SARS-CoV-2 S1蛋白通过ATP/P2Y2和ERK1/2信号通路引起呼吸道上皮细胞IL-6和IL-8分泌

目的探究严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)S1蛋白诱导呼吸道上皮细胞炎症反应机制以及嘌呤能受体(P2Y_(2))参与S1蛋白引起的炎症反应。方法酶联免疫吸附实验(ELISA)测量S1蛋白和/或单克隆抗体(MAb)刺激的16HBE14o-细胞培养上清中白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)水平,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血红素氧合酶1(HO-1)、双特异性磷酸酶1(MKP-1)和P2Y_(2) mRNA的转录水平;小干扰RNA(siRNA)敲低P2Y_(2)表达后,ELISA检测S1蛋白刺激的16HBE14o-细胞培养上清中IL-6和IL-8水平。结果S1蛋白和MAb对细胞活力无显著影响(P>0.05)。S1蛋白刺激16HBE14o-细胞引起IL-6和IL-8分泌增加,上调HO-1、MKP-1和P2Y_(2) mRNA表达,增加了胞外ATP水平(P<0.001或0.01),MAb显著抑制了S1蛋白引起的IL-6和IL-8分泌(P<0.001或0.01)。siRNA敲低P2Y_(2)的表达能够显著降低S1蛋白诱导的IL-6和IL-8分泌,同时ERK1/2抑制剂PD98059也抑制了S1蛋白引起的IL-6和IL-8分泌(P<0.001)。结论SARS-CoV-2 S1蛋白能够通过ATP/P2Y_(2)和ERK信号通路诱导呼吸道上皮细胞发生炎症反应。