农杆菌介导胡萝卜转化体系的诱导培养基优化

高频再生系统是外源基因成功转化的先决条件,但再生系统不等同于转化系统。为提高农杆菌共培养后胡萝卜的再生频率,以日本新黑田五寸参和林丰改良五寸参2个品种胡萝卜下胚轴为外植体,利用农杆菌介导法将人源白细胞介素-2基因(IL-2)导入其中,探讨了共培养后诱导培养基中激素浓度和筛选剂对再生的影响。结果显示:不同基因型胡萝卜的分化对激素浓度的反应不同,林丰改良五寸参在3种培养基上的胚性愈伤率差异不显著;日本新黑田五寸参胚性愈伤率和每个外植体分化的抗性株数随激素浓度的提高而呈上升趋势,2,4-D和6-BA浓度为1.0mg/L时胚性愈伤率和每个外植体分化的抗性株数最高,分别为87.50%和59株;日本新黑田五寸参以bar基因为标记基因、PPT作筛选剂时,分化较好。因此,遗传转化过程中,为提高共培养后胡萝卜胚状体的分化率,对共培养后的诱导培养基进行再优化是必要的。

应用一次性生物反应器大规模培养BHK-21细胞

采用20mL、220mL、10L、100L一次性激流&灌注式生物反应器连续灌注培养BHK-21细胞,通过控制pH、DO等工艺参数,得到稳定的培养BHK-21细胞的大规模培养工艺。从20mL、200mL、10L到100L实现了细胞数的逐级放大,认为该工艺为细胞反应器大规模生产动物疫苗奠定了技术基础。

激流—灌注式反应器大规模培养Vero细胞工艺研究

反应器培养Vero细胞以微载体(Cytodex等载体)及NBS公司CellGen310酯片培养为主,培养工艺对设备、技术要求高,一次性投资大,微载体和酯片处理繁琐,耗材价格昂贵,生产成本高。实验采用一次性激流-灌注式生物反应器大规模培养Vero细胞,通过控制DO、pH等条件,开发出便捷、稳定的大规模培养工艺,为疫苗工业采用大规模细胞培养工艺生产疫苗奠定基础。