酸中毒致大鼠离体冠状动脉收缩的机制

目的:探讨细胞外酸中毒(pH_(ex)6.8)致大鼠离体冠状动脉(RCA)收缩的机制。方法:采用离体微血管张力法,通过观察Na^+-H^+交换体1(NHE-1)选择性抑制剂cariporide(HOE-642)或Na^+-HCO_3^-共同转运体(NBC)抑制剂S0859预孵对pH_(ex)6.8所致RCA收缩的影响,探讨酸碱转运体在酸中毒收缩RCA中的作用;通过观察氯通道抑制剂NPPB和尼氟酸(NFA)预孵及细胞外去除氯离子对pH_(ex)6.8所致RCA收缩的影响,探讨氯离子通道在酸中毒收缩RCA中的作用。结果:pH_(ex)6.8引起RCA静息张力升高,最大张力为(3.90±0.95)mN。30μmol/L HOE-642和100μmol/L S0859均抑制pH_(ex)6.8引起的RCA收缩(P<0.01)。NPPB和NFA均呈浓度依赖性地抑制pH_(ex)6.8引起的RCA收缩和KCl(60 mmol/L)引起的收缩。100μmol/L的NPPB和NFA均抑制U46619(1μmol/L)引起的RCA收缩(P<0.01)。等摩尔NaBr代替细胞外液中NaCl后,几乎完全抑制pH_(ex)6.8引起的RCA收缩(P<0.01),但是对KCl(60 mmol/L)或U46619(1μmol/L)引起的RCA收缩无显著影响。结论:细胞外液酸化所致的RCA收缩与激活NHE-1和NBC及促进氯离子跨细胞膜运动有关。

橙皮素对大鼠离体心脏心功能的影响及其机制研究

目的 观察橙皮素(HSP)对大鼠离体心脏心功能的影响及其可能的机制。方法建立Langendorff离体心脏灌流模型,记录不同浓度HSP对大鼠离体心脏冠状动脉流量(coronary flow,CF)、心率(heart rate,HR)、左心室发展压(left ventricular developed pressure,LVDP)、左心室舒张末压(1eft ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)、等容收缩期左心室内压上升的最大速率(positive dp/dt_(max),+dp/dt_(max))、等容舒张期左心室内压下降的最大速率(negative dp/dt_(max),-dp/dt_(max))的影响。使用钙激活K^+通道(K_(Ca))阻断剂四乙胺(TEA)、ATP敏感K^+通道(KATP)阻断剂格列本脲(Gli)、内向整流K^+通道(KIR)阻断剂氯化钡(BaCl_2)、电压依赖性K^+通道(K_V)阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)等工具药探究HSP对离体大鼠心脏心功能影响的机制。结果与用药前相比,HSP可以增加离体大鼠心脏的CF值(P<0.05),降低其LVDP、+dp/dt_(max)值(P<0.05)。4-AP能抑制HSP对离体心脏CF、LVDP、+dp/dt_(max)的作用(P<0.05),而TEA、Gli、BaCl_2无明显作用(P>0.05)。结论HSP对离体大鼠心脏有负性肌力作用,其机制与心肌细胞的K_V激活有关,与K_(Ca)、K_(ATP)、K_(IR)无关。

氯硝柳胺乙醇胺盐对大鼠冠状动脉的舒张作用及机制研究

目的探讨氯硝柳胺乙醇胺盐(niclosamide ethanolamine,NEN)对离体大鼠冠状动脉(rat coronary artery,RCA)的舒张作用及其机制。方法采用微血管张力法测定RCA血管张力,观察NEN对预收缩血管的舒张作用;通过抑制剂实验探讨NEN舒张RCA与钾通道和MAPK信号通路的关系;通过观察NEN对血管收缩剂所致的在去钙和复钙液中收缩的影响,探讨NEN的作用与细胞内外钙的关系。结果 NEN(0.5~3.0μmol/L)对KCl或U46619所致的RCA收缩均具有浓度依赖性的舒张作用。MAPK抑制剂PD98059和SB239063减弱NEN的舒张作用,而钾通道阻断剂四乙胺、4-氨基吡啶、氯化钡和格列本脲对NEN的舒张作用无显著影响。NEN减弱KCl或U46619所致的细胞外钙内流依赖性RCA收缩,而对细胞内钙释放依赖性RCA收缩无显著影响。结论 NEN对离体RCA有显著的舒张作用,其机制可能与其激活MAPK信号通路、抑制细胞外钙内流有关。

芹菜素对舒张大鼠基底动脉的作用及机制研究

目的研究芹菜素(API)对大鼠离体基底动脉的血管张力的影响及其作用机制。方法雄性大鼠断头处死后,立刻取出脑组织放在0.9%Na Cl溶液中,在显微镜下分离出基底动脉,剪成长约2 mm的血管环备用。舒张实验:将同一根血管的不同段随机分为2组,对照组(溶剂二甲基亚砜,舒张)和实验组(API1~100μmol·L^(-1),舒张)。抑制收缩实验:用自身前后对照,将同一段血管从前到后依次分为对照组和低、中、高3个剂量(API 0,10,30,100μmol·L^(-1))实验组,给药时间均至少10 min。钙去除和抑制剂:蛋白激酶C抑制剂(Go6983)、细胞外信号调节激酶抑制剂(PD98059)、Rho相关酶抑制剂(Y-27632)及p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂(SB239063),用于观察API的血管作用与细胞内外钙和激酶的关系。以微血管张力测定仪测肌张力值,计算半舒张浓度(RC_(50))、最大舒张率、半抑制浓度(IC_(50))和最大抑制率。结果给药后,实验组对氯化钾(KCl)、血栓素类似物A_2(U46619)或加压素(VP)预收缩的血管环的RC_(50)值分别为(24.27±1.14),(4.1±1.16),(1.9±1.33)μmol·L^(-1),与对照组(0)相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。低、中、高3个剂量实验组的IC_(50)值分别为(77.73±1.72),(14.91±1.31),(20.66±1.21),(7.53±1.02)μmol·L^(-1),与对照组(0)相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。API 30μmol·L^(-1)对细胞内钙和细胞外钙介导收缩的抑制率分别为(24.53±5.32)%和(48.58±8.92)%,Go6983使API对KCl、U46619收缩的舒张率分别减少(40.33±2.51)%和(36.51±5.13)%,PD98059使API对KCl、U46619收缩的舒张率分别减少(25.84±3.86)%和(21.80±5.95)%,与无API或抑制剂干预的对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论API对大鼠基底动脉具有明显的舒张作用,其机制可能与降低钙利用、改变细胞外信号调节激酶、蛋白激酶C活性有关。

橙皮素对糖尿病大鼠肾内动脉肌原性反应的改善作用

目的观察橙皮素对糖尿病大鼠肾内动脉(RIA)肌原性反应的改善作用并探讨其作用机制。方法按照体重将大鼠随机分为4组:正常组、模型组和低、高2个剂量实验组。腹腔注射链脲霉素65 mg·kg^(-1)建立大鼠糖尿病模型。造模2周后,低、高2个剂量实验组分别灌胃橙皮素50,100 mg·kg^(-1)·d^(-1),持续4周,正常组和模型组灌胃等量0. 1%羧甲基纤维素钠溶剂。用微血管张力法测定肾内动脉血管张力,用抑制剂实验观察橙皮素舒张肾内动脉与钾通道(Kv)的关系。结果正常组、模型组和低、高2个剂量实验组对苯肾上腺素(PE)的最大收缩率分别为(100. 00±0. 00)%,(147. 14±3. 81)%,(124. 18±3. 23)%和(107. 28±0. 78)%;模型组与正常组相比或者低、高剂量2个实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01)。PE预收缩时,这4组对乙酰胆碱(ACh)的最大舒张率分别为(71. 29±4. 92)%,(51. 50±4. 96)%,(58. 28±1. 85)%和(65. 29±2. 29)%;对硝普钠(SNP)的最大舒张率分别为(83. 28±0. 96)%,(71. 11±1. 42)%,(75. 43±1. 99)%和(78. 98±1. 10)%;模型组与正常组相比或者低、高剂量2个实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01)。结论橙皮素改善RIA肌原性反应,其机制可能与Kv通道有关。

MS23对糖尿病大鼠冠状动脉肌原性反应和电位依赖性钾通道的影响

目的研究新型磷酸二酯酶抑制药MS23对糖尿病大鼠冠状动脉(RCA)肌原性反应及其平滑肌电位依赖性钾通道(Kv)电流的影响。方法腹腔注射链脲霉素60 mg·kg^(-1)建立大鼠糖尿病模型;第四周将建模成功的糖尿病大鼠随机分为模型组、低、高2个剂量实验组,另取正常大鼠为对照组。MS23低、高剂量实验组分别予以灌胃MS23 0.3,1.0 mg·kg^(-1);对照组和模型组予以灌胃等量0.9%NaCl。4组大鼠每天给药1次,共8周。用离体血管张力法记录RCA肌原性反应;用膜片钳测定冠状动脉平滑肌(RCASMC)Kv电流。结果对照组、模型组和低、高剂量实验组RCA对乙酰胆碱的最大舒张率分别为(74.45±6.30)%,(56.84±5.51)%,(77.52±5.27)%和(86.33±8.88)%,对硝普钠的最大舒张率分别为(88.50±5.81)%,(56.65±8.62)%,(80.50±7.85)%和(91.60±5.97)%,RCASMC Kv最大电流密度分别为(53.69±4.02)p A·p F^(-1),(28.25±3.69)p A·p F^(-1),(38.78±4.55)p A·p F^(-1)和(63.35±4.57)p A·p F^(-1),模型组分别与对照组和低、高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。30μmol·L^(-1)MS23对1μmol·L^(-1)U46619所致糖尿病RCA收缩的最大舒张率为(70.69±12.72)%,Kv通道选择性抑制药4-AP(3 mmol·L^(-1)预孵处理后其最大舒张率为(34.47±10.08)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MS23可舒张糖尿病RCA,增加其RCASMC Kv电流。

橙皮素对大鼠肾内动脉肌原性反应的影响及其机制

目的探讨橙皮素(HSP)对离体大鼠肾内动脉(RIA)肌原性反应的影响,并分析其与蛋白激酶C(PKC)、内向整流钾通道(Kir)的相关性。方法将雄性SD大鼠断头处死后,取其肾脏放于生理盐溶液(PSS)中,显微镜下分离并剪取2 mm的RIA血管环用于微血管张力测定实验。血管环抑制收缩实验:将同一根RIA的不同段随机分为KCl收缩组、PE收缩组、VP收缩组、BaCl2收缩组(加入30μmol·L^(-1)HSP预孵30 min后分别加入60 mmol·L^(-1)KCl,10μmol·L^(-1)PE,3μmol·L^(-1)VP,0.3 mmol·L^(-1)BaCl24种收缩剂直至RIA达到收缩坪台);舒张机制实验:将同一根RIA的不同段随机分为KCl预收缩组、PE预收缩组、VP预收缩组、BaCl2预收缩组(预收缩组中加入上述相同浓度的4种收缩剂收缩RIA后,加入PKA、PKC抑制剂各1μmol·L-1预孵15 min,30μmol·L^(-1)HSP舒张RIA)。膜片钳实验:将RIA平滑肌细胞(SMCs)Kir电流密度分为BaCl2联合组、GO6983联合组;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR):将RIA分为对照组和HSP组(预孵30μmol·L^(-1)HSP 8h)。用血管环实验记录RIA血管张力的变化,用膜片钳实验记录RIA SMCs Kir电流密度的变化,用qRT-PCR检测Kir2.1和PKC-α、PKC-β基因表达水平。结果KCl收缩组,PE收缩组,VP收缩组,BaCl2收缩组RIA收缩百分率分别为(24.25±6.11)%,(20.09±12.67)%,(48.14±1.68)%,(15.26±6.66)%;KCl预收缩组,PE预收缩组,VP预收缩组,BaCl2预收缩组的舒张百分率分别为(21.35±5.55)%,(27.84±8.64)%,(23.30±12.01)%,(19.22±2.22)%;BaCl2联合组、GO6983联合组RIA SMCs Kir电流分别为(-4.29±0.26),(-10.65±1.10)pA/pF;Kir 2.1通道、PKC-α、PKC-β的mRNA相对表达量分别为1.91±0.23,0.52±0.29,0.69±0.14。组间比较,差异均有统计学差异(均P<0.05)。结论HSP有抑制RIA收缩的作用,且HSP该作用与舒张预收缩RIA的作用均可能与Kir通道的开放和PKC介导的通路有关。