小鼠金属硫蛋白在聚胞藻中的金属诱导表达与纯化

应用蓝藻类金属硫蛋白基因启动子（ｓｍｔＯＰ）的金属诱导性，在单细胞的聚胞藻ＰＣＣ６８０３中表达小鼠金属硫蛋白结构基因（ｍＭＴ１ｃＤＮＡ）。在大肠杆菌ＨＢ１０１中构建含有ｓｍｔＯＰ和ｍＭＴ１ｃＤＮＡ的穿梭表达载体ｐＫＴＭＲＥ，经质粒转移，链霉素筛选，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交分析鉴定得稳定的转基因工程藻落。同时，做小批量锌诱导表达，并纯化了外源蛋白，５Ｌ培养液含鲜藻重５０ｇ，得到３５ｍｇｍＭＴ１；转基因藻在高金属浓度下的耐受性测定表明，外源基因的表达提高了蓝藻对金属离子的抗性，约为野生藻的２倍。

小鼠金属硫蛋白基因在丝状体蓝藻中的表达及对重金属抗性的提高

应用蓝藻类金属硫蛋白启动子（ｓｍｔＯＰ）的金属诱导性，在丝状体蓝藻鱼腥藻（Ａｎａｂａｅｎａｓｐ．ＰＣＣ７１２０）中表达具有更高金属结合能力和对Ｃｄ２＋有选择特异性的小鼠金属硫蛋白基因（ｍＭＴⅠｃＤＮＡ）。构建穿梭表达载体ｐＫＴＭＲＥ并在大肠杆菌ＨＢ１０１中扩增，经三亲接合转移、链霉素筛选、ＤＮＡ和蛋白质印迹等方法鉴定得到稳定的转基因工程蓝藻。转基因蓝藻对金属离子吸附能力和较高重金属浓度下放氧活性测定表明，外源基因的表达提高了蓝藻对重金属离子的抗性，是野生蓝藻的１．５～２．０倍。

聚球藻类金属硫蛋白的纯化及部分性质的研究

单细胞蓝藻（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｕｓｓｐ．ＰＣＣ７９４２）以５０μｍｏｌ／ＬＺｎ２＋诱导８ｄ后收集，破碎取上清液经凝胶过滤、离子交换层析及反相ＨＰＬＣ纯化得到类金属硫蛋白，产率为每升培养液收集１．５ｇ鲜藻，得２．５ｍｇ纯品．其单体分子量为８７５０，Ｎ未端测定为缬氨酸，氨基酸组成分析得每分子（５６个氨基酸）含１０个半胱氨酸，疏水氨酸较多，且含有芳香族氨基酸，原子吸收光谱测得每分子蛋白结合４个二价金属．以上表明，该种类金属硫蛋白与哺乳动物金属硫蛋白结构差异很大，可能只是一种进化上的趋同．

蓝藻的类金属硫蛋白及其研究进展

单细胞蓝藻中的类金属硫蛋白已经得到分离纯化，并在蛋白质水平上与标准的哺乳动物金属硫蛋白做了对比性分析，发现二者氨基酸组成和序列差异很大，前者只形成一个结构域，但二级结构和金属结合性质具有一定的相似性，是进化上功能趋同的表现．同时克隆并分析了它的基因ＯＲＦ结构，研究了金属诱导和逆向转录抑制对于蛋白质表达的调控及类似于哺乳动物金属硫蛋白基因具有的放大和重排现象机理，提出了近期研究的重点和方向．