卵形鲳鲹TLR13基因的克隆、表达分析和亚细胞定位研究

Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是一种古老的先天性免疫受体,参与病原体相关分子模式识别,对维持免疫稳态和预防感染至关重要。本研究克隆和鉴定了卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)TLR13基因(命名为ToTLR13),其开放阅读框(ORF)为1269 bp,编码422个氨基酸,等电点为8.13。保守结构域分析显示,ToTLR13含有跨膜结构域(TM)、LRR结构域和TIR结构域,符合TLR家族的典型特征。通过建立TLR13保守域三级结构发现,ToTLR13与小鼠(Mus musculus)和大黄鱼(Larimichthys crocea)TLR13功能结构域的蛋白三级结构具有较高重叠性。多序列比对显示,ToTLR13与其他硬骨鱼TLR13具有较高的相似性,与其他纲物种的序列相似性较低。系统进化树结果显示,To TLR13与硬骨鱼TLR13聚在一起,其中与鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)最为接近,与哺乳动物、两栖类和贝类相分离。实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)分析显示,ToTLR13在健康卵形鲳鲹的心、鳃、肾、头肾、肝、脾、脑和肌肉中普遍表达,其中鳃的表达量最高,其次是脾。ToTLR13在其鳃、脾、肝和肾免疫相关组织中的表达情况呈现出不同程度的上调,提示其经无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)免疫刺激后可能激活了炎症反应,启动了先天性免疫反应。亚细胞定位显示,ToTLR13定位于A549细胞质。本研究表明,ToTLR13在抵御病原菌免疫应答过程中可能发挥重要的作用,研究结果可为阐明脊椎动物TLRs的功能进化史提供基础资料。

鱼类细胞培养历史、应用及培养条件研究概述

细胞培养指的是经过酶、机械或化学的方法将组织离散成单个细胞,模拟动物体内环境进行培养并促进其生长发育的方法。基于鱼类模型的潜在应用,开发了包括体外细胞培养在内的多种技术。20世纪生物技术兴起,体外细胞培养逐渐渗透至各学科应用,如免疫学、药理学、毒理学、遗传及组织再生和移植等。体外培养细胞具有模仿宿主细胞遗传同质性的优点,实验过程中可一定程度上减少体内的反应变异性,且成本低、重复性好、道德约束小。鱼类细胞培养技术发展于20世纪60年代,最早应用于病毒分离,细胞可从不同器官组织中获得。虽然鱼类细胞培养技术研究晚于哺乳动物,但从长远来看对于鱼类细胞的深入研究对于理论研究和实际应用都具有深远意义和广阔开发前景。简要讨论了鱼类细胞培养的历史进程、应用现状以及细胞培养技术,为未来鱼类细胞培养技术研究提供参考。