α-Galcer对小鼠NKT细胞超微结构的影响

本实验观察在α-半乳糖神经鞘胺醇（α-Galcer）诱导下，小鼠NKT细胞超微结构的改变．分离小鼠脾脏单个核细胞，MTT法观察细胞对α-Galcer的药物敏感性，流式细胞术分选活化和未活化的NKT细胞，并用透射电镜观察NKT细胞超微结构．研究发现在24h，50～100ng／mL的α-Galcer作用下，实验组NKT细胞的增殖活性显著高于对照组（P〈0．05）．流式细胞术结果显示实验组活化NKT细胞百分率明显高于对照组（P〈0．05）．电子显微镜观察显示，活化的NKT细胞呈典型细胞活化改变，凋亡的NKT细胞，核固缩，致密形成新月小体，核膜破裂，凋亡小体形成．说明α-Galeer可促使小鼠NKT细胞活化，且活化的NKT细胞产生大量分泌小泡．

α-半乳糖酰基鞘胺醇诱发小鼠流产机制初探

目的利用α-半乳糖酰基鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)诱发性C57BL/6J小鼠流产模型,初步探讨NKT细胞活化与C57BL/6J小鼠流产的关系。方法孕7 d和孕10 d C57BL/6J小鼠,每组8只腹腔注射α-Galcer,72 h后处死鼠剖腹探察胚胎数量。于0,24 h取胎盘淋巴细胞,流式细胞术检测CD3+NK1.1+细胞百分率和CD69+/CD3+NK1.1+细胞百分率,ELISA方法检测α-Galcer处理不同时间血清孕酮(P)水平,并做子宫胎盘免疫组化切片观察。结果C57BL/6J小鼠可由α-Galcer引起流产。胎盘CD3+NK1.1+淋巴细胞在0,24 h分别为(2.96±0.22)%和(4.17±0.67)%,CD69+/CD3+NK1.1+细胞百分率分别为(6.54±1.13)%和(82.45±5.85)%。ELISA方法测得血清P浓度为(0.15±0.01)ng/ml与对照组(1.28±0.03)ng/ml相比差异有显著性。胎盘子宫免疫组化切片显示α-Galcer处理组孕激素受体(PR)表达明显强于对照组。结论α-Galcer可诱发C57BL/6J小鼠流产,NKT细胞的活化及其分泌的细胞因子可能是导致流产的主要原因。

小鼠NKT细胞体外扩增的初步研究

目的探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法。方法分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术和流式细胞术(FACS)检测NKT细胞纯度,并用MTT法检测其对靶细胞K562的杀伤活性。结果脾NKT细胞在第0、4、8、12天计数细胞总数为0.5×107、(1.3±0.1)×107、(1.9±0.2)×107和(2.2±0.2)×107,第0、4、8、12天纯度分别为(6.27±1.04)%、(8.54±1.58)%、(10.65±1.95)%和(21.36±4.34)%;α-Gal-cer和rhIL-2作用下,纯化的NKT细胞较脾新鲜分离的单个核细胞对靶细胞K562的杀伤作用强。在效靶比20∶1时,培养时间为4、8,12天的NKT细胞杀伤率分别为52.7%、71.2%和85.7%,明显高于脾MNC33.8%(P<0.05)。结论在α-Galcer和rhIL-2作用下,小鼠NKT细胞得到扩增,细胞纯度约为22%。在效靶比20∶1时,NKT细胞对K562细胞杀伤率约为86%。

卵巢癌OVCAR3细胞中CD133^＋细胞群的分离及其特性

卵巢癌的病死率居妇科恶性肿瘤之首，5年生存率不足30％，其发生、发展机制尚不清楚。肿瘤干细胞理论认为，肿瘤中存在一小群具有自我更新和多向分化潜能的细胞，即肿瘤干细胞，可能是肿瘤转移和复发的根源。