牛体外受精胚胎抗氧化相关的长链非编码RNA表达谱

旨在探究培养液中添加3mmol·L^(-1)谷胱甘肽(Glutathione,GSH)对牛体外受精胚胎中长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)表达谱的影响。收集8~16-细胞期和桑椹期的胚胎,构建文库后测序,筛选差异lncRNAs,共表达分析后,获得的差异基因进行GO功能注释和KEGG通路分析;同时对lncRNA进行了顺式作用靶基因的预测及其功能分析;通过荧光定量PCR对8个lncRNAs表达水平进行检测,验证测序结果的准确性。测序共得到4 273个lncRNAs,通过对其表达量、长度和外显子个数分析表明,测序数据的可靠性较好。筛选共得到59个差异lncRNAs(其中23个在对照组(不添加GSH)上调,而在处理组(添加3mmol·L-1 GSH)下调;36个在对照组下调,而在处理组上调),在对照组和处理组中,59个lncRNAs分别与754和2 782个蛋白编码基因共表达,这些基因分别参与47和48个功能分类,且主要富集于5和13条信号通路。对23和36个差异lncRNAs临近的145和154个蛋白编码基因进行GO注释,结果表明,这些基因分别参与35和43个功能分类。14个lncRNAs共表达的差异基因参与谷胱甘肽代谢通路。综上表明,在培养液中添加GSH能导致胚胎lncRNA表达谱的变化。

抽提物处理供体细胞对克隆胚胎发育的影响

本研究采用爪蟾卵母细胞抽提物处理和牛胎儿成纤维细胞（JBCFF）,并以发生重编程的细胞为核供体进行体细胞核移植,研究其对克隆效率的影响。分别超排3只爪蟾,收集卵母细胞后提取其抽提物,用BCA蛋白浓度测定试剂盒确定其蛋白含量,SDS-PAGE分析其中所含蛋白的种类。应用细胞膜透化剂Digitonin对建立的JBCFF进行通透处理和PI染色,筛选最适浓度;并用获得的抽提物处理牛体细胞,获得重编程细胞。以发生重编程的体细胞为供体进行核移植,同时比较离子霉素＋6-DMAP和A23187＋6-DMAP两种组合激活后克隆胚的体外发育能力。结果,3个爪蟾卵母细胞抽提物样品的蛋白浓度分别为56.2255、64.6570和71.2158μg/mL,其中所含蛋白种类一致,主要集中在40-55、70-100ku之间。经过连续的筛选,透化剂Digitonin对JBCFF通透处理的最适浓度为7μg/mL,PI染色显示透化效率为55.44%。爪蟾卵母细胞抽提物与体细胞共孵育后继续培养6-7d,细胞聚集形成＂克隆簇＂。分别以＂克隆簇＂细胞和未处理细胞为核供体,制备的重构胚在融合率（92.83%和96.04%）、卵裂率（89.64%和89.78%）和囊胚率（24.06%和23.12%）均无显著差异（P〉0.05）;离子霉素＋6-DMAP和A23187＋6-DMAP两种激活方式对克隆胚胎的分裂率（92.16%和92.28%）和囊胚率（23.21%和24.18%）均无显著影响（P〉0.05）。爪蟾卵母细胞抽提物诱导和牛体细胞发生重编程,并恢复到较低的分化状态,但没有显著促进克隆胚胎的体外发育,可见缺少对胚胎发育起重要作用的重编程过程,还需要继续深入研究。

谷胱甘肽促进牛体外受精胚胎发育的转录组初探

旨在探究牛体外受精胚胎的培养液中添加3mmol·L^(-1)谷胱甘肽(Glutathione,GSH)后,8~16-细胞期和桑椹期的牛体外胚胎在转录组水平上的变化。收集8~16-细胞期和桑椹期的体外受精胚胎,构建文库,通过Illumina平台进行测序;筛选差异基因,并进行功能注释和代谢途径分析;采用定量PCR对10个基因的表达水平进行检测,以验证测序结果的准确性;在获得的新转录本中挑选3组进行RNA和蛋白结构的预测。通过OOSP1、THAP9等10个基因的定量检测、测序结果的质量评价(碱基错误率、Q20、Q30、GC含量)、reads与牛基因组的比对及其在基因组的分布统计分析,均说明该测序结果准确、可靠。测序获得差异表达基因4 100个(其中,处理组8~16-细胞期胚胎和桑椹胚中3 952个,对照组中884个),已知基因2 225个,未知基因1 875个。这些差异基因主要富集到与ATP合成、呼吸链、DNA合成、翻译过程和物质代谢相关的84条GO terms上,参与细胞黏附、柠檬酸循环、谷胱甘肽代谢、溶酶体以及氨基酸代谢等27条通路。另外,与已知的转录本相比,5个新转录本中均发现不同长度的新外显子;预测的蛋白结构中除包含各自的保守结构域(丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的催化结构域、MAD同源结构域)外,还发现2个新的蛋白结构域(低复杂区、dwarfins蛋白家族B结构域)。综上表明,在培养液中添加GSH能导致胚胎转录谱的变化,显著提高胚胎的体外发育能力。

一种同时进行牛囊胚差异染色和凋亡染色的方法

旨在优化双重荧光染色方法的基础上,建立囊胚的三重免疫荧光染色方法,以期更经济、高效、准确地评估胚胎质量。三重免疫荧光染色方法分别用CDX2蛋白、caspase-3蛋白和Hochest 33342标记囊胚的滋养层细胞、凋亡细胞和所有细胞的细胞核,共3种染色方案。双重荧光染色方法采用PI染色滋养层细胞,或通过TUNEL法进行凋亡细胞染色;而囊胚细胞的细胞核用Hochest33342染色。结果表明,三重免疫荧光染色方法获得的图像清晰,能准确地标记囊胚中的各类细胞。另外,比较3种染色方案的准确性、复杂性及染色效果,确定两种一抗或两种二抗共同孵育的方案准确度高、效果好、且用时最短,为最佳染色方案。综上表明,在同一枚囊胚中,通过标记CDX2和caspase-3蛋白来鉴定其滋养层细胞和凋亡细胞,并进行囊胚质量的评估是可行的,而且较双重荧光染色有较大的优势。

事业单位财务管理中的税务管理问题研究

随着经济的快速发展和社会事业的蓬勃兴起,事业单位财务管理日益受到关注。作为事业单位财务管理的重要组成部分,税务管理对于保证事业单位的财务稳健发展起到关键作用。本文通过分析税务管理在事业单位财务管理中的作用,探讨事业单位税务管理中存在的问题,并提出相应的对策。通过案例分析,深入了解事业单位税务管理的实际操作。本文旨在提高事业单位税务管理水平,促进事业单位财务管理的规范化和透明化,降低税务风险并提高税收合规性。

浅谈事业单位固定资产管理中的挑战与对策

随着国家事业单位改革的不断深化和财务制度的改革完善,事业单位的固定资产管理已经成为一项十分重要的工作。然而,在实际操作中,许多事业单位在固定资产管理方面仍然存在着一系列挑战和困难,如资产信息管理不规范、资产保管管理不到位、资产盘点不精准、资产卡片不完善等问题。这些问题直接影响了事业单位的资产利用效率和管理效能,给事业单位的发展带来了诸多隐患。因此,本文旨在探讨事业单位固定资产管理中的挑战与对策,为事业单位的资产管理提供有益的参考和借鉴。

阿立哌唑与利培酮治疗精神分裂症的效果比较

目的比较阿立哌唑与利培酮治疗精神分裂症的效果。方法选取2016年2月～2017年2月我院收治的120例精神分裂症患者作为研究对象,按照随机数字表法分为A与B组,每组各60例。A组患者采取阿立哌唑治疗,B组患者采取利培酮治疗,比较两组患者的临床治疗效果。结果两组的总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组治疗前的阳性症状、阴性症状、一般精神病理评分以及总分比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组治疗后各评分均低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后的阳性症状、阴性症状、一般精神病理评分以及总分比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组的不良反应总发生率(8.33%)低于B组(18.33%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿立哌唑与利培酮在精神分裂症患者的治疗中均具有一定价值,可明显缓解相关症状,促进病情稳定,但阿立哌唑安全性更高,可有效降低不良反应的发生率,安全性高,为预后提供保障。

在新形势下做好党校财务工作的策略

随着国家综合实力的提升,对于党校的建设工作越来越重视,近年来也逐渐加大改革力度,并取得了非常显著的成果。党校作为培养干部的重要机构,为社会、政府输送了优秀的领导干部。基于此,在当前新形势下,做好党校财务工作,使党校资金合理利用起来,有效降低贪污腐败的事件发生,促进党校的可持续健康发展,为我国社会主义现代化建设贡献一份力量。