鸭星状病毒血清1型单克隆抗体的制备与鉴定

为制备鸭星状病毒血清1型(DAstV-1)单克隆抗体,本研究以原核表达的重组VP70蛋白免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,3次免疫后取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合。利用间接ELISA方法筛选到5株阳性单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为1G11、1G5、1D5、5A10和5F3。Western blot试验表明,5株单抗均能特异性识别293T细胞中表达的VP70蛋白。间接免疫荧光试验(IFA)显示,5株单抗均能与LMH细胞中的DAstV-1抗原发生特异性反应。制备小鼠腹水,通过间接ELISA检测其中VP70蛋白特异性抗体含量,其中1G1效价为1∶1 024 000,1G11和1D5效价为1∶256 000,5A10和5F3效价为1∶128 000。相加ELISA结果显示,5株单抗可能识别相同的抗原表位。本研究制备的单抗为DAstV-1检测方法的建立提供了有效材料,也为该病毒的感染与致病机制研究奠定了基础。