猪圆环病毒2型ORF1基因的克隆与原核表达

为了给猪圆环病毒病的诊断及防制提供科学依据,试验参考GenBank中猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)ORF1基因序列,设计1对特异性引物,进行ORF1基因的PCR扩增,扩增出PCV2贵州株ORF1基因片段。扩增产物与pMD18-T载体连接、鉴定正确后,再亚克隆至pET-30a(+)原核表达载体中,经双酶切鉴定后测序。结果表明,ORF1基因在pET-30a(+)载体中位置正确,pET30a-PCV2-ORF1原核表达质粒构建成功,转化至Rosetta菌,用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE检测,结果显示PCV2-ORF1在pET-30a(+)中获得了高效融合表达,其表达蛋白分子质量约为42ku。重组蛋白主要以包涵体的形式表达,包涵体洗涤溶解后,采用Ni 2+离子金属螯合亲和层析柱纯化蛋白,Western blotting分析结果表明,表达蛋白能和抗His标签的单克隆抗体反应。

动物性食品中镉的污染及其检测技术

镉是一种蓄积性的有毒重金属元素,广泛存在于日常生产生活环境中。镉主要通过环境污染和职业性接触以及食物链在生物组织中富集进而对人类健康造成威胁。因此,镉在各种物质中的含量受到了严格的控制。鉴于目前动物性食品中日趋严重的镉污染问题,本文综述了国内对于动物性食品中镉的限量标准、食品中镉的检测技术及其未来发展趋势,为更有效地控制镉污染及建立食品污染物安全预警系统提供参考依据。