黄芩苷体外抗IBV QX株的作用研究

为研究黄芩苷体外抗禽传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)QX株的效果,试验对IBV进行复壮与扩繁,制备原代鸡胚肾(CEK)细胞,并测定IBV对CEK细胞的TCID50和黄芩苷对CEK细胞的最大无毒浓度(MNTC);在MNTC基础上采用CCK法测定不同浓度黄芩苷对IBV的有效抑制率,观察不同浓度黄芩苷对IBV导致的CEK细胞的细胞病变效应(CPE)的抑制情况,并采用qPCR法测定不同浓度黄芩苷对IBV N基因相对表达量的影响。结果表明:成功复壮并扩繁了IBV,其未被其他病毒污染,对CEK细胞的TCID50为1×10^(-4.75)/0.1 mL;黄芩苷对CEK细胞的MNTC为9.75 mg/L;该浓度黄芩苷对IBV的有效抑制率最高,为64.03%,能有效减轻IBV对CEK细胞的CPE;各浓度黄芩苷均可以极显著降低CEK细胞中IBV N基因相对表达量(P<0.01)。说明黄芩苷对CEK细胞的MNTC为9.75 mg/L,该浓度黄芩苷具有较好的体外抗IBV QX株的作用。

日粮中添加抗菌肽对产蛋后期蛋鸡免疫功能和抗氧化能力的影响

为了研究日粮中添加抗菌肽对产蛋后期蛋鸡免疫功能和抗氧化能力影响,试验将120只海兰褐蛋鸡随机分为4组(对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组),每组6个重复,每个重复5只,对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂添加100,200,400 mg/kg抗菌肽的试验日粮,预试期7 d,正试期56 d,于正试期第14天注射新城疫和禽流感疫苗,于正试期第14(免疫前),28,56天采血测定各组的体液免疫水平(IgA、IgG、IgM、IL-4、IL-10水平及新城疫、禽流感抗体效价)、细胞免疫水平IL-2、TNF-α、IFN-γ水平及T淋巴细胞转化率)和抗氧化能力指标(T-AOC、T-SOD、GSH-Px活性及MDA水平)。结果表明:正试期第28天,各试验组的血清IgA水平均显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅱ、Ⅲ组的血清IgG水平显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅱ组的血清IL-10水平显著高于对照组和试验Ⅰ、Ⅲ组(P<0.05);试验Ⅰ组的血清IL-2水平显著高于对照组和试验Ⅲ组(P<0.05),试验Ⅱ、Ⅲ组的血清IFN-γ水平显著高于对照组(P<0.05);试验Ⅱ、Ⅲ组的T淋巴细胞转化率显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅲ组的T淋巴细胞转化率显著高于试验Ⅰ组(P<0.05);试验Ⅱ、Ⅲ组的血清T-AOC显著高于对照组和试验Ⅰ组(P<0.05),各试验组的血清T-SOD和GSH-Px活性均显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅲ组血清GSH-Px活性显著高于试验Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05)。正试期第56天,试验Ⅱ、Ⅲ组的血清IgA、IgG、IL-10水平均显著高于对照组和试验Ⅰ组(P<0.05),各试验组的血清IgM水平均显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅲ组的血清IgA、IgM、IgG水平显著高于试验Ⅱ组(P<0.05),试验Ⅰ、Ⅱ组的血清IL-4水平显著高于对照组(P<0.05);试验Ⅱ组的血清IL-2水平显著高于对照组(P<0.05),TNF-α含量显著高于对照组和试验Ⅰ、Ⅲ组(P<0.05),各试验组的血清IFN-γ水平均显著高于对照组(P<0.05),各试验组的T淋巴细胞转化率显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅱ组的的T淋巴细胞转化率显著高于试验Ⅰ、Ⅲ组(P<0.05);各试验组的血清T-AOC均显著高于对照组(P<0.05),血清MDA水平均显著低于对照组(P<0.05);试验Ⅱ、Ⅲ组的T-SOD和GSH-Px活性均显著高于对照组(P<0.05)。免疫第14天,各试验组的新城疫抗体效价均高于对照组,其中试验Ⅲ组的新城疫抗体效价显著高于对照组(P<0.05)。免疫第14天和第42天,各试验组的禽流感抗体效价均高于对照组,其中免疫第42天试验Ⅲ组的禽流感抗体效价显著高于对照组(P<0.05)。说明在产蛋后期蛋鸡日粮中添加适当水平的抗菌肽可以提高蛋鸡的免疫功能及抗氧化能力,尤其添加200~400 mg/kg抗菌肽的效果较好。

河北地区鸡传染性支气管炎病毒的遗传变异分析

为确定河北地区鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的流行及遗传演化情况,本研究对来自河北主要养鸡地区鸡场的118份疑似IBV感染鸡的病料样品经SPF鸡胚进行病毒分离,并对传至第3代的尿囊液经PCR扩增IBV S1基因并测序后,以GenBank中的IBV疫苗株、国内外部分流行株共53株作为参考病毒,利用DNAStar 7.1软件分析分离株S1基因的同源性。采用MEGA 7.0软件中的Neighbor-Joining方法构建S1基因的遗传进化树,并分析S1基因编码的氨基酸序列。采用RDP4、SimPlot软件分析分离病毒株的重组事件。结果显示,分离到11株IBV,且其S1基因全长1614 bp~1620 bp,编码约540个氨基酸。S1基因的同源性分析结果显示,11株分离株之间的同源性为92.8%~99.9%;11株分离株与国内外53株参考株之间的同源性为73.0%~96.7%,与国内常用疫苗株M41、H120、W93、Ma5和QX的同源性为74.7%~96.1%。遗传进化分析结果显示,11株分离株与GI-19基因型(QX型)IBV属于同一分支。序列分析结果显示,11株分离株S1基因及其编码氨基酸序列与参考株相比均发生了不同程度的突变,主要突变位点在其与血清型特异性和病毒中和表位相关的高变区(aa38~aa67、aa91~aa141和aa274~aa387)内。基因重组结果显示,分离株HB.SJZ.21和HB.XT.1是两株重组病毒,HB.SJZ.21株可能是由HB.XT.9株和HB.SJZ.8株重组而成,HB.XT.1株可能是由HB.SJZ.8株和智利分离株重组而成。上述结果表明,河北地区IBV流行株为GI-19基因型,与疫苗株相比存在不同程度的变异,且分离株之间存在重组现象。本研究为河北地区鸡传染性支气管炎的流行病学调查及免疫防控提供了参考。

黄芩苷体外干扰IBV在CEK细胞内复制的转录组分析

为了解黄芩苷干扰禽传染性支气管炎病毒(IBV)感染鸡胚肾(CEK)细胞内复制前后细胞基因表达的差异性及表达情况,进一步揭示和分析黄芩苷体外干扰IBV在CEK细胞内复制的作用机制,IBV感染CEK细胞2h后,加入9.75mg/L的黄芩苷药液进行干扰,为黄芩苷(H-IBV)组,同时设立细胞对照(Cell)组和IBV感染(IBV)组各3个复孔,培养36h后收集细胞样品进行有参转录组测序。结果H-IBV组与IBV组相比共有102个显著差异表达基因,其中显著上调基因48个,显著下调基因54个;通过基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库中的功能注释和通路富集发现,差异表达基因主要注释在细胞过程、生物调节、代谢等生物过程和病毒性传染病、信号转导与相互作用等二级通路中,其中CEK细胞内视黄醇代谢通路、磷脂转移到膜、IL-27介导的信号通路、MDA5/RIG-I和Toll样受体信号通路均显著富集,并且Ⅰ型干扰素及干扰素α的产生、抗病毒感染过程也均得到了正向调节,富集到核酸催化、免疫系统与反应和生物间相互反应的差异基因数较多;通过STRING网络互作图发现大部分免疫相关基因能够组成一个有36个节点且以IRF7、TLR3、STAT1为中心的相互作用网络。故黄芩苷作用后与IBV组对比的差异表达基因主要注释和富集在生物过程中,免疫系统与反应也被加强,通过正向调节MDA5/RIG-I受体信号通路中的IRF7和抑制Toll样受体信号通路中的TLR3信号转导为主,正调IL-27介导的通路和调控JAKSTAT等信号通路为辅,激活IRF7、TLR3、STAT等相关基因并且与对应的下游蛋白相互作用,促进IFN-α和调控细胞因子的表达,再加上对病毒的(防御)反应和病毒过程的负调控,从而起到干扰IBV在CEK细胞内复制的作用。