气管滴注法建立肉鸡感染O157:H7型大肠杆菌模型

本试验旨在建立肠出血性大肠杆菌O157:H7(E.coli)感染肉鸡动物模型。将100只麻黄羽肉鸡饲喂至7日龄,挑选健康、体质量均一的鸡随机分为6组:空白对照组、A组(1×10^(7)cfu/mL E.coli感染组)、B组(1×10^(8)cfu/mL E.coli感染组)、C组(1×10^(9)cfu/mL E.coli感染组)、D组(1×10^(10)cfu/mL E.coli感染组)、E组(1×10^(11)cfu/mL E.coli感染组),每组设3个重复,每个重复5只鸡。感染组每只肉鸡气管滴注大肠杆菌菌悬液0.5 mL,空白对照组肉鸡气管滴注相同体积的磷酸缓冲液(PBS)。分别在试验开始前与感染后7 d记录肉鸡的体质量,试验期间记录肉鸡的采食量,并观察其临床变化。在感染后7 d对肉鸡颈静脉采血以检测肝功能。解剖摘取肉鸡肝脏、脾脏和结肠组织,计算肝脏和脾脏脏器指数,并对肝脏、脾脏和结肠进行载菌量检测和组织病理学观察。结果显示,与空白对照组相比,感染大肠杆菌后肉鸡的料重比和肝脏指数、脾脏指数显著升高(P<0.05),肝脏、脾脏中均检测出大肠杆菌,结肠中大肠杆菌数量明显增多。A~E组肉鸡血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(T-BiL-V)含量均显著高于空白对照组(P<0.05);D组与E组肉鸡血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量显著高于空白对照组(P<0.05);D组、E组肉鸡血清中总胆汁酸(TBA)含量显著低于空白对照组(P<0.05)。病理组织学观察显示,C~E组肉鸡肝脏眼观呈绿棕色,并存在白色坏死点,镜检发现浆液性渗出和红细胞、炎性细胞浸润现象;E组肉鸡脾脏出现明显的毛细血管玻璃样变和毛细血管充血现象;C~E组肉鸡结肠绒毛萎缩、肠壁变薄,同时,D组、E组肉鸡结肠出现毛细血管充血现象。气管滴注可以用于构建鸡的肠出血性大肠杆菌模型,此模型可显著诱导肉鸡肝脏和结肠损伤。

广东省牛大力茎叶定性质量标准研究

建立广东省牛大力茎叶药材的定性质量标准。收集广东省5个地区牛大力茎叶,按照《中华人民共和国药典》(2020年版)四部通则方法,对其粉末进行显微结构和薄层色谱(TLC)鉴别;用烘干法测定水分,用马弗炉测定总灰分和酸不溶性灰分,采用浸泡法和加热回流法测定浸出物(水溶性、醇溶性)含量,采用电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP-OES)测定铅(Pb)、铜(Cu)、砷(As)、镉(Cd)、汞(Hg)等元素含量。结果显示,不同产地牛大力茎叶样品显微特征基本一致,薄层色谱重现性好、专属性强,水分含量为6.83%~9.16%,总灰分含量为3.74%~5.90%,酸不溶性灰分含量为0.49%~0.92%,冷水浸出物含量为3.01%~10.78%,热水浸出物含量为5.88%~15.03%,冷醇浸出物含量为2.38%~4.22%,热醇浸出物含量为3.29%~6.36%,Pb含量为0.185~2.863 mg/kg,Cu含量为1.840~6.601 mg/kg,As含量为未检出~0.028 mg/kg,Cd含量为0.016~0.086 mg/kg,Hg含量为未检出~0.019 mg/kg。本试验方法操作简单,可行性好,结果可靠,可为牛大力茎叶药材定性质量标准的建立提供参考。

黄皮叶挥发油提取及其化学成分GC-MS分析

优化黄皮叶挥发油的提取条件,并分析挥发油的化学成分及相对含量。采用水蒸气蒸馏法提取黄皮叶挥发油,以料液比、浸泡时间、提取时间为考察因素进行单因素试验;在单因素试验基础上,以挥发油得率为评价指标,进行正交试验确定黄皮叶挥发油最佳提取工艺;采用气相色谱-质谱法(GC-MS)对黄皮叶挥发油进行成分分析和含量测定。结果显示,黄皮叶挥发油最佳提取工艺为浸泡时间2 h、提取时间4 h、料液比为1∶10(m∶V),挥发油得率为0.50%,GC-MS共分离鉴定出37种化合物,以芳香烃、萜类化合物及其含氧衍生物等为主,占挥发油总量的96.49%。本试验明确了水蒸气蒸馏法提取黄皮叶挥发油的优化工艺和挥发油的成分,可为黄皮叶挥发油的工艺研究、标准制定和规模化生产提供理论依据。

火炭母通过调控TLR4-TBK1信号通路改善鼠伤寒沙门菌感染小鼠空肠的炎症反应

为了探讨火炭母对鼠伤寒沙门菌感染小鼠空肠的免疫保护作用及其潜在机制。本试验将48只雌性BALB/c小鼠随机分为6个组:空白对照组、模型组、阳性药物组和火炭母高、中、低剂量组,每组8只。阳性药物组小鼠灌胃庆大霉素[20 mg/(kg·bw)],火炭母高、中、低剂量组小鼠分别按16、8和4 g/(kg·bw)剂量灌胃火炭母,空白对照组和模型组小鼠给予等体积的灭菌生理盐水,共连续给药8 d。预防性给药2 d后,每只小鼠(空白对照组除外)灌胃0.2 mL半数致死量(LD 50)鼠伤寒沙门菌(5×10^(4) CFU/mL)致病。给药结束后,处死小鼠取空肠用于组织病理学检查和Western blot。结果显示,鼠伤寒沙门菌感染后,小鼠空肠杯状细胞和肠腺红细胞增多、肠绒毛结构松散,火炭母各剂量组小鼠空肠杯状细胞和肠腺红细胞明显减少,火炭母减轻了小鼠空肠组织损伤。Western blot结果显示,与空白对照组相比,模型组小鼠空肠中免疫因子β干扰素(IFN-β)蛋白表达显著上升(P<0.05),γ干扰素(IFN-γ)蛋白表达显著下降(P<0.05),干扰素调节因子3(IRF3)、磷酸化TANK结合激酶1(p-TBK1)和Toll样受体4(TLR4)蛋白表达显著上调(P<0.05),炎性因子白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)和核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达显著上升(P<0.05);与模型组相比,不同剂量火炭母可以不同程度降低炎症因子IL-6(P<0.05或P>0.05)、IL-1β(P<0.05)和NF-κB p65(P<0.05)蛋白表达,显著提高TLR4、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)蛋白的表达和TANK结合激酶1(TBK1)蛋白表达及其磷酸化水平(P<0.05),提高下游信号IRF3蛋白的表达(P<0.05)及其磷酸化水平(P<0.05或P>0.05),进而提高空肠中IFN-β(P<0.05或P>0.05)和IFN-γ(P<0.05)蛋白的表达。结果表明,火炭母通过调控TLR4-TBK1信号通路改善鼠伤寒沙门菌感染小鼠空肠的炎症反应。

辣蓼上调cGAS-STING信号通路改善鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的脾脏免疫损伤

为了探究辣蓼水提液对鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠脾脏免疫损伤的保护作用及其潜在机制,试验将48只健康、体重接近的SPF级雌性Balb/c小鼠随机分为6组,分别为空白对照组、模型组、阳性药物组及辣蓼高、中、低剂量组,每组8只。空白对照组和模型组灌胃PBS,阳性药物组每天按体重灌胃给予庆大霉素20 mg/kg,辣蓼高、中、低剂量组分别灌胃给予20,10,5 g/kg的辣蓼水提液,小鼠给药体积为按体重0.2 mL/10 g,连续给药8 d。给药2 d后,除空白对照组外其余组小鼠均灌胃LD50(5×104cfu/mL)鼠伤寒沙门氏菌0.2 mL,末次给药后禁食不禁水12 h,麻醉小鼠安乐死后取脾脏组织进行组织病理学检查、鼠伤寒沙门氏菌负荷量测定,以及α-干扰素(IFN-α)、β-干扰素(IFN-β)、γ-干扰素(IFN-γ)、干扰素调节因子3(IRF3)、磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)、TANK结合激酶1(TBK1)、磷酸化TANK结合激酶1(p-TBK1)、干扰素刺激基因(STING)与环腺苷酸鸟苷酸合成酶(cGAS)蛋白相对表达量的检测。结果表明:模型组小鼠脾脏结构不清晰,红髓、白髓分辨不清,增生明显,有炎性细胞浸润,出血、渗出物明显;而辣蓼高、中、低剂量组小鼠脾脏均无明显病理变化,减轻了脾脏组织病理学损伤。模型组小鼠脾脏中鼠伤寒沙门氏菌负荷量较空白对照组显著增加(P<0.05),而辣蓼高、中、低剂量组小鼠脾脏中鼠伤寒沙门氏菌负荷量显著低于模型组(P<0.05)。模型组小鼠脾脏干扰素(IFN-α、IFN-β、IFN-γ)、IRF3、p-IRF3、p-TBK1与STING蛋白相对表达量较空白对照组均显著下降(P<0.05);而与模型组比较,辣蓼高、中剂量组干扰素(IFN-α、IFN-β、IFN-γ)、TBK1、p-TBK1、p-IRF3、cGAS和STING蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05)。说明辣蓼具有改善鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠脾脏免疫损伤的作用,作用机理可能是通过上调cGAS-STING通路从而诱导干扰素产生而得以实现。