以聚乙二醇水凝胶膜为载体构建的角膜上皮移植片对LSCD治疗的可行性

目的探讨聚乙二醇水凝胶膜(PHFs)是否能作为角膜上皮细胞(CECs)体外扩增的载体以及其能否用于角膜缘干细胞缺乏症(LSCD)的治疗。方法利用癸二酰氯、聚氧乙基甘油醚、聚已酸内酯二醇人工合成PHFs,检测其厚度、透光度和机械拉伸性能。取清洁级新西兰大白兔4只,培养原代角膜缘上皮细胞,荧光显微镜下观察培养细胞中角蛋白标志物AE1/AE3和干细胞标志物p63的表达;将细胞分为阴性对照组、阳性对照组和PHFs+CECs组,其中将阴性对照组细胞直接种植在培养皿底,加入普通细胞培养液,将阳性对照组细胞种植在培养皿后加入含有100μmol/L H_(2)O_(2)的普通细胞培养液,将PHF+CECs组细胞种植在铺有PHFs的培养皿中用普通细胞培养液培养,各组培养24 h。采用MTT和TUNEL染色法分别观察3个组细胞增生和细胞凋亡情况。采用随机数字表法将清洁级新西兰大白兔15只分为对照组、PHFs组和PHFs+CECs组,每组5只。其中对照组造模后不给予任何处置;PHFs组将空PHFs膜置于LSCD实验兔角膜表面;PHFs+CECs组为将CECs传代后种植于PHFs上构建组织工程移植片后将移植片置于LSCD兔模型的角膜表面。采用荧光素染色法检测各组实验兔角膜缺损面积大小并评分;采用苏木精-伊红染色法检测各组实验兔角膜上皮组织学特点。结果PHFs厚度不超过150μm,能承受约6 MPa的拉力,在400~700 nm可见光范围内透过率>99%。角膜缘原代培养的大多数细胞AE1/AE3染色和p63染色阳性。MTT实验结果显示,PHFs+CECs组、阴性对照组和阳性对照组A_(490)值分别为0.59±0.01、0.65±0.07和0.06±0.04,总体比较差异有统计学意义(F=12.25,P<0.05),其中PHFs+CECs组和阴性对照组A_(490)值明显大于阳性对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。TUNEL检测结果显示,PHFs+CECs组、阴性对照组和阳性对照组TUNEL阳性细胞率总体比较差异有统计学意义(F=13.45,P<0.05),其中PHFs+CECs组和阴性对照组TUNEL阳性细胞率明显低于阳性对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。荧光素染色结果显示,随着术后时间的延长,各组角膜荧光素钠染色评分均降低,对照组、PHFs组和PHFs+CECs组角膜荧光素钠染色评分依次降低。苏木精-伊红染色结果显示,对照组存在较少形状不规则的角膜上皮细胞,PHFs组一些区域出现单层稀疏的角膜上皮细胞;PHFs+CECs组角膜上皮覆盖范围最大,细胞层数增加到3~5层,形态较规则,排列较紧密。结论PHFs韧性强、透光度高且能够体外扩增角膜上皮,适合做角膜上皮移植片,并能促进LSCD兔模型角膜上皮的修复。

非编码RNA与血管内皮功能障碍的研究进展

血管内皮功能障碍(vascular endothelial dysfunction,VED)是动脉粥样硬化、心肌梗死、代谢综合征等多种疾病的前期阶段,研究表明,VED与非编码RNA(noncoding,ncRNA)关系密切,ncRNA主要包括微小RNA(microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)、环状RNA(circular RNA,circRNA)等,本文中作者就miRNA、lncRNA、circRNA与血管内皮的关系作一综述。

聚乙二醇水凝胶膜为载体的人角膜上皮细胞原代培养研究

目的观察人角膜上皮细胞(corneal limbal epithelial cells,CLEC)的生物学特性,探讨CLEC在普通培养皿和聚乙二醇水凝胶膜(poly(ethylene glycol)-based hydrogel films,PHF)上的增殖率差异。设计实验研究。研究对象人角膜上皮细胞。方法采用组织块培养法体外扩增CLEC,待细胞生长至指数生长期,分别种植于普通培养皿和PHF上,倒置显微镜下观察培养细胞的生长特点,利用免疫荧光对其鉴定,利用CCK-8比色法观察两组细胞相对增殖率(relative growth rate,RGR)的差异。主要指标光镜下CLEC的生长,AE1染色,CCK-8比色法的吸光度(optical density,OD)值。结果光镜下可见CLEC在普通培养皿和PHF上均能移行扩增、融合成片,在PHF上的生长速度与普通培养皿组相近。两组细胞AE1荧光染色均呈阳性,PHF组阳性率(73.26%±8.84%)与普通培养皿组(70.84%±3.51%)基本相同。PHF组在12 h(0.89±0.06)、24 h(1.13±0.10)、48 h(1.24±0.03)的OD值与普通培养皿组(0.89±0.03、1.08±0.04、1.28±0.09)差异无统计学意义(P=0.79,0.36,0.76)。PHF组细胞在12 h(99.12%±4.81%)、24 h(103.74%±5.55%)、48 h(97.83%±13.37%)的RGR均大于75%,各时间点间差异无统计学意义(P=0.37,0.90)。结论PHF可以作为体外扩增角膜上皮细胞的良好载体。

糖尿病高游离脂肪酸血症与血管内皮细胞功能障碍

研究发现，血管内皮细胞功能障碍vascular endothelial dysfunction，VED）是糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）、糖尿病。肾病、动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）等糖尿病血管并发症发生的共同早期阶段，与糖尿病高血糖、血脂代谢紊乱、肾素．血管紧张素系统上调等多种因素有关，其中，VED与游离脂肪酸（FFA）升高关系密切，日益受到关注。本文就二者之间的关系及相关机制作一综述。