微波/光波辅助提取茶皂素的研究

以油茶饼粕为原料,研究了用微波/光波预处理辅助提取茶皂素的方法。经与水浸提法和乙醇溶液浸提法进行比较,发现微波/光波预处理辅助提取茶皂素可大大缩短提取时间,且茶皂素的提取率也有一定程度的提高。通过正交实验,得出最佳工艺参数为:加热功率800W、55%微波+45%光波辐射、辐射时间为4m in、传热介质为DMF,在此条件下,茶皂素的提取率为8.68%。

微波干法辅助提取绞股蓝总皂苷的研究

以绞股蓝为原料,研究微波干法辅助提取绞股蓝总皂苷的新工艺。通过正交试验,得出微波处理最佳工艺参数为:功率800W、100%微波、辐射时间2min。在此条件下,经微波预处理70%乙醇快速浸泡提取,所得的绞股蓝总皂苷提取率为8.37%。与传统的乙醇回流提取法进行比较,发现微波干法辅助提取绞股蓝总皂苷提取时间缩短了近9h,提取率提高了15.8%。

木鳖子提取物对朱砂叶螨的触杀活性

测定了木鳖子提取物对朱砂叶螨的触杀活性。用甲醇、氯仿、石油醚3种不同极性的溶剂提取,石油醚提取率最高为30.79%,且对朱砂叶螨成螨和卵的触杀活性均高于其他两种溶剂的提取物,24 h校正死亡率分别为77.52%和72.04%。用甲醇对石油醚提取物萃取,发现甲醇萃取物活性明显高于石油醚部分,对成螨和卵处理24 h后的校正死亡率分别为89.60%和74.65%,产卵抑制率为62.74%,驱避率为58.23%。柱层析对甲醇萃取物进行分离得到10种组分,组分5活性最高,浓度为2 mg/mL时,24 h校正死亡率为86.15%。用薄层层析和气相色谱质谱联用仪分别检测组分5纯度和主成分,初步确定活性成分为α-菠菜甾醇。

8种中药提取物对朱砂叶螨触杀活性的研究

采用玻片浸渍法测定了24种植物粗提物对朱砂叶螨的杀螨活性。结果表明:当提取物质量浓度为2mg/mL时,木鳖子和石楠叶的甲醇粗提物,木鳖子、鹤虱、石楠叶和蛇莓的氯仿粗提物,急性子和木鳖子的石油醚粗提物对朱砂叶螨成虫有较好的触杀活性。其中致死率最高的为木鳖子的石油醚粗提物,致死率为77.52%;瓦松的甲醇粗提物对螨的致死率最低,为9.52%。根据初步筛选结果,选取急性子的石油醚粗提物和木鳖子的石油醚、氯仿粗提物做进一步的毒力测定,结果表明毒性最强的为木鳖子的石油醚粗提物,其LC50值为0.539 5 mg/mL。

移动碎砂设备助力混凝土企业降耗提质

碎石就是将是符合工程要求的岩石、卵石或矿山废石,经破碎、筛分设备制成粒径大于5 mm有棱角的的岩石颗粒。这种碎石是混凝土的必须材料,一般混凝土使用粒径5~25 mm的碎石。混凝土中碎石用量占总量的50%左右,因此碎石组成性质及其级配对混凝土的和易性、混凝土强度、变形及耐久性具有重大影响。

茶皂素光波干法提取与产品开发

本文考察茶皂素的微波光波组合无溶剂提取方法,发现微波光波提取干法不用溶剂,仅用微量的DMF作为能量传递介质,提取速度是传统提取方法的1800倍以上,成本明显降低。利用高倍FM、IR等手段对微波提取机理进行初步研究,从微波对植物组织结构的影响上阐明次生代谢产物的微波提取机理。利用提取的茶皂素开发成洗发香波,对多个配方进行了多方面的性能评价,其中两个配方的多项指标达到或优于国家标准。

农杆菌介导虎杖芪合酶基因遗传转化壶瓶枣的研究

【目的】白藜芦醇作为植物次生代谢产物不但能提高果树抗真菌能力,还能改善果品质量。遗传转化芪合酶基因能够增强植物的抗真菌能力,虎杖芪合酶基因具有较高的催化合成白藜芦醇的效率,研究虎杖芪合酶基因遗传转化壶瓶枣,以期获得具有抗真菌能力且改善枣果实品质的遗传转化新材料。【方法】通过组织培养再生体系与目的基因转化技术,优化获得茎诱导丛生芽,构建植物表达载体,优化遗传转化体系,采用农杆菌介导法将虎杖白藜芦醇生物合成关键酶基因Pc PKS5遗传转化壶瓶枣。【结果】优化壶瓶枣茎段诱导得到高分化率的丛生芽遗传转化体系,再生增植率为11.0,为壶瓶枣成功实现遗传转化奠定了基础。将壶瓶枣0.8-1.0 cm含茎尖和茎段的外植体材料置于农杆菌浓度OD600=0.6时侵染菌液中浸泡15.0 min,然后置于培养基上避光共培养3天;随后转入含Cb 300 mg·L^-1,AS 60 mg·L^-1的丛生芽诱导分化培养基中培养5-6周。将分化丛生芽转接至含4.0 mg·L^-1Basta的培养基中,获遗传转化植株173株;经Basta筛选,GUS显色、gDNA PCR、RT-PCR等检测证实,成功获得3个阳性转基因株系,荧光实时定量检测表明株系2表达效率较高。经植物化学成分分析,转化植株中目的基因得以表达,生成了目标产物白藜芦醇,其含量为0.45μg·g^-1（鲜质量）。【结论】本研究成功实现虎杖芪合酶基因遗传转化壶瓶枣,获得壶瓶枣遗传转化新材料。且Pc PKS5在枣树中异源表达,转基因材料中能够代谢合成白藜芦醇,有望提高转Pc PKS5基因壶瓶枣抗枣树病原真菌病能力。白藜芦醇是否在壶瓶枣遗传转化材料果实中积累,及转基因植株果实品质的影响仍需深入研究。

烟草4CL与虎杖STS融合基因的构建、表达及融合蛋白纯化

白藜芦醇具有抗菌、抗癌、抗肿瘤、保护心血管、抗氧化等众多药理作用.4-香豆酰辅酶A连接酶（4-Coumarate-CoA ligase,4CL）和芪合酶（Stilbene synthase,STS）是其生物合成的关键酶和限速酶.本研究利用悬挂PCR （Overlap PCR）技术将白藜芦醇生物合成的最后两个关键酶4CL和STS的基因融合,构建原核表达pET30a-Nt4CL∷PcPKS5重组质粒,原核表达Nt4CL∷PcPKS5融合酶蛋白.预测其共编码945个氨基酸,含15个氨基酸的过渡氨基酸链（Linker）,编码蛋白质分子量（Mr）为102.8 kDa,等电点（pI）为5.69.原核表达筛选结果表明：温度为25℃,IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导起始OD600值在0.4～0.6之间,诱导4h时目标蛋白的表达量最高.细胞破碎后,经Ni2＋亲和柱纯化、PD-10柱脱盐后可纯化得到融合蛋白.本研究为通过分子生物学途径合成白藜芦醇奠定基础.

转虎杖芪合酶基因壶瓶枣的抗真菌试验

通过检测白藜芦醇物质以及虎杖芪合酶基因遗传转化的壶瓶枣,并制备粗提液开展抗真菌试验。结果为遗传转化材料中叶片、茎干和茎尖等100ul提取液(1g转基因植株鲜重粗提定容得到1ml)对桃褐腐真菌(Monilinia fructicola)抑菌率分别为25.0%、28.57%和16.07%,抑菌效果相当于1ug白藜芦醇样品(抑菌率为23.08%)。试验证明了遗传转化虎杖芪合酶基因的壶瓶枣具备抗真菌能力。

烟草Nt4CL与虎杖PcSTS基因的融合表达与功能分析

4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate-Co A ligase,4CL)和芪合酶(stilbene synthase,STS)是白藜芦醇苯丙氨酸代谢合成的最后两个关键酶。运用悬挂PCR(overlap PCR)的方法将烟草4CL基因(Nt4CL)和虎杖STS基因(Pc PKS5)用3个中性氨基酸链连接,得到融合基因Nt4CL-Pc PKS5,将其插入原核表达载体中,构建p ET30a-Nt4CL-Pc PKS5重组质粒,表达Nt4CL-Pc PKS5融合蛋白。经Ni2+纯化和PD-10柱脱盐后,得到可溶性纯化蛋白。体外酶促反应结果表明该融合酶具有4CL和STS的双重活性,其催化产物为白藜芦醇。酶促反应最适条件为:p H 6.5,反应温度为45℃。研究结果获得了有效催化白藜芦醇生物合成的双功能融合酶,为进一步利用融合酶基因转化工程菌株实现白藜芦醇工业化生产奠定了基础。

多列圆柱滚子轴承装配压杆设计

利用杠杆原理,设计了多列圆柱滚子轴承装配压杆,介绍了装配压杆的结构及操作方法,并分析了轴承滚子装配过程中的装配力。通过压杆装配轴承滚子可以减少或消除滚道压痕,降低员工劳动强度,提高工作效率。

重组酿酒酵母合成白藜芦醇的研究

为了获得一种酵母快速合成白藜芦醇的体系,本研究分别从虎杖和烟草中克隆获得白藜芦醇合成途径的关键酶基因:芪合酶基因STS和4-香豆酰辅酶A连接酶基因4CL,引入3个连续重复的GSG作为连接肽,采用Overlap PCR扩增技术构建了融合基因4CL-(GSG)3-STS,进一步获得重组表达载体p ESC-TRP-4CL-(GSG)3-STS后转化至酿酒酵母中,之后利用HPLC分析检测重组酿酒酵母代谢产物,最后对重组菌合成白藜芦醇的诱导时间、底物添加浓度和添加方式进行了优化研究。结果表明:所构建的重组酿酒酵母菌体生长48 h后进行诱导表达,同时添加浓度为6 mg/L底物4-香豆酸,并且每隔2 h添加一次,8 h后白藜芦醇产量即可达7.01 mg/L。利用本体系合成白藜芦醇具有操作简单、生产周期短的特点,为进一步实现微生物大规模生产白藜芦醇提供了基础。

狗头枣遗传转化体系的研究

狗头枣作为我国北方主要栽培枣品种,产业市场前景广阔,实验通过狗头枣叶片诱导愈伤组织获得丛生芽的再生体系,为沟通枣种苗生产和开展遗产改良基因工程奠定基础。

板坯连铸机扇形段驱动辊水冷剖分轴承设计

根据连铸机扇形段驱动辊中间支撑轴承的运行工况:极低速、高温、重载、高污染环境,分析了轴承的结构选型和使用工况,确定选用水冷剖分圆柱滚子轴承。并介绍了该轴承的结构设计、润滑形式及使用情况。冷却水循环设计使得轴承能够在60～90℃运转,多重密封结构阻止了外界杂质的侵蚀。轴承能够实现±3°自动调心,保证了轴承与驱动辊的协调。

两种不同植物来源白藜芦醇生物合成关键酶——芪合酶催化效率比较

白藜芦醇是一种天然植保素,且具有特殊的药理和保健功能,芪合酶(Stilbene synthase,STS)是该化合物生物合成的关键酶和限速酶。白藜芦醇存在于有限几种植物且含量差异很大,虎杖中白藜芦醇含量比葡萄、花生高1 000倍以上,推测不同STS的催化能力有可能是白藜芦醇含量差异的原因之一。为验证上述推测,文中通过overlap PCR技术从葡萄叶片基因组DNA中克隆得到葡萄STS基因,连同前期工作中获得的虎杖STS基因(PcPKS5),进行了原核表达分析。诱导表达产物经过Ni2+亲和柱纯化和PD-10柱脱盐后,均得到分子量约43 kDa的可溶性纯化蛋白。酶促产物分析结果表明,两种酶催化产物均为白藜芦醇。酶动力学分析表明,虎杖STS催化效率(Kcat/Km)是葡萄STS的2.4倍。文中从植物类型Ⅲ聚酮化合物合酶(Polyketide synthase,PKS)超家族催化活性位点和保守位点角度分析了造成上述两种酶活性产生差异可能存在的原因。