法氏囊活性肽-Ⅱ对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其可能机制

目的:研究法氏囊活性肽(Bursal-derived pentapeptide,BPP)-Ⅱ对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其可能的作用机制。方法:采用不同质量浓度(0.02、0.2、2、20μg/ml)的BPP-Ⅱ分别处理小鼠B细胞淋巴瘤细胞WEHI-231、人鼻咽癌细胞CNE、大鼠肝癌细胞RH-35和正常细胞系人胚肾细胞293、猪肾细胞PK15、中国仓鼠卵巢细胞CHO,48 h后采用MTT法检测细胞增殖情况;以双荧光素酶报告系统和Western blotting方法检测BPP-Ⅱ对荧光素酶标记的p53-Luc质粒转染的Vero细胞中p53转录活性和P53蛋白表达的影响;利用噬菌体随机12肽库筛选BPP-Ⅱ特异性结合肽,人工合成BPP-Ⅱ结合肽,采用MTT法检测BPP-Ⅱ结合肽对BPP-Ⅱ抗WEHI-231细胞增殖能力的影响。结果:2和20μg/ml的BPP-Ⅱ对肿瘤细胞WEHI-231、CNE、RH-35的增殖均有抑制作用(均P<0.05),而对正常细胞系293、PK15、CHO的增殖均不表现出抑制作用。BPP-Ⅱ明显激活p53基因的转录,并上调P53蛋白的表达。应用噬菌体展示技术筛选获得3个BPP-Ⅱ结合肽P3-12、P5-12、P6-12,其中2和20μg/ml的P3-12能显著抑制BPP-Ⅱ的抗WEHI-231细胞增殖能力[(97.5±3.4)%、(98.9±3.5)%vs(86.3±1.9)%,P<0.05];20μg/ml的P5-12和P6-12均能显著抑制BPP-Ⅱ的抗WEHI-231细胞增殖能力[(96.7±3.1)%、(95.4±3.8)%vs(86.3±1.9)%,P<0.05]。结论:BPP-Ⅱ可特异性抑制WEHI-231、CNE、RH-35等肿瘤细胞增殖,其机制可能与激动p53信号通路有关。

鸭坦布苏病毒灭活油乳苗的制备及免疫效力测定

鸭坦布苏病毒(DTMUV)为新出现的病毒,主要引起鸭的产蛋量急剧下降,甚至绝产。为评价其灭活疫苗的免疫效力,本实验从产蛋下降综合征的病鸭中分离鉴定到一株DTMUV,经鸭胚增殖,测定其尿囊液中病毒含量为5×102.25ELD50/mL;采用该尿囊液按照常规方法制备灭活油乳苗。将10日龄雏鸭分成4组,每组20只,分别免疫0.2 mL,0.5 mL,0.8 mL疫苗,以及PBS对照组,并于免疫后28 d攻毒。通过间接ELISA法检测鸭血清中抗体水平,结果显示,在免疫后7 d～21 d内,其中0.5 mL免疫组抗体水平与对照组相比差异极显著(p<0.01);免疫21 d时,E玫瑰花环试验检测鸭血清中T淋巴细胞数量,结果 0.5 mL组玫瑰花环形成率为67.09±1.23%,极显著(p<0.01)于对照组(51.86±1.14%);攻毒保护试验结果显示,0.2 mL组免疫保护率为80%,0.5 mL和0.8 mL组疫苗保护率均为100%,而对照组雏鸭均表现为典型的DTMUV感染症状,其中3只死亡。实验结果表明,本研究制备的鸭坦布苏病灭活疫苗能够有效诱导抗体和细胞免疫反应,为进一步研究鸭坦布苏病疫苗提供了实验数据。

天蚕素类抗菌肽CLP的设计及其活性测定

为设计研发新型天蚕素类抗菌肽（Cecropin-like antibacterial peptide,CLP）,本研究参照抗菌肽Cecropin P1的作用机理和氨基酸组成,通过人工方法设计合成CLP,并分别测定其体外和体内抗菌活性。体外抑菌试验结果显示,新型CLP对金黄色葡萄球菌（ATCC29213）、禽多杀性巴氏杆菌（CVCC474）、鸡白痢沙门氏菌（ATCC10398）、鸡致病性大肠杆菌O1均具有良好的抑菌活性,对这4种细菌的最小抑菌浓度（MIC）分别为6.25μg/mL、1.56μg/mL、3.12μg/mL和6.25μg/mL。酸稳定性试验显示,新型CLP在pH值为6-8时活性最高,热稳定性试验显示新型CLP于100℃加热2 h后仍具有抑菌活性。在对鸡白痢沙门氏菌感染雏鸡的体内疗效试验中,新型CLP显示了良好的治疗效果。本研究为临床上设计有效的天蚕素类抗菌肽提供了参考数据。

法氏囊活性五肽BP5特异性结合肽的筛选及鉴定

为鉴定与具有免疫调节功能和抗肿瘤潜能的法氏囊活性五肽(BP5)特异性结合的多肽,本研究利用噬菌体展示技术,以BP5-BSA为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行4轮亲和筛选,结合ELISA鉴定和竞争抑制试验,筛选出3个能够特异性与BP5结合的噬菌体阳性克隆。测序结果显示,其编码的12肽序列分别为:PINMQTLNCMAA(P2-12)、GCTLNPMSDLLG(P6-12)和MSSTLNGMLNSL(P7-12),其核心基序为TLNXM。通过人工合成P2-12、P6-12、P7-12多肽,并采用MTT法检测其对BP5抗肿瘤细胞增殖能力的影响,结果显示,P2-12和P7-12肽在0.2μg/m L^20μg/m L浓度下,P6-12肽在2μg/m L^20μg/m L浓度下均能够抑制BP5抗小鼠WEHI-231 B淋巴瘤细胞增殖作用,其中P2-12在20μg/m L浓度下抑制作用最为显著(p<0.01)。此外,p53荧光素酶活性检测结果显示,这3种BP5结合肽在实验浓度下均能够下调BP5促p53基因转录的活性。以上结果表明,这3种BP5特异性结合肽具有下调BP5抗肿瘤活性。本研究为进一步研究BP5抗肿瘤细胞增殖作用的机制提供了相关的实验依据。

重组免疫融合肽Tα1-BP5的表达及其免疫佐剂特性研究

胸腺素α1(Tα1)和法氏囊活性五肽(BP5)均具有重要的免疫学功能,但二者在蛋白水平上的联合应用尚未见报道。为探究重组表达融合肽Tα1-BP5(r Tα1-BP5)是否具有免疫佐剂特性,本实验设计合成融合肽Tα1-BP5基因,将其克隆至p ET-32a中进行原核表达,并采用MTT法检测其体外活性。同时以rTα1-BP5联合H9N2型禽流感病毒(AIV)灭活疫苗免疫小鼠,检测免疫后小鼠的HI抗体、IgG抗体亚型和细胞因子(IL-4和IFN-γ)的分泌水平,并通过攻毒试验评价其对小鼠的免疫保护作用。结果显示,rTα1-BP5在大肠杆菌中获得可溶性表达;rTα1-BP5能够增强机体免疫后HI抗体、平衡IgG1和IgG2a抗体、提高Th2型(IFN-γ)和Th1(IL-4)型细胞因子的分泌水平,表明rTα1-BP5能够同时增强机体体液和细胞免疫应答。动物免疫保护试验结果显示rTα1-BP5有助于鼠肺脏中H9N2型AIV的清除。以上结果提示,rTα1-BP5具有良好的免疫佐剂的潜能。本研究为新型疫苗佐剂的研究开发奠定了基础。

“三个一”培训工程是四川跨越式发展的人才保障

西部大开发和四川跨越式发展，关键在人才。如何尽快培养一大批急需、紧缺的各级各类人才，以适应西部大开发和四川跨越式发展的需要，四川省人事主管部门提出了“围绕大开发战略，树立大人才观念，实施大培训工程”的指导思想，并决定在今明两年开展以“培养一种能力即创新能力，培训一类知识即涉外知识和确立一个培训开发项目”为主要内容的“三个一”培训工程。

试论股指期货对会计的影响

从世界资本市场发展历程来看，一个高效的资本市场首先应该是一个结构健全、合理的市场。结构健全的资本市场包括股票市场、债券市场和衍生金融工具市场。中国资本市场投资品种十分有限，大部分资本市场交易工具品种单一、结构残缺．而在发达的资本市场中．资本市场工具保持多样化趋势。股指期货作为重要的国际金融衍生品种．它在国际金融市场中的地位与作用日益重要。开发股指期货，将在完善我国证券期货市场、

高原香薷挥发性成分的分析研究

采用水蒸气蒸馏法和气相色谱—质谱—计算机联用法对高原香薷的挥发性成分进行了分析和鉴定。分离出70个峰,确认了其中的63种化合物,其体积分数占全油的98.38％,其主要化学成分为2-甲基-5-(1-甲基乙基)-环己烯(41.14％),Ω-石竹烯(17.90％),D-柠檬烯(12.86％),7,11-二甲基-1,6,10-十二碳三烯(4.70％),6,6-二甲基-二环[3.1.1]庚烷(1.28％);O-薄荷-8-烯(1.36％)。报道了高原香薷挥发性成分,为进一步开发利用提供了科学依据。

密花香薷挥发油成分的分析研究

采用水蒸气蒸馏法和气相色谱—质谱—计算机联用法对密花香薷的挥发性成分进行了分析和鉴定。分离出93个峰,确认了其中的84种化合物,其含量占全油的88.34%。主要化学成分为大根香叶烯(18.83%);D 柠檬烯(11.17%);2,5,5 三四基 1,3,6 庚三烯(6.30%);6 亚甲基 双环[3,1,0]己烷(5.90%);氧化石竹烯(3.94%);石竹烯(3.36%);4 碳 3,5 二甲基环己 1 烯(2.88%);α 3 环己烯 1 醇(2.06%)。

输尿管镜下钬激光碎石术治疗输尿管结石的围手术期护理配合分析

目的探讨输尿管结石实施输尿管镜下钬激光碎石术治疗的围手术期护理配合方法及效果。方法将2018年1~12月桂东人民医院外科80例输尿管结石实施输尿管镜下钬激光碎石术治疗患者纳入研究,用计算机进行随机分组:常规组(n=40,常规手术护理)、配合组(n=40,围手术期护理配合),分析患者手术效果、术后恢复状况、术后并发症、复发状况。结果配合组手术时间、术后疼痛症状消失时间、术后住院时间、并发症总发生率、术后6个月复发率与常规组比较更低,一次性碎石成功率与常规组比较更高(P<0.05)。结论输尿管结石实施输尿管镜下钬激光碎石术治疗时实施围手术期护理配合可改善手术效果及术后恢复状况,减少并发症及复发率。

手术患者压疮发生的危险因素及护理对策研究进展

手术压疮又被称为"压力性溃疡",主要是由于术中无法移动患者体位,局部组织压力不能及时缓解而导致血液循环障碍、组织缺氧、缺血等,进而出现软组织坏死、溃烂,在老年手术患者中极为常见。手术压疮明显加重了患者心理以及生理不适感,具体表现为焦虑、担忧、惶恐以及严重的应激反应等,极易引发各种术后并发症。手术压疮影响了机体康复,降低了手术效果,延长了住院时间,增加了住院成本以及护理难度,现已引起临床高度重视。本文主要针对手术压疮的危险因素以及护理措施展开综述。

浅谈小学语文阅读能力的培养

阅读教学要"培养学生广泛的阅读兴趣,扩大阅读面,增加阅读量提倡少做题,多读书,好读书,读整本的书。通过有目的、有计划、有方法、循序渐进的训练,去培养和发展,小学生的阅读能力会得到逐步提高。

学生成长导师制——特殊学生发展的有效途径

随着人们对教育的普及化、均衡化、优质化的要求越来越高,促进每一位学生的健康成长,是当前教育改革发展的核心。"学生成长导师制"的运用,能让教师注重特殊学生的学习兴趣,通过探究发现、交流合作的方式,让特殊学生得到更好的发展。

转变观念,走教育产业化之路

当前,“教育产业化”问题正在引起社会各界的普遍关注和广泛讨论。这一问题是在扩大内需、启动经济的特殊宏观经济形势和政策取向下提出的。同时,也是社会主义市场经济条件下教育政策与发展的客观规律所使然。本文就此问题谈几点看法。

“探究馒头在口腔中的化学变化”实验教学点滴

在生物教学中,探究性实验是提高学生生物科学素养的重要途径,是培养学生创新能力的生长点。“探究馒头在口腔中的化学变化”是苏教版《生物学》中唯一一个在初中涉及生物、化学的探究性实验。课本直接给出探究的问题：“取一块馒头放到口中咀嚼,……你能尝出一些淡淡的甜味来。”如果教学中照本宣科,将不利于激发学生的探究兴趣。农村孩子有这样的经验,在麦收时抓一把小麦种子放在嘴里咀嚼,渐觉有甜味,最后得到一团面筋。因此在实验前我先分发给学生一撮小麦种子,让他们咀嚼,使其体验小麦种子的味道。然后设计一些问题来激发学生的探究兴趣：“为什么咀嚼小麦种子会产生甜味？甜味从哪儿来？是小麦的淀粉、蛋白质,还是脂肪发生了变化？这种甜味与我们口腔中的什么有关系？是牙齿、舌还是唾液？”进而明确本实验探究的问题。

试论网络经济对财务会计的影响

网络经济是在计算机和网络技术广泛使用的信息网络化时代各尽所产生的一种崭新的经济现象，表现为经济生活中的生产，交换，分配，消费等经济活动，以及企业，金融机构和政府部门等经济主体的经济行为，都同网络密切相关，各经济主体不仅要从网络上获取大量经济信息，依靠网络进行预测和决策，而且许多交易行为在网络上得以实现。

档案计算机管理系统的开发与应用

为了科学地管理和有效地开发利用档案信息,更好地为企业生产服务,我们在领导的大力支持和信息管理部门积极配合下,结合工作实际,开发了档案计算机管理系统。经过一年多的试运行,系统达到预期目标。一、系统分析为了使档案计算机管理系统具有实用性,充分发挥其功能作用,在系统开发前。

法氏囊活性五肽BP5的抗肿瘤作用

【目的】法氏囊活性五肽Bursopentin(BP5)是一种多功能生物学活性因子,不仅具有免疫调节和抗氧化功能,还具有抗肿瘤活性。目前,BP5发挥抗肿瘤生物功能的作用机制尚不清晰。【方法】本研究利用T7噬菌体展示技术构建鸡DT40细胞T7噬菌体c DNA文库,以BP5-BSA为靶分子对文库进行亲和淘选,通过序列测定和生物信息学分析,获得BP5的结合蛋白。通过分析BP5诱导的鸡DT40细胞mRNA基因表达谱和检测BP5对HCT116细胞中p53 Luciferase活性和p53信号通路中相关蛋白表达的影响来探讨BP5抗肿瘤的作用机制。【结果】构建的鸡DT40细胞T7噬菌体c DNA文库原始滴度为1.2×104pfu/m L,重组率为91.7%,扩增后滴度为1.9×109pfu/m L;通过生物淘选获得3条与BP5结合的鸡源蛋白血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A)、细胞周期蛋白E1(cyclin E1)和运输蛋白颗粒复合体2(trafficking protein particle complex 2)。基因表达谱分析结果显示,BP5参与调节多条与抗肿瘤功能有关的通路,其中包括p53信号通路,且p53信号通路涉及的5个差异表达基因均与细胞周期调控或抗肿瘤相关,其中SIAH1、TP53(p53)、CIP1(p21)基因被上调,CHEK2、CCNE1基因被下调。RT-PCR方法检测10个表达水平有明显变化的差异基因,其结果与基因芯片分析结果相符;BP5对p53 Luciferase活性的影响实验结果显示,BP5在0.2-20μg/m L浓度下能够明显提高HCT116细胞中p53相对Luciferase活性,Western blotting结果证实,BP5能显著促进p53、p21蛋白的表达水平,而CCNE1和CHEK2蛋白的表达水平则明显降低。【结论】本研究结果表明BP5通过p53信号通路途径发挥其抗肿瘤生物学功能,为进一步研究BP5抗肿瘤具体的分子机制提供了参考依据。

Metalnikowin类抗菌肽MLP的设计及其抗菌活性的测定

为设计新型Metalnikowin类抗菌肽并评价其抗菌活性,依据抗菌肽Metalnikowin的作用机理和氨基酸组成,通过人工方法设计合成Metalnikowin类抗菌肽（Metalnikowin-like antibacterial peptide,MLP）并测定其体外和体内抗菌活性。体外抑菌试验结果显示,抗菌肽MLP对鸡致病性大肠杆菌O 1、猪致病性大肠杆菌K 99（A TCC39302）、鸡白痢沙门菌（ATCC10398）、猪霍乱沙门菌（ATCC13312）、禽多杀性巴氏杆菌（CVCC474）和金黄色葡萄球菌（ATCC29213）均具有很好的抑菌活性,其对这6种细菌的最小抑菌浓度分别为1.56、6.25、3.12、6.25、1.56和12.5 g/m L。酸稳定性试验结果显示,抗菌肽MLP在p H值为5~6时活性最高。热稳定性试验结果显示,抗菌肽MLP 100℃加热40 min后仍具有抑菌活性。在对雏鸡感染鸡大肠杆菌和小鼠感染金黄色葡萄球菌的体内疗效试验中,抗菌肽MLP显示了较好的治疗效果。本研究为临床上设计有效的Metalnikowin类抗菌肽提供了参考数据。

鸭坦布苏病毒HN1株囊膜E蛋白抑制肽的筛选及鉴定

鸭坦布苏病毒(DTMUV)是一个新发现的病毒,主要引起鸭产蛋严重下降为特征,为鉴定与DTMUV囊膜E蛋白特异性结合的多肽,本试验利用噬菌体展示技术以DTMUV HN1株E蛋白为靶标,进行随机12肽库3轮筛选,结合ELISA试验和竞争抑制试验,成功筛选了2个能够与DTMUV HN1株E蛋白特异性结合的多肽。测序结果显示,其氨基酸序列分别为:HWSTRQGSTRWN(P3-12)和THRSWQGNSWYM(P8-12)。进一步分析多肽P3-12和P8-12对DTMUV在鸭胚成纤维细胞增殖方面的影响,结果显示,E蛋白抑制肽P3-12和P8-12本身对鸭胚成纤维细胞的增殖无明显影响,不同质量浓度的的抑制肽P3-12和P8-12(0.02、0.2、2、20mg/L)均能显著降低DTMUV在鸭胚成纤维细胞中的病毒滴度和病毒拷贝数,以上结果表明,抑制肽P3-12和P8-12均能抑制DTMUV在鸭胚成纤维细胞的增殖,本试验为进一步探明DTMUV与宿主的相互作用及抗病毒制剂的开发提供了理论依据。