血清miRNA-146、LPS、ROS在早期妊娠胚胎丢失患者中的水平及临床意义

目的探讨血清微小RNA(miRNA)-146、脂多糖(LPS)和活性氧(ROS)在早期妊娠胚胎丢失(EPEL)患者中的水平及临床意义。方法选取2021年3月至2023年3月广东省东莞市妇幼保健院收治的100例EPEL患者作为研究组,另外选取同期在广东省东莞市妇幼保健院就诊的100例正常妊娠女性作为对照组,检测并比较研究组和对照组血清指标水平。培养HTR-8/SVneo细胞,按照不同转染方式分成miRNA-146抑制剂组、miRNA-146模拟物组及NC组。比较miRNA-146抑制剂组、miRNA-146模拟物组Toll样受体4(TLR4)蛋白和核因子-κB(NF-κB)蛋白水平,比较NC组、miRNA-146模拟物组和miRNA-146抑制剂组miRNA-146水平及HTR-8/SVneo细胞的凋亡率,比较不同水平LPS处理的HTR-8/SVneo细胞生长活力。采用Pearson相关分析EPEL患者miRNA-146水平与ROS、LPS、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、TLR4蛋白和NF-κB蛋白水平的相关性。结果研究组LPS、ROS、IL-6和TNF-α水平高于对照组,且雌二醇、孕酮、miRNA-146水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-146模拟物组miRNA-146水平高于miRNA-146抑制剂组和NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-146模拟物组TLR4蛋白、NF-κB蛋白水平低于miRNA-146抑制剂组,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同水平LPS(8、12、16、20μg/mL)处理的HTR-8/SVneo细胞生长活力低于20μg/mL LPS+miRNA-146模拟物处理的HTR-8/SVneo细胞生长活力,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-146抑制剂组HTR-8/SVneo细胞的凋亡率高于NC组和miRNA-146模拟物组,且NC组高于miRNA-146模拟物组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,EPEL患者miRNA-146水平与ROS、LPS、IL-6、TNF-α、TLR4蛋白和NF-κB蛋白水平呈负相关(r=-0.737、-0.614、-0.712、-0.729、-0.739、-0.708,P<0.05)。结论EPEL患者血清中miRNA-146水平明显下降,并与LPS、ROS、IL-6、TNF-α的水平呈负相关,可能是EPEL发生的影响因素之一,有望为临床预测孕妇发生EPEL提供新思路。

miRNA-146调控TLR4/NF-κB通路促进滋养层细胞增殖和迁移

目的探讨miRNA-146是否通过调控Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路促进滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖和迁移,以期为不明原因复发性流产(uRSA)的发病机制研究和防治提供参考。方法(1)细胞研究:将转染后的胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo分成miRNA-146抑制剂组、抑制剂对照组、miRNA-146模拟物组、模拟物对照组,检测各组HTR-8/SVneo细胞生长的活力、增殖、凋亡、迁移情况,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组TLR4、NF-κB、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的mRNA和蛋白相对表达水平。(2)动物研究:建立Dicer酶敲除的uRSA小鼠模型,将正常妊娠小鼠作为对照组,通过qRT-PCR检测胎盘组织的miRNA-146 mRNA表达情况,采用免疫组织化学法检测胎盘组织的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达情况。结果(1)细胞研究:与模拟物对照组比较,miRNA-146模拟物组HTR-8/SVneo细胞克隆形成率、增殖能力及迁移能力显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与抑制剂对照组和miRNA-146模拟物组比较,miRNA-146抑制剂组HTR-8/SVneo细胞克隆形成率、增殖能力及迁移能力显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。与模拟物对照组比较,miRNA-146模拟物组的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白和mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);与抑制剂对照组和miRNA-146模拟物组比较,miRNA-146抑制剂组的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白和mRNA相对表达量显著增加(P<0.05)。不同浓度(10~80μmol/L)miRNA-146对HTR-8/SVneo细胞生长活力的增长均有显著影响(P<0.05),并呈浓度依赖性。(2)动物研究:与对照组比较,uRSA组小鼠胎盘组织中miRNA-146 mRNA的相对表达量显著降低[(0.32±0.19)vs.(0.96±0.24),t=12.473,P<0.05],而TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6的蛋白表达有增高趋势。结论上调miRNA-146的表达具有促进胎盘滋养层细胞的增殖和迁移作用,其机制可能与负性调控TLR4/NF-κB通路相关。miRNA-146有望成为防治uRSA的潜在靶标。

加味补阳还五汤对心肌梗死后患者心室重构及miRNA-21、GDF-15表达的影响

目的:探讨加味补阳还五汤对心肌梗死后患者心室重构及miRNA-21、GDF-15表达的影响。方法:将100例心肌梗死患者作为研究对象,随机分为研究组、对照组各50例;对照组单纯采用传统的西医方法治疗,研究组在西医方法治疗的基础上给予加味补阳还五汤治疗。观察对照组、研究组中医证候积分变化、超声心动图、miRNA-21及GDF-15的表达水平、NT-Pro BN含量。结果:在进行治疗的4个月后,研究组总有效率89%,明显高于对照组总有效率78%(P<0.05);研究组中医证候积分改善也明显优于对照组(P<0.05);研究组经过加味补阳还五汤治疗后LVESV、LVEDV、NT-pro BNP、GDF-15水平下降明显,均显著低于对照组患者,研究组SV、LVEF水平升高明显,均显著高于对照组患者,差异均有统计学意义(均P<0.05);两组治疗后miRNA-21较治疗前表达水平升高,研究组升高更为明显。结论:使用加味补阳还五汤治疗心肌梗死后患者能取得显著的效果,补阳还五汤可调控miRNA-21高表达、GDF-15低表达,改善心脏功能,抑制心室重构,改善心肌梗死患者预后,值得临床进一步推广使用。

EB病毒DNA定量检测在鼻咽癌临床分期中的诊断价值

目的探讨EB病毒(EBV)DNA定量检测在鼻咽癌患者不同临床分期中的诊断价值。方法选取广东省汕头大学医学院附属粤北人民医院2013年3月至2015年12月500例病理诊断为鼻咽癌的患者作为研究组,同时选取200例健康体检人群作为对照组。2组同时采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法检测血浆EBV-DNA的表达量,并对2组之间及临床TNM分期I、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ的结果进行比较;再将其分别与酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测的血清EBV病毒壳抗原免疫球蛋白A(VCA-IgA)检测结果进行比较。结果荧光定量PCR方法检测EBV-DNA表达量中,研究组阳性率75.00%,对照组阳性率9.00%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。鼻咽癌患者血浆EBV-DNA拷贝数与临床TNM分期呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05);鼻咽癌分期越晚,血浆EBV-DNA拷贝数越高。结论血浆EBV-DNA水平与鼻咽癌患者临床TNM分期有显著相关性,可作为评估鼻咽癌患者临床分期的1种辅助性分子生物指标,具有较高应用价值。

肿瘤型M2-PK、APC、K-ras检测在结直肠癌诊断中的意义

目的检测结直肠癌患者粪便和血清的M2型丙酮酸激酶(M2-PK)、APC、K-ras水平,并分析M2-PK、APC、K-ras的水平与结直肠癌病理T分期的关系。方法将2015年1-10月在该院手术治疗的结直肠癌患者200例纳入该研究作为患者组,另外选取健康体检者100例作为对照组。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测结直肠癌患者血清和粪便的M2-PK、APC、Ras水平,并结合患者的病理资料对M2-PK、APC、K-ras的水平与结直肠癌病理T分期的关系进行分析。结果结直肠癌患者血清和粪便的M2-PK、APC、K-ras的表达水平分别高于对照组(P<0.05)。M2-PK、APC、K-ras的表达与结直肠癌的病理T分期有密切关系,且临床病理T分期较晚的患者M2-PK、APC、K-ras的表达水平更高(P<0.05)。结论结直肠癌患者血清和粪便的M2-PK、APC、K-ras水平较高且与肿瘤的临床病理T分期有关。M2-PK、APC、K-ras可作为早期诊断结直肠癌的分子标志物。

实时荧光定量PCR检测结直肠癌患者粪便肿瘤型M2-PK DNA及临床应用研究

目的建立适用于结直肠癌患者粪便标本肿瘤型M2丙酮酸激酶(M2-PK)DNA检测的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法,分析自建方法的临床应用价值。方法采用PCR方法扩增肿瘤型M2-PK DNA片段(162bp),纯化后采用TA克隆法转入PGM-T载体,构建重组质粒。以重组质粒为模板,建立实时荧光定量PCR检测方法,评价自建方法的敏感性、特异性和重复性。选择2014年1月至2016年6月确诊的结直肠癌患者200例,同期体检健康者100例,采用自建方法对受试者粪便和血清标本进行肿瘤型M2-PK DNA检测,并与酶联免疫吸附法肿瘤型M2-PK检测结果进行比较。结果测序结果证实重组质粒构建成功。自建方法检测肿瘤型M2-PK DNA的灵敏度为10copy/mL,对肌肉型M2-PK DNA和M1型丙酮酸激酶(M1-PK)DNA检测结果为阴性,批内及批间变异系数为0.3%~2.9%。实时荧光定量PCR检测患者粪便标本肿瘤型M2-PK DNA阳性率为92.50%,ELISA检测肿瘤型M2-PK阳性率为80.00%。粪便和血清标本肿瘤型M2-PK DNA实时荧光定量法检测结果与肿瘤病理分期密切相关。结论本研究建立的实时荧光定量PCR法适用于结直肠癌患者粪便标本肿瘤型M2-PK DNA检测,具有特异性强、灵敏度高的特点,可用于结直肠癌早期诊断。

直接免疫荧光法快速检测甲型流感病毒抗原的临床意义

目的探讨直接免疫荧光法快速检测早期甲型流感病毒抗原及其临床应用。方法选择临床上诊断为急性呼吸道感染入院的患者,采集标本200例,将其分为两组:冬春两季流行季节儿童组(100例)和夏秋两季非流感流行期间儿童组(100例),使用美国D3Ultra甲型流感病毒抗原检测试剂,采用荧光标记的单克隆抗体对感冒患者进行甲型流感病毒抗原检测。结果在冬春两季流感流行期间,100例儿童检测有8例阳性,阳性率为8%;在夏秋两季非流感流行期间100例儿童检测有2例阳性,阳性率为2%;两组阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论运用直接免疫荧光法快速检测甲型流感毒感抗原是一种经济、高效、快速、特异的检测方法,能指导临床快速诊断,合理用药。

韶关市1190例手足口病病原体检测结果分析

目的分析韶关地区手足口病病原体分布情况。方法收集2011年1月～12月的1190例手足口病患者的咽拭子,采用实时荧光PCR方法检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)。结果在1190份标本中病毒核酸阳性率为11.51%(137/1190),其中EV71占60.58%(83/137),CoxA16占39.42%(54/137);6月份高发,占29.08%(346/1190);男女比例为1.64:1,且0～4岁的患儿占93.11%。结论韶关地区2011年手足口病病原体以EV71为主,6月份高发,主要分布在0～4岁,男性多于女性,实时荧光PCR可用于手足口病病原体的检测,对手足口病的诊疗和防控具有重要意义。

广东韶关地区异常血红蛋白的分子流行病学调查

目的调查广东韶关地区异常血红蛋白(hemoglobin,Hb)的分子流行病学特点。方法对2011年11月至2012年5月来我院就诊的9731例调查对象进行血细胞分析和Hb电泳筛查,对电泳异常标本进行基因测序。结果共发现45例异常Hb患者,发生率为0.46%,其中E区带7例,G/D区带9例,J区带7例,K区带6例,Q区带16例。基因测序结果显示,α珠蛋白基因变异25例,基因频率为1.285×10^(-3),β珠蛋白基因变异20例,基因频率为1.028×10^(-3);发现9种异常Hb类型,包括Hb QThailand 16例,HbE 7例,Hb G-Chinese 6例,Hb New York 6例,Hb G-Coushatta 3例,Hb J-Bangkok 3例,Hb J-Broussais2例,Hb Ottawa 1例,HbG-Taipei 1例。结论韶关地区的异常Hb的发生率高于全国平均水平,异常Hb的基因类型及分布体现出客家人群特有的南方人群和北方人群交汇融合的特点。

肺心病血浆Lp-PLA2表达的临床意义

探讨肺心病血浆Lp-PLA2表达的临床意义。选取慢性肺源性心脏病患者150例作为研究对象(肺心病组),选择同期健康体检者150例(对照组),使用人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)—ELISA定量检测试剂盒进行检测,使用全自动生化分析仪检测TC、TG、HDL-C、LDL-C;使用全自动酶表分析仪检测C反应蛋白(CRP)。比较两组检测指标值。和对照组对比,肺心病组Lp-PLA2、TC、TG、LDL-C、C反应蛋白水平明显更高,HDL-C水平明显更低,差异具有统计学意义(P<0.05)。肺心病患者血浆Lp-PLA2明显上升,血浆Lp-PLA2水平检测可在一定程度上预示着肺心病的发生,值得进一步研究。

量子点荧光标志结肠癌细胞及在其组织芯片的应用价值

目的探讨新的分子荧光标志量子点(QDs)在结肠癌组织芯片上进行不同蛋白的检测及评价其临床作用。方法在结肠癌组织芯片上,利用QDs标志的链霉亲和素复合物(QDs-SA)能与生物素化二抗IgG荧光结合特点进行免疫荧光组织化学检测K-ras、MXRA5蛋白表达,评价其在蛋白定位情况。结果观察到K-ras、MXRA5蛋白在结直肠癌组织呈高表达,并定位于结肠癌细胞的细胞膜和胞核。结论 QDs具有很好的荧光作用,能与抗体紧密结合。采用链霉亲和素修饰的QDs,能够准确地检测结肠癌组织芯片上不同蛋白的定位,可为结肠癌体内和体外临床诊断提供新方法。

结肠癌患者粪便BRAF表达及临床意义

目的:研究鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)基因蛋白在结肠癌患者粪便中的表达及其与临床病理因素的关系。方法:随机选取汕头大学医学院附属粤北人民医院2015年5月至2016年5月的100例结肠癌患者、100例结直肠高危腺瘤患者和100例正常体检人群,进行粪便中BRAF蛋白的表达对照比较,同时分别进行常规肿瘤消化道相关标志物癌胚抗原(CEA),糖类抗原-199(CA-199),糖类抗原-724(CA-724)比较,采用免疫组织化学技术检测,并对其与临床病理因素的关系进行相关性分析。结果:BRAF蛋白在在结肠癌组、高危患者组和正常对照组粪便中的阳性表达率进行比较,差异具有统计学意义(P<0.05);与常规肿瘤消化道相关标志物CEA,CA-199,CA-724进行比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:BRAF蛋白的高表达与结肠癌的发生发展密切相关,对其进行检测可能会比较好的协助结肠癌的早期临床诊断。

AKT和PI3K基因在结直肠癌病人粪便的表达及临床意义

目的观察结肠癌患者粪便AKT和PI3K的表达情况,并探讨检测AKT和PI3K的临床意义。方法纳入我院2015年3月~2016年3月期间收治的150例结肠癌患者(结肠癌组)和同一时间段来我院接受健康体检的150例健康体检者(对照组)作为研究对象,分别采集两组研究对象粪便标本和血液标本,检测粪便AKT和PI3K以及血清肿瘤标志物CEA、CA-199、CA-724的表达水平,对比两组研究对象上述指标的检测结果。结果结肠癌组患者粪便AKT和PI3K的阳性表达率分别为50.67%和55.33%,均较对照组健康体检者的7.33%、10.67%高(P<0.05);结肠癌患者血清CEA、CA-199、CA-724的表达水平均较对照组健康体检者高(P<0.05)。结论结肠癌患者的粪便AKT和P I3K以及部分血清肿瘤标志物均具有明显的表达特征,临床可根据这些指标的检测结果辅助结肠癌的诊断,评估结肠癌患者的病情发展情况。

肺源性心脏病患者血浆Lp-PLA2的表达及与右心室功能的关系

目的:探讨肺源性心脏病(肺心病)患者血浆Lp-PLA2的表达及与右心室功能的关系。方法:研究开展时间从2015年1月~2016年10月,共50例肺心病患者,另外选取同期健康体检者50例作为对照组,检测两组低密度脂蛋白胆固醇、超敏C-反应蛋白、血浆Lp-PLA2,并且使用心脏超声检测右心室舒张末期容积、右心室收缩末期容积、右心室射血分数等心脏功能指标,对比两组检测指标。结果:(1)和对照组对比,肺心病组患者的LDL-C水平(3.15±0.89)、hs-CRP水平(18.99±16.38)、IgNT-pro BNP水平(3.38±0.55)和Lp-PLA2水平(285.55±21.99)明显更高,数据比较差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)和对照组对比,肺心病组患者RVEDV(155.15±45.00)、RVESV(79.99±16.38)明显更大,RVEF(43.38±2.55)明显更低,数据比较差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)根据Pearson相关分析结果,血浆Lp-PLA2和低密度脂蛋白胆固醇(r=0.299,P<0.05)、超敏C反应蛋白(r=0.515,P<0.05)、N末端B型脑钠肽前体(r=0.745,P<0.05)、心室舒张末期容积(r=0.550,P<0.05)、心室收缩末期容积(r=0.600,P<0.05)均为显著正相关关系,和心室射血分数(r=-0.609,P<0.05)为显著负相关关系。结论:肺心病患者血浆LpPLA2的表达及与右心室功能的关系密切,血浆Lp-PLA2和右心室舒张末期容积、右心室收缩末期容积均为显著正相关关系,和右心室射血分数为显著负相关关系。

结肠癌患者粪便人基质重塑关联蛋白的表达及其临床意义

目的:分析结肠癌患者粪便人基质重塑关联蛋白5(MXRA5)的表达特点及临床意义。方法:研究对象为汕头大学医学院附属粤北人民医院2015年5月至2016年5月收治的120例结肠癌患者(研究组)和同期120例健康体检者(对照组),采集两组患者粪便标本和血液标本,分别进行粪便MXRA5和血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原-50(CA-50)、糖类抗原-242(CA-242)检测,使用统计学软件对数据进行分析处理。结果:研究组患者粪便MXRA5的阳性检出率为85.8%,高于对照组健康体检者的13.3%,差异具有统计学意义(P<0.05);研究组患者CEA、CA-50、CA-242的表达水平分别为(16.03±3.15)μg·m L^(-1)、(101.17±12.53)KU·L^(-1)、(75.16±3.39)KU·L^(-1),均高于对照组健康体检者的(2.16±0.39)μg·L^(-1)、(9.36±0.41)KU·L^(-1)、(10.02±1.41)KU·L^(-1),差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:结肠癌患者粪便MXRA5的表达特征明显,临床医师可结合粪便MXRA5和血清肿瘤标志物的表达状况,对结肠癌的发生及发展进行判断和评估。

荧光PCR熔解曲线技术在地中海贫血产前诊断中的应用

目的探讨荧光PCR熔解曲线技术在地中海贫血产前诊断中的应用价值。方法采用GapPCR、PCR+导流杂交和荧光PCR熔解曲线技术检测143例产前标本的地中海贫血基因,结果不一致时采用DNA测序确认。结果 143例产前标本中检出重症地贫27例,包括20例重型α-地贫和7例重型β-地贫。荧光PCR熔解曲线技术在地中海贫血基因产前诊断中符合率100%。PCR+导流杂交技术检测α-和β-地中海贫血基因与其他2种方法各有1例结果不符,经DNA测序分析是由于PCR+导流杂交技术灵敏度高,因存在低比例的母体细胞污染所致。结论荧光PCR熔解曲线技术是一种高效、快速、准确的地中海贫血基因检测新技术,可用于地中海贫血产前诊断。地中海贫血产前诊断最好采用2种不同技术原理的方法独立检测,保证结果的准确可靠。STR技术检测母体细胞污染的低灵敏度需要警惕。