一种可以常温存储的结核分枝杆菌快速检测试剂。LAMP核酸扩增技术基于4或6条特异性引物,依靠链置换DNA聚合酶,使DNA在恒定温度下不断合成。所研LAMP技术反应体系使用实时荧光检测方法在20 min内检出结核分枝杆菌IS6110靶基因,且灵敏度接近PCR法,但精密度不及PCR法(LAMP法变异系数18.9%,PCR法变异系数3.4%),故LAMP法更适合定性检测。LAMP体系对脑膜炎双球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、风疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道腺病毒(3 型)、呼吸道腺病毒(7 型)、呼吸道合胞病毒B和副流感病毒2型等10种病原体均无扩增,表现出较好的特异度。在此基础上,使用烘干和冻干技术,研发干式LAMP技术反应试剂。干式试剂在50 ℃环境下存储10 d性能无衰减,等效常温(25 ℃)可保存6个月以上。在临床样本测试中,干式试剂可20 min内有效检出结核分枝杆菌的核酸。综上,本文研发的常温存储快速检测试剂搭配等温扩增仪可对结核分枝杆菌进行快速鉴定。

类风湿关节炎患者TNF-α表达水平及其基因rs1800629位点多态性分析

目的了解类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平表达情况,并分析其基因rs1800629位点单核苷酸多态性与RA患者遗传的易感性。方法收集2017年6月至2019年7月来医院就诊并确诊为RA患者152例为RA组,选择同期健康人群107例为对照组,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测血清中TNF-α水平,同时采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)检测TNF-α基因rs1800629位点多态性,并对检测结果进行统计分析。结果 RA患者血清中TNF-α水平为(39.16±11.05) pg/ml,明显高于健康对照组的(18.72±5.94) pg/ml,差异有统计学意义(t=3.9524,P<0.05);RA患者血清中TNF-α基因rs1800629位点的GG基因型和G等位基因检出率分别为71.72%和81.91%,明显高于健康对照组的24.30%和33.18%,差异有统计学意义(χ2=3.9547~5.0521,P<0.05);携带GG基因型RA患者血清中TNF-α水平为(48.19±15.03) pg/ml,明显高于GA和AA基因型的(34.25±9.85) pg/ml和(26.57±7.02) pg/ml,差异有统计学意义(t=2.8472~3.5165,P<0.05)。结论 RA患者血清中TNF-α水平明显升高,TNF-α基因rs1800629位点GG基因型和G等位基因检出率明显高于健康对照组,且携带GG基因型的RA患者血清中TNF-α水平明显高于其它基因型,可能是本区RA发病的危险遗传基因之一。

血清1,25-(OH)_(2)VitD3水平及VDR基因rs2228570 T/C位点多态性与肺结核患者易感性分析

目的分析血清1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)_(2)VitD3]表达水平及维生素D受体(VDR)基因rs2228570 T/C位点单核苷酸多态性(SNP)分布特征与肺结核(TB)的易感性。方法收集2020年3月-2021年5月中国科学院大学深圳医院(光明)确诊的肺结核患者172例为TB组,同期健康人群138人为对照组。分别检测两组血清中1,25-(OH)_(2)VitD3水平,同时对VDR基因rs2228570 T/C位点SNP进行分析。结果TB组患者血清1,25-(OH)_(2)VitD3水平为(12.06±3.92)nmol/L,明显低于对照组(41.37±5.14)nmol/L,差异有统计学意义(t=6.064,P<0.05)。TB组VDR基因rs2228570 T/C位点CC基因型和C等位基因频率分别为47.67%和66.57%,明显高于对照组11.59%和31.16%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.902、4.527,P均<0.05),且CC基因型和C等位基因患TB的相对风险增加(OR=1.963,95%CI:1.205~3.013和OR=1.605,95%CI:1.302~2.873)。VDR基因rs2228570 T/C位点CC基因型TB患者血清1,25-(OH)_(2)VitD3水平为(7.25±2.61)noml/L,明显低于TC和CC基因型(15.83±4.29)nmol/L和(17.64±4.80)nmol/L,差异有统计学意义(t=3.975、4.135,P<0.05),但TC和CC基因型TB患者1,25-(OH)_(2)VitD3水平之间差异无统计学意义(t=1.133,P>0.05)。结论TB患者血清1,25-(OH)_(2)VitD3水平明显降低,可能与TB的发病有密切关系。同时VDR基因rs2228570 T/C位点呈多态性,且CC基因型TB患者1,25-(OH)_(2)VitD3水平更低,可能是深圳地区TB发病的易感基因之一。