基于结构方程模型的原发性骨质疏松症高危女性健康促进行为的影响因素分析

目的基于结构方程模型探讨原发性骨质疏松症高危女性健康促进行为的影响因素,为制订有效干预方案提供理论参考。方法2023年2-5月,采用便利抽样法选取衡阳市4所社区卫生服务中心的400名原发性骨质疏松症高危女性为研究对象,采用一般资料调查表、电子健康素养量表、领悟社会支持量表、骨质疏松症自我效能量表和健康促进生活方式量表Ⅱ对其进行调查,采用结构方程模型进行影响因素分析。结果工作状态、文化程度、疾病认知程度、领悟社会支持、自我效能直接影响健康促进行为(效应值分别为0.199、0.109、0.155、0.263、0.207);电子健康素养不仅直接影响,还可通过领悟社会支持和自我效能的部分中介作用影响健康促进行为(直接效应值为0.515,总中介效应值为0.231)。结论原发性骨质疏松症高危女性的健康促进行为受多种因素协同影响。社区医务人员应重点关注在职、文化程度与疾病认知程度较低者,可通过开展电子健康干预、调动社会支持系统、增强自我效能,以提升其健康促进行为水平。

孕激素治疗子宫内膜癌研究进展

子宫内膜癌原发于子宫内膜,是常见的妇科恶性肿瘤之一,其发病率及死亡率仍在逐年上升。虽然子宫内膜癌多见于围绝经期和绝经后女性,但近年来该病有着明显的年轻化趋势。对于未生育但有生育意愿的年轻患者,应用孕激素治疗子宫内膜癌近年来在临床上取得了很大的进展。鉴于孕激素临床应用个体差异大、作用机制不明确等问题,本文就孕激素的临床应用现状、疗效、孕激素抵抗及其机制进行综述。

电子处方与手写处方书写规范度对比研究

目的了解南华大学附属医院《处方管理办法》的贯彻落实情况,对比分析手写处方和电子处方书写规范度的差异,为规范处方使用提供依据。方法采用随机抽样调查的方式,依据处方点评标准,对南华大学附属第一医院、附属第二医院新院、附属第二医院老院处方规范率及不规范表现进行统计分析。采集电子处方和手写处方的不规范数据,分析比较不合理差异。结果经过抽样调查,南华大学附属第一医院的处方(全部为电子处方)不规范率最低,为12.92%;附属第二医院新院的处方(部分电子处方)不规范率较高,为22.70%;附属第二医院老院的处方(全部为手写处方)不规范率最高,为35.89%;经过多个样本比较的Friedman M检验分析,三组数据差异有统计学意义(P<0.05)。电子处方中不规范处方占13.38%,远远低于手写处方不规范率34.29%,且差异有高度统计学意义(P<0.01)。手写处方中的不规范表现较多,集中体现为前记、规格、药名错误,药师未执行双签名规定等方面,而电子处方不规范的因素比较单一,主要是婴儿处方未写明体重或日、月龄。结论医院应该加强处方书写方面的管理力度,提高药剂人员的素质,强化医院的信息系统,使手写处方逐步往电子处方过渡,促进处方书写规范化。

衡阳市原发性高血压患者药物治疗依从性的评估

目的分析衡阳市原发性高血压患者药物治疗依从性水平,并探讨其影响因素,为提高原发性高血压患者的用药依从性提供可靠依据。方法采用自行编制的高血压病人依从性问卷,对300例原发性高血压患者进行用药情况及其相关因素的调查,采用χ2检验对用药依从性影响因素进行统计分析。结果 300例原发性高血压患者中服药依从性佳者为30.33%,服药依从性不佳者为69.67%。其中,年龄、就诊次数、伴随疾病数量、是否备有血压计、实际服药次数、实际服药种类等因素对服药依从性的影响具有统计学意义(P<0.05)。结论衡阳市原发性高血压病人药物治疗的依从性不佳,医护人员可以通过加强对病人的健康教育,制定合理的治疗方案,增加门诊随访次数以提高其服药依从性。

抗人血栓调节蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为了制备特异性抗人血栓调节蛋白(human thrombomodulin,hTM)的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),利用脂质体Lipofectamine 2000将包含hTM全长cDNA序列的重组表达质粒pThr402转染CHO细胞,经G418筛选及相关鉴定后获得高效稳定表达hTM的CHO-TM5细胞株。将CHO-TM5细胞直接免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术,通过细胞ELISA (cellular enzyme-linked immunoabsorbent assay,CELISA)筛选出阳性克隆后,将杂交瘤细胞株腹腔注射Balb/c小鼠诱生腹水。用CELISA、流式细胞术、免疫组织化学染色法及免疫印迹法对所获McAb的特异性进行鉴定。我们获得了1株可稳定分泌抗hTM的McAb的杂交瘤细胞株NH-1,其亚型为IgGl,McAb腹水效价为1×10^(-6),腹水抗体含量为20 mg/ml。NH-1对相应抗原具有较高的组织特异性,在体内与正常组织的交叉反应少,对人脐静脉内皮细胞、CHO-TM5有特异性结合反应,说明NH-1可特异性识别天然的hTM分子,为进一步应用此McAb进行hTM生物学功能及临床意义研究提供了基础。

用改进的重叠延伸PCR技术构建三位点突变载体

目的:改进传统重叠延伸PCR方法,实现引入3个不同DNA突变位点的简便的多位点定点突变。方法:根据前期构建的包含人线粒体12S rRNA(NC 01290)3个热点突变位点的野生型质粒序列,利用Muta Primer 2.0软件设计针对3个热点突变位点的3对互补的定点突变引物,以野生型质粒为模板,结合重叠延伸PCR反应和冷冻析出法,产生同时包含3个突变位点的突变目的片段,酶切后克隆到载体中,测序确证是否突变成功。结果:DNA测序证实3个不同突变位点同时成功引入,定点突变载体构建成功。结论:用改进的重叠延伸PCR技术能简便、高效地获得多位点定点突变载体,在分子生物学领域有较高的使用价值。

突变敏感性分子开关快速筛查肥厚性心肌病MYH7基因Ala26Val突变

目的利用高保真聚合酶介导的突变敏感性分子开关联合琼脂糖凝胶电泳,建立对肥厚性心肌病MYH7基因Ala26Val突变进行快速筛查的技术平台。方法应用PCR反应扩增包含MYH7基因Ala26Val突变区域的基因序列,通过基因克隆技术与反向PCR体外定点突变技术,分别得到MYH7基因Ala26Val突变的野生模板与突变模板,并通过基因测序分析进行确证。设计与Ala26Val突变位点配对及三末端不配对的3′硫化修饰正向引物,在其下游设计一条反向引物,分别构成野生引物对与突变引物对,进行高保真DNA聚合酶介导的双向引物延伸反应,利用凝胶成像系统对其PCR结果进行分析。结果当突变引物对与突变模板配对时,引物被延伸,有PCR产物;与野生模板不配对时,引物却不能被延伸,无PCR产物。同样,野生引物对只有与野生模板匹配时得以延伸,而与突变模板不匹配时则不能延伸。结论高保真DNA聚合酶偶联硫化修饰引物构成的突变敏感性分子开关能够快速筛查肥厚性心肌病MYH7基因Ala26Val突变,达到非此即彼的二元化效果,该分子开关在肥厚性心肌病基因筛查中具有巨大的潜在应用价值。

利用hTM表达细胞株制备抗人血栓调节蛋白单克隆抗体

为了研制抗人血栓调节蛋白(hTM)的单克隆抗体(mAb),给经CHO细胞免疫的BALB/c小鼠腹腔注射环磷酰胺诱导其对CHO和CHO-TM5细胞的共同抗原表位产生免疫耐受,再用高效表达hTM的CHO-TM5常规免疫小鼠.细胞融合后,ELISA筛选分泌抗hTM的特异性mAb阳性克隆,并将其腹腔注射BALB/c小鼠诱生腹水.腹水中的mAb经亲和层析纯化后,采用ELISA、流式细胞术、免疫组织化学染色法及Westernblotting对其进行特异性鉴定.结果显示,共获得了5株阳性克隆,其中2F7可稳定分泌IgG1亚型的mAb,腹水抗体效价为1×10-6,含量为19.56g/L.2F7在体内与正常组织的交叉反应极少,对HUVEC、CHO-TM5有特异性结合,并可识别细胞裂解液还原条件下分子质量为105ku左右的蛋白质多肽.2F7的解离常数Kd约为1.22×10-9mol/L.实验结果表明,通过采用新的技术路线,直接应用hTM表达细胞株免疫小鼠,成功制备了具有高度特异性与高亲和力的抗hTMmAb,为其他来源困难的蛋白质mAb制备提供了可借鉴的技术方案,同时2F7的研究鉴定为进一步应用抗hTMmAb进行hTM生物学功能及临床意义研究提供了新的物质基础.

抗人血管内皮细胞膜蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的研制特异性抗人血管内皮细胞膜蛋白的单克隆抗体,为深入研究血管内皮细胞的功能及血管内皮细胞与疾病的关系提供基础。方法以血管内皮细胞株为免疫原直接免疫Balb/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,通过细胞酶联免疫吸附试验筛选分泌抗人血管内皮细胞膜蛋白的特异性单抗的阳性克隆后,将杂交瘤细胞株腹腔注射Balb/c小鼠诱生腹水。腹水中的单抗用蛋白质G琼脂糖凝胶-4B柱亲和层析纯化后,采用酶联免疫吸附试验、流式细胞术、免疫组织化学染色法及免疫印迹法对其特异性进行鉴定。结果获得了一株可稳定分泌抗人血管内皮细胞膜蛋白单抗的杂交瘤细胞株。特异性单抗NH-2亚型为IgG1,腹水NH-2效价为1×10-6,含量为18.82g/L。NH-2与人血管内皮细胞株和原代培养的人脐静脉内皮细胞均有特异性结合,并可识别细胞裂解液还原条件下相对分子量为40kDa左右的蛋白多肽。NH-2对相应抗原具有高度的细胞特异性及组织特异性,在体内与正常组织的交叉反应少。结论成功制备了抗人血管内皮细胞膜蛋白的单抗,在血管内皮细胞的生物学功能及临床意义研究方面将具有潜在的应用价值。

用高保真DNA聚合酶介导的PCR检测β地中海贫血热点突变

目的用高保真DNA聚合酶介导的PCR检测β地中海贫血基因热点突变。方法选取已知中国人群β珠蛋白基因CD41-42、IVS-2nt654、TATAbox-28、CD17、CD71-72及CD26热点突变位点为检测靶点,分别设计3'末端与野生型基因位点或突变型基因位点完全配对的引物,并用硫化磷酸修饰,进行高保真DNA聚合酶介导的引物延伸反应。用多重PCR反应体系检测临床已知分别含CD26和TATAbox-28突变热点患者的DNA标本。结果对野生模板而言,仅有野生型等位基因相关引物有产物产生,而突变型等位基因位点特异性引物无产物产生。反之,使用突变模板,仅突变型等位基因位点相关引物有产物产生,而野生型等位基因位点特异性引物无产物产生。高保真DNA聚合酶介导的多重引物延伸反应筛查含有CD26或TATAbox-28突变的患者DNA标本时显示,突变引物混合物只有相应突变位点的产物产生,而野生引物混合物则有除突变位点以外的其他5个位点的产物产生。结论建立了基于高保真DNA聚合酶的筛查β地中海贫血基因热点突变的PCR技术。

环磷酰胺免疫删减法制备细胞表面抗原单克隆抗体小鼠模型的建立

目的:观察不同剂量环磷酰胺(CP)诱导免疫耐受的作用,建立一个免疫删减法制备细胞表面抗原单克隆抗体(mAb)的动物免疫模型。方法:雌性BALB/c小鼠经CHO细胞免疫后分别给予不同剂量的CP诱导免疫耐受,选择血清抗体效价最低的一组小鼠按常规方式腹腔注射CHO-TM5细胞进行免疫。ELISA测定各小鼠血清中CHO抗体及CHO-TM5抗体效价,检测血清抗体对CHO细胞与CHO-TM5细胞结合反应的差异性。结果:BALB/c小鼠腹腔注射不同剂量的CP后,各剂量组均出现不同程度的免疫耐受作用。CP100mg/kg组与CP125mg/kg组小鼠血清抗体效价较低,接近阴性对照组。ELISA检测显示CP100mg/kg组血清抗体与CHO-TM5细胞呈阳性结合反应,不与CHO细胞结合;而CP0mg/kg组血清抗体与CHO细胞与CHO-TM5细胞的结合反应均呈阳性。结论:CP100mg/kg具有良好诱导小鼠对CHO和CHO-TM5细胞的共同抗原表位产生免疫耐受,相对增强对CHO-TM5细胞目的抗原hTM的免疫应答的作用,为免疫删减法制备细胞表面抗原mAb提供了一个理想的动物免疫模型。

药学专业药理学教学改革探讨

药学专业药理学教学一直沿用以传授知识为主的传统教学模式,既不利于发挥教师的主导作用,也不利于调动学生学习积极性,更不利于培养学生的思维能力。可以通过加强师资队伍建设,改革理论课教学内容,注重启发引导式教学方法,同时运用多媒体现代化教学手段等来实施药学专业药理学教学改革,以提高教学效果。

临床药物治疗学教学中案例教学法的实施

案例教学是一种行之有效的教学模式,正越来越被教育界广泛关注。充分考虑南华大学药学专业的课程体系与教学现状,结合临床药物治疗学课程特征,针对临床药物治疗学课程实施案例教学过程中如何建立案例素材库、怎样组织实施案例教学、评价和考核案例教学提出看法与建议,为培养创新型、应用型药学专业人才将来临床合理用药和开展药学服务奠定基础。

养任调冲汤改善更年期综合征大鼠糖脂代谢的机制研究

目的:观察养任调冲汤对更年期阴虚内热证大鼠糖脂代谢的影响并探讨其机制。方法:以去卵巢结合灌服热性中药的方法制备更年期阴虚内热证大鼠模型,养任调冲汤灌胃给药后,观察大鼠24 h饮水量、肛温、体质量增长等一般情况,检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、空腹血糖(FPG)及空腹胰岛素(FINS)水平,计算稳态胰岛素抵抗指数(HOMAIR)并测定血清瘦素(LP)及脂联素(APN)水平。结果:养任调冲汤治疗后,大鼠体质量增长缓慢、饮水量减少、肛温下降;血清HDL显著升高,LDL、TC与TG水平显著降低;FINS、FPG、HOMAIR水平则差异无统计学意义。高、中剂量组血清APN水平有所增高。血清LP水平虽有所下降,但差异无统计学意义。结论:养任调冲汤能缓解更年期综合征大鼠的阴虚内热证,调节其血脂代谢,对改善更年期综合征可能有效,其作用机制可能与升高血清APN和降低LP水平有关。

极端条件下的细胞培养技术

目的建立和优化无血清细胞培养新技术,探讨不同压力和不同血清水平下细胞的生长状态。方法选取在生物医学基础和应用研究方面具有重大价值的血管平滑肌细胞与肺癌细胞A549细胞株,采用高静水压代替血清的细胞培养新技术,观察在无血清培养条件下细胞的生长状态。结果通过利用静水压与无血清培养,显示了在无血清培养条件下的细胞类型依赖性生长现象:肺癌细胞A549不能生长,而血管平滑肌细胞能生长。结论该技术不仅在单克隆抗体与生长因子等细胞活性成分的工业化生产诸方面具有广泛的理论与实用价值;而且对人类在极端条件下的生产活动如太空探险和深海潜水等,可能具有一定的保健应用价值。

末端标记引物延伸反应对核酸单碱基辨认的实验研究

目的 探讨高保真DNA聚合酶的校正机制在核酸序列单碱基识别中的可能性。方法 采用三末端氚标记的引物与配对及不完全配对的模板进行引物延伸反应 ,对延伸产物片段进行放射性活性的检测。结果 当引物与模板配对时 ,其延伸产物含有可探测标记信号。当引物三末端与模板在单碱基水平不配对时 ,其延伸产物则不含可探测标记信号 ,表明引物三末端带有标记信号的碱基在高保真酶的错配纠正过程中被切除。结论 高保真酶的错配纠正机制与引物的三末端标记结合 ,能够有效辨认核酸序列单碱基 。

持续静水压对细胞增殖的影响

背景:血管平滑肌细胞在静水压替代血清培养的条件下能良好生长。目的:探讨无血清水平状态下,持续性静水压对细胞增殖的影响。方法:采用自行研制的压力可调细胞培养箱在0,12,16,20,24和28kPa条件下培养血管平滑肌细胞A10与血管内皮细胞HUVEC-12。结果与结论:A10细胞在16kPa压力的条件下增殖最明显,活性最强;HUVEC-12细胞在20kPa压力的条件下增殖最明显,活性最强。说明一定范围内的静水压可促进体外培养的A10与HUVEC-12细胞增殖、使其活性增加。

稳定高效表达人血栓调节蛋白的CHO细胞株的建立

目的:构建稳定高效表达人血栓调节蛋白(human thrombomodulin,hTM)的CHO细胞株,以便于大量生产纯化hTM蛋白。方法:利用脂质体li-pofectamine 2000将包含hTM基因全长序列的重组表达质粒pThr402转染CHO细胞。转染后用G418的选择性培养液筛选、挑取抗性克隆。采用流式细胞术和Western blotting检测hTM在CHO细胞膜表面的表达情况,筛选建立稳定高效表达hTM的CHO细胞株并对其稳定性进行观察。结果:重组表达质粒pThr402转染CHO细胞后,流式细胞术证实hTM稳定高效表达于随机挑选的5个抗性克隆细胞株的细胞膜表面,但表达量有差异。Western blotting分析检测显示hTM表达量较高的CHO-TM1、CHO-TM4与CHO-TM5细胞株的细胞裂解液出现了与预期值相符的约105000的特异性条带。CHO-TM5已经经过冻存复苏前后各20次传代,且无论有无G418选择压力存在,hTM表达水平无明显差异。结论:成功构建了稳定高效表达hTM的CHO细胞株,可望获得大量蛋白,为进一步研究hTM的生物学功能以及制备和筛选抗hTM的单抗开辟新的途径。

人血栓调节蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中的表达与鉴定

目的 获得表达人血栓调节蛋白的CHO-TM细胞，以便研制临床诊断治疗制品。方法 重组表达质粒pTh402提纯后利用lipofectamine脂质体转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO）．C418筛选后对阳性细胞用蛋白质印迹术（Westem blorting）定性检测人血栓调节蛋白（hTM）的表达情况。结果 血栓调节蛋白成功导入宿主细胞CHO并获得高效表达。结论 获得高效表达hTM的细胞CHO-TM，为进一步研究临床诊断治疗制荆创造了条件。