赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1与白血病的研究进展

表观遗传学是后基因组时代兴起的一门新学科,它使人们认识到包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑及非编码RNA调控在内的修饰也可以记载遗传信息;并且许多表观遗传改变是可逆的,对表观遗传修饰和调控的研究已成为生命科学的热点和发展前沿。2004年发现的赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(LSD1)是第一个真正意义上的组蛋白赖氨酸去甲基化酶,使人们认识到组蛋白甲基化是一个动态的过程,通过组蛋白甲基转移酶和去甲基化酶的相互作用,动态地调控基因转录的激活和抑制等生物学过程。这重新定义了组蛋白甲基化,同时也为进一步深入研究组蛋白修饰提供了新的途径。我们在此简要介绍LSD1的结构与功能、LSD1与白血病的关系,LSD1在白血病的发生和发展中发挥重要作用,是一个潜在的治疗白血病的靶基因。

富硒米曲霉发酵废液处理的研究

富硒米曲霉发酵产生的废液目前尚无现成的处理工艺或方法套用,为此考察了铁硒共沉淀法的除硒效果。结果表明,发酵废液pH值控制在5.5~6.5;氯化铁（FeCl3.6H2O）的投加量5 g/L;搅拌时间15 min;静置30 min;高速离心20 min（3000 r/min）;出水硒含量达到硒排放一级标准。

利用GST pull-down联合质谱技术鉴定H7N9禽流感病毒PA-X的互作蛋白

【目的】为探究H7N9亚型禽流感病毒(AIV)PA-X蛋白的功能,采用GST pull-down联合质谱技术筛选与鉴定与PA-X相互作用的宿主蛋白。【方法】构建PA-X的重组表达载体pGEX-4T-PA-X,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白,并利用GST亲合树脂进行纯化得到GST-PA-X融合蛋白。利用GST pull-down技术,将GST-PA-X和GST对照蛋白分别与A549细胞裂解液总蛋白进行体外孵育,得到的蛋白复合物经SDS-PAGE分离后进行质谱检测分析。【结果】经GST pull-down筛选与质谱分析鉴定后得到39个高可信度的可能与PA-X互作的候选蛋白质。通过GO注释和KEGG等通路富集分析发现,这些蛋白主要参与RNA的代谢及加工、mRNA翻译及运输、多肽生物合成及基因表达的转录后调节等生物学过程。对其中评分最高的蛋白Hsp70-2与PA-X的相互作用作进一步验证,免疫荧光试验结果表明Hsp70-2与PA-X可以在细胞浆中共定位。【结论】利用GST pulldown联合质谱技术筛选到39种与PA-X互作的候选蛋白,且经免疫荧光试验证明候选蛋白Hsp70-2与PA-X存在共定位,为深入探讨PA-X在AIV生命周期中的作用机制奠定基础。

狂犬病病毒M蛋白胞内合成和分布初步研究

【目的】狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)是一种主要由核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、糖蛋白(G)、依赖RNA的RNA聚合酶蛋白(L)5种结构蛋白组成的高度嗜神经性病毒。RABV基因组RNA与N蛋白、P蛋白和L蛋白组成核糖核蛋白复合体(RNP),M蛋白在调控RABV病毒结构蛋白的合成和装配过程中起重要作用。但RABV不同毒株M蛋白胞内合成、分布场所及其是否存在差异尚不清楚。研究不同RABV毒株M蛋白与内质网、高尔基体以及M蛋白与G蛋白、M蛋白与RNP在N_(2)A和BHK细胞内的共定位,以期确定RABV M蛋白的胞内合成途径和分布场所。【方法】测定RABV不同毒株(CVS-11、SRV-9、PB4)在N_(2)A或BHK细胞的TCID_(50),以相同的MOI接毒,通过免疫荧光研究M蛋白与内质网、高尔基体的共定位,以及M蛋白与G蛋白、M蛋白与RNP(为N蛋白代表)的共定位。【结果】RABV不同毒株效价存在一定差异。在N_(2)A和BHK细胞中,不同RABV毒株的M蛋白与内质网、高尔基体均存在共定位;M蛋白与G蛋白、M蛋白与N蛋白也存在共定位,但M蛋白与G蛋白主要共定位于内质网、高尔基体上,而M蛋白与N蛋白主要共定位在胞浆中。【结论】RABV M蛋白在胞内主要通过内质网-高尔基体途径合成加工。研究结果明确了RABV M蛋白胞内合成分布部位,为进一步研究RABV病毒粒子的装配和出芽过程丰富了数据。

微管对狂犬病病毒胞内感染的影响

狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)依赖宿主细胞完成其感染周期,且在胞浆内复制。微管作为一种细胞骨架,是介导胞内物质运输的重要通道。为探究狂犬病病毒胞内感染是否依赖于细胞骨架——微管,利用小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a),接种实验室标准攻击毒株CVS-11,通过诺考达唑(Nocodazole)抑制剂破坏微管形成,采用实时荧光定量PCR方法、WesternBlot方法、免疫荧光方法检测微管对于RABV感染量的影响,并采用TCID50法测定微管对RABV病毒滴度的影响。结果表明,Nocodazole通过抑制微管的形成,使RABVN基因水平降低25%、N蛋白水平降低50%,免疫荧光检测到病毒感染率降低70%,上清液中病毒滴度由106.5TCID50/mL降低至104.5TCID50/mL,说明狂犬病病毒胞内感染依赖于细胞骨架-微管的参与。该结果为进一步研究狂犬病病毒胞内运输及其复制机制的研究提供了理论依据。

基于GIS的哈尔滨市中小学分布分析

论文以哈尔滨市和平区中小学布局规划为例,通过对城市中小学选址规划相关因素的分析,经过空间分析给出综合评价,确定选址最优区位和评价指标。最后从空间分布和学校容量两方面对学校的现状和原规划做出评估,从而提出了小学规划的改进方案。此外,本文的研究结论对规划方案的最优化选择或对新的服务设施选址等方面也有一定实践意义,为中小学布局规划提供了有力的支持,为科学决策提供了一个参考平台。

与RABV感染相关表观遗传修饰酶的筛选

狂犬病病毒(rabies virus,RABV)作为一种嗜神经性病毒,致死率100%。表观遗传学修饰由多种修饰酶参与,调节多种病毒的感染周期。为筛选与RABV感染相关的表观遗传修饰酶,本研究将实验室标准攻击毒株CVS-11接种于小鼠神经母细胞瘤(N2a),采用实时荧光定量PCR技术检测不同时间点表观遗传修饰酶的基因表达水平。结果显示,随RABV感染时间延长,DNA甲基化转移酶DNMT3b,组蛋白去乙酰化酶HDAC1、HDAC3、HDAC6,组蛋白去甲基化酶PHF8和组蛋白甲基转移酶EZH2、SETDB1、SUV39H1基因表达水平降低。这些变化初步显示,RABV感染导致了细胞功能的激活,为进一步研究调控狂犬病病毒感染的表观遗传学机制提供了基础。

小槐花提取物对甲型H1N1流感病毒感染的体外抑制作用

采用CCK8法测定小槐花提取物在MDCK细胞上的最大安全浓度(Maximum no-cytotoxic concentration,MNTC);建立甲型流感病毒A/PR8/34(H1N1,PR8)感染MDCK细胞模型,CCK8法检测其对病毒感染细胞病变的抑制作用;利用荧光定量PCR及免疫印迹方法,检测小槐花提取物对流感病毒基因、蛋白,以及宿主炎症相关转录因子和炎性细胞因子表达的影响。细胞毒性试验结果显示,小槐花提取物对MDCK细胞的MNTC为100 mg/L;qRT-PCR结果显示,小槐花提取物能显著抑制PR8流感病毒M与NP基因的mRNA表达(P<0.01),也可显著下调病毒感染细胞的转录因子NF-κB p65、STAT3及炎性细胞因子IL-1β、TNF-α基因的表达水平,且其抑制作用与药物浓度正相关;免疫印迹法检测显示,100 mg/L的小槐花提取物极显著抑制了流感病毒M1蛋白的表达(P<0.01)。小槐花提取物具有较显著的体外抗流感病毒效果,此研究结果为从小槐花中鉴定具有抗流感病毒的确切药效成分奠定基础。

狂犬病病毒感染N2a细胞引起的转录体差异表达

狂犬病是一种人畜共患疾病,对全球公共卫生构成极大威胁。狂犬病病毒(RABV)呈嗜神经性传播,会引发宿主严重的神经功能紊乱,致死率几乎100%。为鉴定RABV影响神经细胞功能的重要基因,本研究采用RNA测序(RNA-seq)方法建立并分析了固定毒株CVS-11感染小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a,N2a)的mRNA表达谱,并通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析确定差异表达基因(DEGs)。结果显示,在CVS-11毒株感染的N2a中,共有415个差异表达基因,其中89个为上调基因,326个为下调基因。差异表达基因涉及多种生物学过程,包括轴突传导信号通路、胆固醇代谢通路、氮代谢信号通路、鞘糖脂生物合成信号通路等,其中多种DEGs已被证明与RABV感染密切相关,从中挑选出12个与轴突传导、抗原处理与呈递等通路相关的差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证,其变化趋势与RNA-seq结果一致。本研究检测了神经细胞在RABV感染条件下基因转录组变化,为探究RABV感染对神经细胞功能的影响机制提供了新的线索。

狂犬病病毒入胞途径的初步探索

狂犬病病毒（rabies virus,RABV）具有高度嗜神经性,通过识别细胞膜上特异性受体并借助内吞途径侵入细胞。为了探究其入胞途径,本研究在人神经瘤细胞（SH-SY5Y）和非洲绿猴肾上皮细胞（Vero）上,应用氯丙嗪（chlorpromazine）、制霉菌素（nystatin）、巴弗洛霉素a1（bafilomycin a1）、dynasore等抑制剂处理细胞后,进行RABV感染,通过检测病毒N基因拷贝数和RABV效价,对RABV入胞途径进行初步探究。结果显示,RABV通过网格蛋白介导、低pH值和发动蛋白（dynamin）依赖途径侵入SH-SY5Y和Vero细胞,但不通过小窝蛋白依赖途径入胞。这些结果为进一步研究狂犬病病毒感染机制和药物靶点研究提供了新的数据。