肺炎支原体P1蛋白抗原决定簇在大肠杆菌中的表达与纯化

目的 得到肺炎支原体主要粘附蛋白 (P1蛋白 )的表达蛋白。材料与方法 用PCR产物限制性片段长度多肽性(RFLP)分析等方法鉴定实验用肺炎支原体菌株。针对P1蛋白基因设计上、下游引物 ,进行PCR扩增。对PCR产物进行回收、纯化 ,克隆入PET - 2 8C(+)表达载体 ,并转化入宿主菌BL2 1。对重组质粒进行酶切及PCR鉴定后 ,IPTG诱导目的蛋白在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达 ,并以Ni-Agarose亲和层析柱纯化。结果 1)本实验所用菌株为肺炎支原体 2型。 2 )经PCR扩增得到预期含有BamHI和XhoI的 5 33bp的目的片段。 3)完成目的基因片段的克隆与表达 ,得到 2 0kDa左右表达蛋白。经诱导阳性质粒的蛋白表达 ,得到较大量纯化的目的蛋白。结论 本研究以国际标准株FH为模板 ,成功获得纯化的近 2 0kDa的P1蛋白片段 ,其大小与目的片段理论值相符 ,且此片段在肺炎支原体 1型与 2型中的基因同源性为 98%。为在基因和蛋白水平进一步研究肺炎支原体P1蛋白成分在肺炎支原体粘附和引起机体免疫反应中的作用机制 ,打下了良好的基础。

用PCR检测细胞培养中支原体污染

细胞培养中支原体污染已经成为严重的问题。为了扩增６种支原体（精氨酸支原体，口腔支原体，人型支原体，猪鼻支原体，发酵支原体及莱氏支原体）核糖体ＲＮＡ操纵子的１６ｓ和２３ｓＤＮＡ间区，设计了三个通用ＰＣＲ引物（Ｆ１，Ｆ２及Ｒ１）．当以６种支原体ＤＮＡ为模板时，引物Ｆ１和Ｒ１产生３４０到４６８ｂｐ的片段，引物Ｆ２和Ｒ１产生１４５到２１１ｂｐ的片段，当用Ｈｅｌａ细胞或Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ作为模板，用引物Ｆ１和Ｒ１时，在电泳中未观察到特定区带。此法最小能检出８．５ｆｇ精氨酸支原体ＤＮＡ，相当于１３个精氨酸支原体。这说明，当这些支原体污染细胞培养时，能用ＰＣＲ法检测出来。

柳州地区淋病患者支原体感染频率及分布特点的研究

对180例淋病患者和205名健康人的血清用IHA法进行了人型支原体(Mh)抗体检测。结果表明,淋病患者Mh抗体阳性率为18.89%,GMT为1:6.60;健康人阳性率为4.39%。GMT为1:4.53。病人的抗体水平显著高于健康人(P<0.01)。提示我国大陆地区存在Mh引起的泌尿生殖道感染。

南京地区健康儿童青少年中肺炎支原体自然感染状况的调查

本文报告了在南京地区2088名健康中小学生中进行的肺炎支原体自然感染的血清流行病学调查。结果表明健康儿童青少年中存在肺炎支原体感染,抗体阳性率为14.61%。其中33.3%为隐性感染,55.6%为轻度感染,仅10.98%为肺炎。肺炎支原体感染流行还表现为5年左右的周期性和一定的班级聚集性。间接血凝抗体滴度≥1:16可判为阳性,≥1:32提示感染,但并非一定是病人。

非淋球菌性尿道炎中生殖支原体的检测

为了探讨生殖支原体（Ｍｇ）与非淋球菌性尿道炎（ＮＧＵ）的关系，我们建立了套式ＰＣＲ法对２１６例ＮＧＵ病人尿道（阴道）分泌物标本做了Ｍｇ检测。分别扩增得到２９６ｂｐ和３７１ｂｐ片段。套式ＰＣＲ扩增片段经Ｅ．ｃｏＲＩ酶切和与γ３２Ｐ－ＡＴＰ标记的ＭＧＳ－Ｉ探针做斑点杂交，均证明扩增片段为Ｍｇ－Ｐａ。此方法灵敏度为１０３ｃｆｕ／ｍｌ。用此引物对其它８种支原体扩增均为阴性，具有高度的特异性。实验结果表明，ＮＧＵ患者Ｍｇ－ＰａＤＮＡ总阳性率为７．８％（１７／２１６）正常人群阳性率１．２％（１／８１），两组有显著性差异（ｘ２＝３．９８５，Ｐ＜０．００５）。从不同性别比较，男性ＮＧＵＭｇ－ＤＮＡ检测阳性率１０．２％（７／６８），女性６．７％（１０／１４８），男性略高于女性。成人与儿童比较，成人ＮＧＵＭｇ－ＤＮＡ检测阳性率１０．３％（１１／１０６）儿童检测阳性率５．４％（６／１１０），成人略高于儿童，统计学亦无显著性差异。结果提示Ｍｇ是ＮＧＵ病原体之一，在正常人群中也检测出阳性，说明它有正确寄居的可能性。

宜昌市部分人群解脲支原体抗体水平调查

1990年3～6月,采用间接血凝试验方法,对宜昌市490名健康人和81例妇科病人进行解脲支原体抗体水平调查。结果表明,健康人抗体阳性率为5.71％,GMT为1:3.42;性中抗体阳性率为5.90％,女性5.41％,两者无显著差异(P>0.05);妇科病人抗体阳性率(18.52％)明显高于健康妇女(1.89％),提示该地人群中存在解脲支原体感染,值得引起重视。

人型支原体感染的血清流行病学研究

1989年3～4月对南京铁咯分局1423名健康人进行了人型支原体感染的血清流行病学调查。结果表明,人群中存在Mh感染抗体阳性率为3.72％,GMT为1:3.38。感染与性别、年龄、职业、婚姻、病史以及性接触等因素有关。提示该病是一种性传播疾病,应引起高度重视。

我国八个地区性病患者和健康人支原体和衣原体感染的血清流行病学研究

报告了1992年对我国八个地区1243例性病患者和1292名健康人进行人(?)支原体(Mh)、解脲支原体(Uu)和沙眼衣原体(Ct)抗体检测结果。研究表明,性病患者中 Uu 抗体阳性率最高(27.07%)、Ct 次之(23.33%)、Mh 最低(10.06%)。病人的 Mh、Uu 和 Ct 抗体水平显著高于健康人(P<0.05)。病人感染支原体在性别、年龄上没有明显差异(P>0.05)。性病患者经常合并感染 Uu 和 Ct。研究提示,我国广大地区有支原体性病和衣原体性病的存在,这是新的发现。

南京、广州、齐齐哈尔铁路地区儿童青少年肺炎支原体抗体分布特点的研究

1990年3～4月,我们用 PHA 法对广州、南京和齐齐哈尔三个铁路地区《4724名健康儿童进行了 MP 抗体检测。抗体平均阳性率为13。87%,GMT 为1:4.13。抗体阳性率以南京最高(20.31%),齐齐哈尔次之(14.32%),广州最低(4.58%)。提示三个地区均存在不同程度的 MP 感染。

成都和衡阳地区铁路人群肺炎支原体感染情况的调查

肺炎支原体(简称 Mp)感染,是一种较常见的呼吸道疾病。国外对该病研究较多。国内对它研究甚少,有关其流行病学的研究迄今仅见两篇报道。铁路系统则是空白。为了解铁路健康人群 Mp 感染情况及其特点,我们于1987年9～10月,对衡阳和成都两个地区的部分铁路人群进行了血清流行病学调查,现报告如下。

儿童哮喘和喘息性支气管炎中肺炎支原体及军团杆菌抗体的研究

本文对1986年来儿童哮喘和喘支100例及健康儿童65例,采用间接血凝、酶标IgE和生物素/抗生物素酶标IgE三种检测支原体方法及酶标IgG检测军团杆菌Ⅰ型方法,进行了血清抗体测定。结果21%患者血清中有抗肺炎支原体的IgM及IgE抗体,达到或超过阳性(1:32)水平;7%患者血清中有抗军团杆菌Ⅰ型抗体(OD值≥0.5为阳性),而对照组未见阳性者。提示支原体感染与哮喘发作有密切关系.而军团杆菌Ⅰ型与哮喘关系不大。

用巢式多聚酶链反应检测细胞培养中污染支原体方法的建立

细胞培养技术已经成为生物学和医学研究的重要工具,而细胞培养中支原体污染已是极严重的问题。而应用已被支原体污染的培养细胞或组织进行生物学和医学研究,必将导致错误结果。本文用三个引物(F1、F2及R1),建立巢式多聚酶链反应(nested PCR)方法,选择性扩增16s-23srRNA间区序列,并对其通用性、特异性、灵敏性进行鉴定。该法具有五大特点: 1.通用性常见污染细胞培养的支原体有精氨酸支原体、口腔支原体。

聚合酶链反应检测新生儿衣原体感染

目的用聚合酶链反应检测新生儿衣原体感染状况。方法参照文献报道的沙眼衣原体及肺炎衣原体基因序列，分别设计一对引物，采用ＰＣＲ法检测住院新生儿衣原体感染。结果因呼吸道感染住院的１２３名新生儿的咽拭子标本，沙眼衣原体及肺炎衣原体感染率分别为１３．８％和４．９％。结论ＰＣＲ检测沙眼衣原体及肺炎衣原体感染具有特异、敏感、快速的特点，可为临床诊断提供科学依据。

春秋季肺炎支原体抗体流行状况研究

用定群研究方法,对广州地区846名健康儿童、青少年进行了春、秋季肺炎支原体(Mp)抗体流行状况的观察。结果表明,秋季Mp抗体阳性率为25.53％,是春季(4.61％)的5.54倍,说明Mp感染主要在秋季。无论男性或女性,或不同年龄组人群,秋季抗体水平都明显高于春季(P<0.01)。以上情况,对制定支原体肺炎防治对策和措施有着重要参考意义。

不同人群解脲脲原体和人型支原体抗体水平检测

1992年3～4月,我们用 PHA 法对宜昌地区1042人不同人群进行了解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)抗体水平检测。结果表明,健康人群 Uu 抗体阳性率为6.71％,GMT 为1:3.34;Mh 抗体阳性率为1.04％,GMT 为1:3.75。妇科病人、性病患者和性乱者的两种抗体水平都明显高于健康人。提示该地人群中存在 Uu 和 Mh 感染,应引起重视。此外,还对调查意义、分布特征和防治对策进行了讨论。

地高辛标记的DNA探针用于嗜肺军团菌病的检测

本文利用嗜肺军团菌的种特异性扩增产物制成地高辛标记的探针。对Ｌ１－Ｌ１４的标准菌株和临床及环境分离的菌株进行检测，与血清学检查结果相符，灵敏度达到ｌｐｇＤＮＡ，对临床儿童肺炎患者的痰液进行检测，阳性率为２５％（１０／４０），９５％可信限为１３－４１％。基本可以认为该探针具有灵敏、特异、快速的特点。

单克隆抗体反向间接血凝试验检测支原体

培养细胞感染支原体仍然是某些实验室的严重问题,感染率达6％-26％或更高。猪鼻支原体(M·hyorhinis).口腔支原体(M·orale),精氨酸支原体(M·arginini)和莱氏支原体(M·Laidlawii或Acholeplasma Laidlawii)占感染细胞支原体的95％以上,其中猪鼻支原体感染率最高,占检出支原体的30％～39％。诊断支原体感染采用包括分离培养、DNA染色、血清学方法及DNA探针。

昆明铁路地区正常人群支原体抗体水平的调查

人型支原体(Mycoplama hominis,简称Mh)和解脲支原体(Ureaplasma Urealyticum,简称Uu)是引起人类泌尿生殖道感染的常见病原体。为了解昆明地区感染状况及分布规律,做好该病的防治工作,笔者于1991年1～4月,用间接血凝法(IHA),对铁路系统六种不同职业1003名健康人进行了Mh和Uu抗体的检测,现将结果报告如下。