牛血清IgG热化学变性和热变性的研究

使用差示扫描量热仪(DSC)和荧光光谱法研究了在pH7.4时牛血清IgG(bIgG)热变性,热化学变性和等温化学变性过程(变性剂为尿素和盐酸胍),首次报道了bIgG在热化学变性和等温化学变性过程中的相关热力学参数.DSC和荧光光谱实验结果表明,bIgG的热变性和热化学变性过程都是较复杂的不可逆过程,这个过程可被看作一个三态变构过程.DSC实验表明在热化学变性过程中bIgG的变性温度和焓变值会随着环境中的变性剂浓度的升高而降低.使用荧光光谱法对bIgG在尿素或盐酸胍存在下的等温化学变性过程进行了研究,结果显示bIgG的化学变性过程也是一个较复杂的非二态过程.实验数据分析表明,变性剂尿素和盐酸胍与bIgG之间主要是依靠氢键相互作用的,而热变性过程中bIgG的凝集是由于bIgG热变性时结构改变后暴露出的疏水结构互相作用造成的.实验结果还表明单纯的热变性只能导致bIgG的不完全变性,而即使是在高浓度变性剂存在时的bIgG热化学变性,尿素和盐酸胍分别导致的bIgG热化学变性的去折叠态也是不同的.

荧光光谱法研究杨树菇半乳糖凝集素与半乳糖和β-半乳糖苷的相互作用

半乳糖凝集素是一类具有重要生理功能的蛋白质,杨树菇(Agrocybe aegerita)半乳糖凝集素(AAL)是被报道的第四种真菌半乳糖凝集素。本文用荧光光谱法研究了半乳糖、乳糖和X-gal两种含β-半乳糖残基的分子与AAL的相互作用。研究结果表明:半乳糖对AAL的荧光光谱无明显影响;乳糖的结合使AAL折叠为更紧密的结构而使其光谱蓝移;X-gal与AAL的结合强烈猝灭AAL的荧光,且X-gal的紫外吸收光谱与AAL的荧光发射光谱有一定程度的重叠,由此得出了其反应的结合常数(Kb=7.33×103L.mol-1),结合位点数(n=8.3)及作用距离(r=2.79 nm)。用同步荧光光谱法比较了乳糖和X-gal对AAL构象的影响,结果表明,乳糖和X-gal对AAL的结合方式有可能不同。此结果为深入研究AAL的生理功能提供了线索。