青蒿琥酯抗中暑内毒素血症的机制探讨

目的探讨中药青蒿衍生物青蒿琥酯抗中暑内毒素血症的机制,为该药物在重症中暑治疗中的运用打下基础。方法在干球温度(34.5±0.5)℃,相对湿度(60±5)%的条件下建立小鼠中暑模型,将40只小鼠随机分为青蒿琥酯组、生理盐水组、高温对照组和正常对照组。用黄嘌呤氧化酶法检测血中SOD的含量,用TBA法检测MDA的含量,用电镜观察肝脏的病理变化。结果青蒿琥酯组小鼠血中SOD含量和MDA含量分别高于生理盐水组,低于高温对照组(P<0.O5),而与正常对照组相近;青蒿琥酯组的肝组织损伤明显轻于生理盐水及高温对照组。结论青蒿琥酯具有抗脂质过氧化,保护重要脏器功能的作用,是其抗中暑内毒素血症的机制之一。

黄芪多糖对脂多糖诱导人THP21单核细胞MCP-1与IL-6表达的影响

目的通过研究黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人单核细胞株THP21细胞趋化蛋白1(monocy techemoattractant protein1,MCP-1)及白介素6(interleukin-6,IL-6)的表达影响,探讨炎症状态下APS对单核细胞炎症因子表达的调控。方法体外培养人单核细胞THP21,以脂多糖刺激建立炎症细胞模型。以MTT法检测黄芪多糖对细胞的毒性,以荧光定量RT-PCR法检测黄芪多糖对THP21细胞MCP-1与IL-6mRNA水平表达的影响,以ELISA法检测黄芪多糖对THP21细胞MCP-1与IL-6细胞外分泌的影响。结果黄芪多糖在50、100、200μg/mL浓度下对THP21细胞均无明显毒性,100μg/mL的黄芪多糖明显抑制LPS诱导THP21细胞MCP-1与IL-6mRNA表达的增加及培养上清中MCP-1与IL-6的增加。结论黄芪多糖抑制脂多糖诱导的人单核细胞株THP21中MCP-1与IL-6的表达及分泌。

热应激和适应对NIH-3T3细胞蛋白质谱的影响

目的初步分析应激与适应处理对NIH-3T3细胞蛋白质合成的影响,筛选应激适应相关蛋白。方法建立预适应细胞模型,双向电泳分离总蛋白,PDQUEST软件、肽质量指纹图谱分析候选蛋白肽段组成,观察应激与适应对细胞蛋白质合成的影响,并初步鉴定应激适应蛋白质点的类别。结果预适应后再次热应激组表达增加的蛋白质点在各相对分子质量范围均有分布,而直接热应激组中表达增加的蛋白质点大多局限于低相对分子质量范围。结论细胞在紧急应激状态,可能会倾向于选择性地合成能够迅速翻译的小分子蛋白质,应对应激损伤。预适应可通过提高细胞内保护性蛋白的贮备量,在再次应激时发挥保护作用。

蒿芩清胆汤和玉屏风散对流感病毒感染湿热证小鼠T淋巴细胞亚群和血清Th1/Th2细胞因子变化的影响

目的:应用蒿芩清胆汤和玉屏风散对流感病毒感染湿热证模型进行治疗,比较用药前后小鼠T淋巴细胞亚群和Th1/Th2细胞平衡的变化,初步探讨两种中药方法各自对改善小鼠免疫功能的特点,为两者更深一层差异的研究打下理论基础。方法:将75只小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药物组、蒿芩清胆汤组和玉屏风组。造模成功后分别用流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+)的浓度,用双抗体夹心ELISA法和酶标仪测定IL-4/IFN-rOD值,并通过换算得出其浓度。结果:与模型组相比,两组中药方剂均能升高CD3+CD4+/CD3+CD8+(P=0.001,0.04),且玉屏风散比蒿芩清胆汤效果略明显;而在Th1/Th2细胞平衡中,两种中药方剂均能降低IL-4/IFN-r浓度(P=0.006;P=0.03),蒿芩清胆汤较玉屏风散作用显著。结论:两种中药方法均能改善模型小鼠T淋巴细胞亚群比值和Th1/Th2细胞平衡,但效果有所不同,初步认为两者可能在对T淋巴细胞亚群比值和Th1/Th2细胞平衡的信号转导上存在着一定的差异,且有待于进一步的研究。

3种中医治法对甲型流感病毒性肺炎湿热证模型小鼠肺AQP4表达及炎症因子的影响

目的:观察代表3种中医温病治法的蒿芩清胆汤、银翘散和玉屏风散对甲型流感病毒性肺炎湿热证模型小鼠的疗效和作用机理。方法:将小鼠随机分为正常对照组、复合模型组、蒿芩清胆汤组、银翘散组、玉屏风散组及阳性药物组。实验结束后剖杀小鼠,称肺重,计算肺指数及肺指数抑制率;免疫组化法检测肺组织APQ4的阳性表达;用ELISA方法测定血清中IL-4及IFN-γ的浓度,并计算Th1/Th2类细胞比值。结果:与复合模型组相比,3组方剂均能降低小鼠肺指数,各用药组均有降低模型小鼠肺组织AQP4阳性信号表达的趋势,其中银翘散组、玉屏风散组与复合模型组相比差异均有显著性;与复合模型组相比,3组方剂均能降低模型小鼠血清中IFN-γ的浓度,Th1/Th2(IFN-γ/IL-4)比值亦有降低的趋势。结论:3组方剂对流感病毒性肺炎湿热证模型小鼠的肺指数均有一定的抑制作用,但3种复方对模型小鼠肺组织中AQP4表达的影响并不一致,推测其发挥功效的途径不尽相同。

蒿芩清胆汤对流感病毒性湿热证NF-кB表达的影响

目的:应用蒿芩清胆汤对流感病毒性肺炎湿热症模型进行治疗,并探索其中可能存在信号通路,为评价其作用打下实验基础。方法:将小鼠随机分为正常组、病毒组(单纯病毒感染)、模型组(高脂饮食+湿热环境+病毒感染)、阳性药物组(模型组+病毒唑)、蒿芩清胆汤组(模型组+蒿芩清胆汤)。造模成功后取小鼠肺组织,用免疫组织化学法检测肺组织切片NF-κB阳性光密度值;提取小鼠腹腔巨噬细胞用RT-PCR的方法检测其NF-κBmRNA的表达,测定各组小鼠肺指数并计算肺指数抑制率,再进行比较。结果与模型组相比,蒿芩清胆汤组的小鼠肺病变程度明显好转,肺组织NF-κB的阳性表达及腹腔巨噬细胞NF-κBmRNA的表达均明显降低,差异具有显著性(P<0.05)。结论:蒿芩清胆汤对流感病毒性肺炎湿热症疗效显著,而它是通过下调NF-κB的表达来干预肺泡内炎症反应,减少肺组织损伤从而达到治疗的目的。

穿心莲内酯对小鼠急性四氯化碳肝损伤的保护作用

目的:研究穿心莲内酯(AP)对小鼠急性四氯化碳(CCl4)肝损伤的保护作用及其机制。方法:40只小鼠随机分成5组,正常对照组、肝损伤模型组、AP低剂量组(50 mg/kg)、高剂量组(100 mg/kg)和阳性药物组。分别测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;肝匀浆中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量及肝组织病理学变化;逆转录PCR(RT-PCR)检测小鼠肝脏中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA水平。结果:AP高剂量组(100 mg/kg)降低小鼠血清中ALT、AST水平,提高肝组织中GSH活性,降低MDA水平,差异均有统计学意义(P<0.05);病理镜检显示AP高剂量组明显减轻肝损伤;RT-PCR结果显示,AP高剂量组TNF-α表达水平降低,而HO-1表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:AP通过抑制脂质过氧化反应,降低组织中氧自由基的生成保护急性四氯化碳肝损伤,其机制可能与抑制TNF-α的表达,诱导HO-1表达有关。

热应激兔血浆心钠素和血管紧张素Ⅱ含量的动态观察

采用放射免疫分析方法，测定了８只热应激兔血浆心钠素（ＡＮＰ）和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度，实验环境干球温度４２℃，湿球温度３５℃。结果显示，当兔肛温（Ｔｒ）由３９９℃升至４３℃时，血浆ＡＮＰ和ＡｎｇⅡ分别由２２７７ｐｇ／ｍｌ增至２６６８ｐｇ／ｍｌ（Ｐ＜００５）和由２６０７４ｐｇ／ｍｌ增至３８３７９ｐｇ／ｍｌ（Ｐ＜００５）；与此同时，呼吸频率（ＲＲ）、心率（ＨＲ）、平均动脉压（ＭＡＰ）也增加，其中，ＭＡＰ仅增加０８ｋＰａ。当动物继续受热到１６６ｍｉｎ时，ＡＮＰ和ＡｎｇⅡ则分别增高到３３９９ｐｇ／ｍｌ和７９２３０ｐｇ／ｍｌ，但动物的ＲＲ、ＨＲ降低。ＭＡＰ由受热前的１１１ｋＰａ降至４５ｋＰａ（Ｐ＜００５），这个结果可能与热应激损伤了心血管系统，导致心肌等组织中的ＡＮＰ和ＡｎｇⅡ释放入血有关。

热毒平抗中暑内毒素血症机制研究

目的探讨中药复方制剂热毒平抗中暑内毒素血症的机制,为该类药物在重症中暑治疗中的使用打下基础。方法在干球温度(34.5±0.5)℃,相对湿度(60±5)%的条件下建立小鼠中暑模型,将40只小鼠随机分为热毒平组、西黄芪胶组、生理盐水组、高温对照组和正常对照组。用试剂盒检测血中肿瘤坏死(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)活性,中性红法观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法观察其能量代谢水平。结果热毒平组小鼠血中TNF-α的值低于西黄芪胶组、高温对照组、生理盐水组(P<0.001),与正常对照组相近;SOD和MDA含量分别高于和低于西黄芪胶组、高温对照组、生理盐水组(P<0.001),与正常对照组相近;腹腔巨噬细胞的吞噬能力高于西黄芪胶组、高温对照组、生理盐水组(P<0.001),与正常对照组相近;能量代谢水平高于其他4组(P<0.001)。结论抗脂质过氧化、增强巨噬细胞吞噬能力,是热毒平抗中暑内毒素血症的主要机制之一。

青蒿琥酯对中暑内毒素血症小鼠腹腔巨噬细胞内游离钙浓度的影响

目的 建立高温诱导的内源性内毒素血症的动物模型,研究青蒿琥酯对中暑内毒素血症小鼠腹腔巨噬细胞内游离钙离子([Ca2 + ]i)浓度的影响。方法 昆明小鼠被随机分为常温组、高温组、青蒿琥酯+高温组[连续5d按60mg/(kg·d)腹腔注射给药]。高温组和青蒿琥酯+高温组的小鼠均在干球温度(Tdb) (3 5±0 .5 )℃、相对湿度(RH) (65±5 ) %条件下热暴露2h ,诱导其产生内毒素血症;常温组在干球温度(2 5±0 . 5 )℃、相对湿度(4 3±5 ) %条件下暴露2h。之后立即分离各组腹腔巨噬细胞,采用Fluo 3 /AM负载及流式细胞仪检测细胞内游离[Ca2 + ]i浓度。结果 常温组、高温组和青蒿琥酯+高温组的巨噬细胞内游离[Ca2 + ]i浓度分别为3 . 3 0±0 . 3 4、14 . 2 6±0 . 89和5 . 19±0 . 2 1;高温组较常温组巨噬细胞游离[Ca2 + ]i浓度显著增加(P <0 . 0 1) ,青蒿琥酯+高温组虽高于常温组(P <0 . 0 5 ) ,但明显低于高温组(P <0 . 0 1)。结论 高温诱导小鼠产生内毒素血症时,腹腔巨噬细胞内游离[Ca2 + ]i浓度升高明显,青蒿琥酯则能显著降低细胞内的游离[Ca2 + ]i水平,这可能是其抗内毒素血症、降低机体对内毒素反应、保护细胞的机制之一。

微电脑辅助的大鼠全套血压波形参数获得系统的建立

目的 建立一个可精确、高效地获得大鼠全套血压波形参数的系统。方法 利用Powlab生理记录仪及其Chart软件,首先获得大鼠血压波的基本参数（包括单个波的基本参数和1 min的基本平均参数）,然后代入推导出的数学公式或是采用近似计算的方法来得到其他的血压波参数。结果 采用本系统,精确高效地获得了大鼠所有的血压参数,而且对于某些参数采用近似计算得出的结果与真实值之间元明显差异。结论 本文建立了一个可获得大鼠全套血压波形参数的系统,对比以往血压波的处理分析系统,该系统具有科学、精确、省时、自动化的优点。这将使得有关动脉血压的分析更加全面,更加具有说服力。

小鼠慢性病毒性肝炎诱发肝脂肪变性模型的构建

目的用小鼠肝炎病毒MHV-A59感染C57BL/6小鼠,建立慢性病毒性肝炎诱发肝脂肪变性的动物模型。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、高脂组、病毒组和高脂病毒组。实验第13周末取血清检测MHV抗体、脂质和转氨酶;小鼠肝脏冰冻切片进行油红O染色,石蜡切片进行HE染色,观察各组肝组织改变状况。结果病毒组与高脂病毒组血清MHV抗体强阳性;与对照组相比,3个处理组的AST、ALT明显增高,TC和LDL-C均有不同程度增高;病毒组与高脂病毒组的肝组织表现出慢性病毒性肝炎的病理特征,肝细胞内脂质蓄积增多。结论通过感染MHV-A59病毒,成功建立了慢性病毒性肝炎诱发肝脂肪变性的动物模型,为进一步研究慢性病毒性肝炎诱发肝脂肪变性的机制提供了基础。

藏茵陈对MHV-A59病毒感染湿热证小鼠肝脏损伤的干预作用

目的应用藏茵陈对MHV-A59病毒感染湿热证小鼠模型进行治疗,通过实验初步探讨该药对小鼠病毒性肝炎的干预机制。方法将32只小鼠随机分为正常组、模型组、阳性组和藏茵陈组。分别在造模前后测定小鼠的肛温和体重,并在造模后分别用试剂盒测定小鼠血清肝功能两项、小鼠肝匀浆MDA含量和SOD活性,通过HE染色后光镜观察小鼠肝脏病理变化。结果 与正常组相比,模型组的各项指标均有所改变,差异有显著统计学意义(P<0.01),肝脏病理切片显示损害明显;用药后与模型组比较,藏茵陈组ALT、AST及MDA含量均有所下降,超氧化物歧化酶(SOD)活性有所升高,各指标两组间差异均有统计学意义(P<0.01),而两药物组的肛温有回归正常范围趋势,但无统计学意义,藏茵陈组小鼠体重与模型组相比有所下降,差异有统计学意义(P=0.013);两药物组的肝脏病理切片结果显示均有所改善,以藏茵陈组较明显。结论 初步判断藏茵陈对于MHV-A59病毒感染湿热证的治疗主要通过抗病毒、抗脂质过氧化发挥作用,但用药后小鼠体重有所下降,可能与藏茵陈的苦寒导致脾胃功能损伤有关,可继续探索藏茵陈的最佳用药配伍及用药方式。

青蒿琥酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞保护作用

目的探讨中药青蒿琥酯(artesunate,AR)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞损伤状态下的保护作用及其机制。方法采用体外培养的巨噬细胞系RAW264.7细胞,待细胞生长至融合状态后分别加入LPS和不同浓度的AR(2.5,5,10,20μg/ml),于37℃、5%CO2条件下共同孵育24 h,设立空白对照组。采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测细胞核因子κB(NF-κB)mRNA表达的变化,硝酸还原酶法检测细胞上清液中炎性介质一氧化氮(NO)的含量。结果1μg/ml的LPS刺激后,巨噬细胞信号转导通路上NF-κB的表达及炎症介质NO的含量均较对照组明显增加(P<0.05),加入AR后,随AR浓度的增加逐渐下调LPS升高的(NF-κB)mRNA表达及N0含量,且与LPS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论青蒿琥酯可明显降低内毒素诱导的巨噬细胞NF-κB的表达,减少NO的分泌可能是其抗损伤的保护作用机制之一。

青蒿琥酯对内毒素信号转导通路中CD14的影响

目的探讨中暑内毒素血症时,青蒿琥酯对内毒素信号通路中CD14表达的影响。方法昆明鼠随机分为常温组、高温组、生理盐水组和青蒿琥酯组(连续5d按60 mg/kg腹腔注射青蒿琥酯),用反转录PCR(RT-PCR)技术分别检测常温下和热暴露后各级小鼠腹腔巨噬细胞内CD14 mRNA的变化,酶联免疫法(ELISA)检测血浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果与常温组比较,高温组和生理盐水组CD14mRNA的表达和TNF-α的含量均显著升高(P<0.01),但青蒿琥酯组CD14 mRNA的表达明显降低,TNF-α的含量轻度升高。结论青蒿琥酯能显著降低内毒素信号转导通路上CD14的表达,减少TNF-α的分泌,可能是其抗中暑内毒素血症的机制之一。

高温复合创伤时兔血浆NO及胃动素含量的变化

目的 :探讨急性复合应激条件下兔血浆一氧化氮 (NO)及胃动素 (MTL)含量的变化 ,为了解NO在胃肠道中的作用提供理论依据。方法 :建立高温复合创伤兔模型 ,于不同时点采集血样 ,用硝酸还原酶法测定血浆NO-2 /NO-3 含量 ,用放射免疫法测定MTL含量 ,并观察其动态变化。结果 :高温复合创伤组NO浓度在 1h、2h时分别为 ( 4 2 75± 8 2 4 ) μmol/L、( 5 9 5 4± 9 0 5 ) μmol/L ,有显著差异 (P <0 0 5 ) ,而正常对照组则为 ( 5 6 6 3± 3 79) μmol/L、( 5 5 2 2± 7 15 ) μmol/L ,两组于 1h比较 ,有显著差异 (P <0 0 5 ) ;血浆中MTL含量持续升高。 结论 :急性热暴露复合创伤兔早期血浆NO浓度是先降低尔后升高 ;MTL含量持续升高 。

青蒿琥酯抗中暑内毒素血症的机制研究

目的探讨青蒿衍生物青蒿琥酯抗中暑内毒素血症的作用机制,为该类药物应用于重症中暑的治疗提供依据。方法在干球温度(34.5±0.5)℃,相对湿度(60±5)%的条件下建立小鼠中暑内毒素血症模型,将32只小鼠随机分为青蒿琥酯组、高温对照组、生理盐水组和正常对照组。用ELISA法检测血浆肿瘤坏死因子-a(TNF-a)含量变化,RT-PCR检测腹腔巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA表达情况。结果青蒿琥酯组TNF-a的含量和TLR4mRNA表达低于高温对照组和生理盐水组(P<0.05),与正常对照组相近。结论下调内毒素信号转导通路中TLR4mRNA表达,减少TNF-a的含量,应是青蒿琥酯拮抗中暑内毒素血症的重要机制之一。

MHV-A59温病湿热小鼠模型的构建与相关指标分析

目的探讨MHV-A59病毒和湿热因素在炎症反应、水液代谢及免疫功能方面对MHV-A59小鼠肝炎湿热证模型构建的影响。方法将24只小鼠随机分为4组,根据上述2种因素分别设立健康对照组、病毒组、湿热组和模型组,用FCM法测定小鼠外周血CD4+%、CD8+%水平,血清IFN-γ、IL-4水平用ELISA法检测,小鼠肝脏NF-κB的表达和胃粘膜AQP4的表达用免疫组化法检测,用单因素方差分析进行统计学分析。结果病毒组与模型组小鼠肝脏NF-κB表达和CD4+/CD8+比值明显高于健康组和湿热组(P<0.01,P<0.05);而模型组和湿热组小鼠胃黏膜AQP4表达明显高于健康组(P<0.01);模型组小鼠IFN-γ/IL-4比值则较健康组升高(P<0.05)。结论 MHV-A59病毒是导致小鼠肝脏NF-κB表达增加及外周血CD4+/CD8+比值升高的主要因素,而湿热因素主要导致小鼠胃黏膜AQP4表达增加;病毒因素和湿热因素的协同作用可引起小鼠血清IFN-γ/IL-4比值的升高。利用MHV-A59病毒和湿热因素可以成功构建符合中医温病湿热证的小鼠模型。

新穿心莲内酯治疗中暑作用的研究

目的探讨中药穿心莲的有效成分新穿心莲内酯治疗中暑的疗效,为防治重症中暑提供实验依据。方法在干球温度(34.5±0.5)℃,相对湿度(60±5)%的条件下建立小鼠中暑模型,将小鼠随机分为新穿心莲内酯75、37.5、5、1 mg/kg组以及穿心莲内酯组、DMSO(二甲基亚砜)组、地塞米松组、生理盐水组和高温对照组,观察动物肛温上升速率和存活时间。结果与其他组比较,新穿心莲内酯5 mg/kg组动物肛温上升速率明显降低、存活时间显著延长。结论新穿心莲内酯是治疗中暑的有效药物,且5 mg/kg的给药量效果较好。