血管内皮生长因子反义寡核苷酸在人甲状腺髓样癌裸鼠模型中的抑瘤作用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(antisenseoligode-oxyribonucleotide,ASODN)在人甲状腺髓样癌(MTC)裸鼠模型中的抑瘤作用。方法构建12只MTC裸鼠模型,随机分为三组。治疗结束后1周,杀死全部瘤鼠,切取瘤体,测算瘤质量和IR以评价肿瘤生长情况,瘤组织石腊切片分别行HE、免疫组化(IHC)和DNA末端原位标记法(TUNEL法)染色以评价组织病理构造、VEGF与Survivin蛋白表达和细胞凋亡的变化。结果HE染色显示ASODN组具有明显减低的血管新生特点。此外,相对于正常组和SODN组,ASODN组具有显著的VEGF[(0.12±0.02)、(0.15±0.02)、(0.08±0.02)]和Sur-vivin[(0.17±0.03),(0.18±0.02),(0.09±0.02)]低表达、低瘤质量[(0.53±0.02)g,(0.54±0.03)g,(0.45±0.02)g]、高抑瘤率[(0±3.44)%,(-2.36±4.72)%、(15.57±3.22)%]和高凋亡[(4.91±0.67)%,(4.46±1.01)%,(24.68±1.22)%]特点(各P<0.01),而正常组与SODN组间未见上述各特点的统计学差异(各P>0.05)。结论针对人MTCVEGF基因沉默治疗能够达到明显抑瘤效果,此效果至少部分通过抑制肿瘤血管新生和促进肿瘤调亡而实现。这提示VEGF基因在人MTC中具有重要意义,可能成为人MTC基因靶向沉默治疗的重要候选基因之一。

存活素反义寡核苷酸在人甲状腺髓样癌裸鼠模型中的抑瘤作用

目的探讨存活素(survivin)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxyribonucleotide,ASODN)在人甲状腺髓样癌裸鼠模型中的抑瘤作用。方法构建12只人甲状腺髓样癌裸鼠模型,随机分配到正常组,SODN(sense oligodeoxyribonucleotide,正义寡核苷酸)组和ASODN组,每组4只。各组每日一次瘤内注射相应处理液,连续7d。治疗结束后1周,杀死全部瘤鼠,切取瘤体,测算瘤重和抑瘤率以评价肿瘤生长情况,瘤组织石腊切片分别行HE、免疫组化(IHC)和DNA末端原位标记法(TUNEL法)染色以评价组织病理构造、survivin与VEGF蛋白表达和细胞凋亡的变化。结果HE染色显示ASODN组具有明显减低的血管新生特点。此外,相对于正常组和SODN组,ASODN组具有显著的survivin和VEGF低表达、高凋亡、低瘤重和高抑瘤率特点(各P<0.01),而正常组与SODN组间未见上述各特点的统计学差异。结论本研究证实针对人甲状腺髓样癌survivin基因沉默治疗能够达到明显抑瘤效果,此效果至少部分通过促进肿瘤调亡和抑制肿瘤血管新生而实现。这提示survivin基因在人甲状腺髓样癌中具有重要意义和其可成为人甲状腺髓样癌基因靶向沉默治疗的重要候选基因之一。

2型糖尿病患者运动及感觉神经传导速度变化与C肽的关系

目的:探讨2型糖尿病患者运动神经传导速度(motornerveconductionvelocity,MNCV)和感觉神经传导速度(sensorynerveconductionvelocity,SNCV)的变化与C肽水平的关系,为防治糖尿病周围神经病变提供理论依据。方法:回顾性分析73例2型糖尿病患者的MNCV和SNCV与C肽释放试验中糖负荷前及糖负荷120minC肽水平的关联性。结果:2型糖尿病患者的MNCV及SNCV正常者和异常者的下降与糖负荷120minC肽水平下降有关(t=23.15～35.46,P<0.01),与糖负荷前C肽水平下降无关(t=0.47～1.63,P>0.05)。结论:C肽水平下降可能会加速神经传导速度的下降,提示保持血中C肽水平,有可能延缓周围神经病变的进展。

胱天蛋白酶3介导BAG3蛋白剪切的研究

目的解析胱天蛋白酶(caspase)3介导BCL2结合抗凋亡基因3(BAG3)酶切的具体作用靶点,明确caspase 3裂解对BAG3抗凋亡作用的影响。方法采用生物信息学方法筛选BAG3蛋白序列中潜在caspase酶切位点;采用定点突变法构建潜在caspase酶切位点突变体;体外翻译野生型和突变型BAG3蛋白;利用重组caspase对野生型或突变型重组BAG3蛋白进行体外剪切实验;构建BAG3裂解片段的真核表达载体,突变型或片段BAG3表达载体转染SW1990细胞;利用Western blot检测各组细胞中BAG3蛋白的裂解情况;利用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果在BAG3蛋白序列中存在K344EVD347和L515EAD518 2个潜在caspase酶切位点;caspase3可有效剪切D518A突变型BAG3,而不能剪切D347A突变型BAG3;D518A突变型和野生型BAG3同等程度抑制MG132诱导的细胞凋亡,D347A突变型BAG3对细胞凋亡的保护作用高于D518A突变型或野生型BAG3,而N末端和C末端剪切片段BAG3对MG132诱导的细胞凋亡无作用。结论 caspase3主要在D347位点裂解BAG3蛋白;BAG3在D347位点的剪切使其丧失了原有的抗凋亡作用。

TRAIL促人甲状腺癌细胞凋亡中一氧化氮作用的探讨

目的:探讨一氧化氮(NO)在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:S-亚硝基化生物素转化法、一氧化氮合酶(NOS)活性及NO产物测定法检测各组细胞3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)S-亚硝基化与NO产物关系;蛋白质印迹法检测各组细胞及细胞核中GAPDH蛋白表达;台盼蓝染色、DNA裂解分析、Caspase-3活性测定法检测各组FRO细胞凋亡。结果:20ng/mLTRAIL处理FRO细胞0～24h,可见NOS活性及作为NO氧化产物的硝酸盐和亚硝酸盐水平呈时间依赖性增加,于4h开始显著增高,P=0.008;12h达高峰。iNOS抑制剂L-NAME抑制TRAIL诱导的GAPDHS-亚硝基化及其随后的细胞核转位,但不影响TRAIL诱导的GAPDH表达。L-NAME显著抑制TRAIL诱导的人甲状腺癌细胞凋亡和Caspase-3活性,P值均<0.001。结论:NO介导的GAPDHS-亚硝基化修饰和随后的细胞核转位可能参与了TRAIL诱导的人甲状腺癌细胞凋亡。

DJ-1在甲状腺癌中的表达及意义

目的探讨癌基因DJ-1在甲状腺癌中的表达效应及其意义。方法采用免疫组织化学方法 (SABC法)检测74例甲状腺癌和10例正常甲状腺组织中DJ-1蛋白的表达,分析DJ-1蛋白在正常甲状腺组织与甲状腺癌之间的表达差异,以及4种甲状腺癌病理类型间的表达差异。结果 DJ-1在正常甲状腺组织中未见表达,而在甲状腺癌中呈显著表达(94.6%);33例乳头状癌中DJ-1全部呈阳性表达(100.0%),19例滤泡癌中有17例呈阳性表达(89.5%),13例髓样癌中有12例呈阳性表达(92.3%),9例未分化癌中有8例呈阳性表达(88.9%)。DJ-1表达水平在甲状腺癌不同病理类型间比较未见统计学差异(P>0.05)。结论癌基因DJ-1特异性表达于甲状腺癌组织中,可能参与甲状腺癌的发生,但与其发展及预后无关。

衣霉素抑制细胞周期蛋白D1表达而强化TRAIL诱发凋亡的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合衣霉素促甲状腺未分化癌细胞株凋亡的作用机制。方法通过单用TRAIL(TRAIL组)、衣霉素(衣霉素组)、联合用药组(TRAIL+衣霉素组)对多种甲状腺未分化癌细胞株进行作用,并以正常甲状腺上皮细胞株HTori-3作对照,利用流式细胞仪分析各组细胞周期变化及各组细胞凋亡状态;采用蛋白印迹杂交法检测衣霉素处理前后各组细胞细胞周期蛋白D1蛋白表达水平;利用微小RNA干扰技术及质粒转染技术探讨细胞周期蛋白D1对依霉素增敏TRAIL效应的影响。结果 TRAIL与衣霉素单用对甲状腺癌细胞均无明显杀伤作用,最高细胞凋亡率分别为10.68%、10.14%;联合用药组细胞凋亡率最大达54.77%,与TRAIL组和衣霉素组相比,具有统计学差异(P<0.05)。与对照组相比,衣霉素组和联合用药组细胞周期蛋白D1水平明显降低。微小RNA干扰可以特异性下调细胞周期蛋白D1进而增加ARO细胞对TRAIL的敏感性;而细胞周期蛋白D1过表达ARO细胞中细胞凋亡率降低22.7%。结论在体外单用TRAIL对甲状腺癌细胞增殖无明显抑制作用,衣霉素明显增加肿瘤细胞对TRAIL敏感性,其增敏机制至少部分与下调细胞周期蛋白D1水平有关。

PRDX1在蛋白酶体抑制剂诱导人甲状腺癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨过氧化还原蛋白(Peroxiredoxin1,PRDX1)在蛋白酶体抑制剂诱导人甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:选取人甲状腺癌细胞,设立对照组和蛋白酶体抑制剂处理组;实时定量PCR法、蛋白印迹法检测PRDX1在各组甲状腺癌细胞中的表达;微小RNA干扰技术、过表达PRDX1质粒转染细胞;应用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:与对照组相比,MG132处理组中PRDX1 mRNA及蛋白表达水平显著增加(P<0.01);蛋白酶体抑制剂组、siPRDX1组PRDX1 mRNA及蛋白显著低于随机序列组及空白组(P<0.05);siPRDX1转染细胞组中细胞凋亡率显著高于随机序列组及空白组(P<0.05);在8305C和8505C细胞中也得到相似的结果;siPRDX1+PRDX1表达载体组对MG132介导的凋亡无显著影响(P>0.05)。结论:siPRDX1增加蛋白酶体抑制剂对未分化甲状腺癌细胞的凋亡作用,而这种作用可以被外源性PRDX1所抑制。

白藜芦醇增加脂肪细胞3T3-L1中脂联素表达的作用机制探讨

目的探讨白藜芦醇增加脂肪细胞3T3-L1中脂联素表达的作用机制。方法设立空白对照组、白藜芦醇组、肿瘤坏死因子(TNF-α)组及白藜芦醇+TNF-α组。用白藜芦醇、TNF-α或者二者联合处理3T3-L1脂肪细胞。用酶联免疫吸附法测定脂联素水平;实时定量PCR测定脂联素和过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR-γ)mRNA水平;用PPAR-γ转录因子试剂盒测定PPAR-γ活性。结果与空白对照组比较,白藜芦醇组中PPAR-γ及脂联素mRNA在3T3-L1脂肪细胞中的表达增加(P<0.05);TNF-α组中脂联素mRNA表达及释放减少(P<0.05)。与TNF-α组比较,白藜芦醇+TNF-α组中脂联素mRNA的表达及分泌增加(P<0.05);白藜芦醇拮抗TNF-α对分化3T3-L1脂肪细胞中PPAR-γmRNA表达及活性抑制(P<0.05)。结论白藜芦醇能够通过调节PPAR-γ的转录活性继而拮抗TNF-α诱导下调3T3-L1脂肪细胞中脂联素的表达及分泌。

活性氧对硼替佐米诱导甲状腺癌细胞凋亡的影响

目的探讨活性氧在蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法选取4种人甲状腺未分化癌细胞系ARO、FRO、KTC2、8305C,分别设空白对照组、还原型谷胱甘肽(GSH)组、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组、硼替佐米组、硼替佐米+GSH组、硼替佐米+NAC组、R-丁胱亚磺酰亚胺(BSO)组、硼替佐米+BSO组、硼替佐米+BSO+GSH组。流式细胞仪检测细胞凋亡情况;测定还原型谷胱甘肽含量。DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇水平。结果与空白对照组相比,4种细胞GSH组及NAC组中GSH水平显著增加(P<0.01),BSO组中GSH水平减低(P<0.05),但细胞凋亡率差异没有统计学意义(P>0.05);FRO、KTC2细胞中硼替佐米组GSH水平减低(P<0.01);ROS水平显著增加(P<0.01);与硼替佐米组相比,GSH+硼替佐米组及NAC+硼替佐米组中GSH显著增加(P<0.01),活性氧簇水平显著降低(P<0.01);细胞凋亡率显著降低(P<0.01);BSO+硼替佐米组中GSH显著减少(P<0.05);细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论活性氧簇的生成可能参与甲状腺癌细胞对蛋白酶体抑制剂硼替佐米细胞毒素的应答;耐药肿瘤细胞诱导GSH水平,进而清除活性氧簇;减少细胞内GSH可增敏甲状腺癌细胞对硼替佐米的应答。

蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡机制的初步研究

目的：探讨蛋白酶体抑制剂在诱导甲状腺未分化癌细胞系的凋亡作用中与核转录因子（NFκ-B）活性的关系。方法：利用蛋白酶体抑制剂PSI、EPOX和MG132作用7种甲状腺未分化癌细胞系,MTT法检测细胞生存率、乳酸脱氢酶（LDH）释放检测各组细胞LDH活性,利用酶联免疫吸附（ELISA）法定量分析NF-κBDNA结合活性,Caspases-3酶分析测定活性。结果：ARO和8305C细胞系对蛋白酶体抑制剂完全不敏感,FRO和KTC2细胞系IC50分别为PSI 4-6 nmol/L、EPOX 1-5 nmol/L和MG132 0.5-1μmol/L;KTC1和KTC3细胞系IC50分别为PSI 10-15 nmol/L、EPOX 10-20 nmol/L和MG132 1-2μmol/L;与对照组相比,所有细胞系应用PSI后,NFκ-B DNA结合活性减少,P〈0.05;应用EPOX时,NFκ-BDNA结合活性在FRO、KTC2、KTC3和8505细胞系中减少（P〈0.05）,但在ARO、KTC1和8305C细胞中保持不变（P〉0.05）。应用MG132处理后,NFκ-B DNA结合活性在所有细胞系中均无明显变化,P〉0.05;各组细胞系基础状态下Caspase-3活性差异无统计学意义,P〉0.05,作用后ARO和8305C细胞系Caspase-3活性最低,FRO和KTC2细胞系Caspase-3活性最高,是基础状态的10-12倍。KTC1和KTC3细胞系Caspase-3活性中等,是基础状态的6-7倍。结论：蛋白酶体抑制剂除通过抑制NFκ-B活性以影响甲状腺癌细胞生存之外,尚可能存在其他抗肿瘤细胞生存途径。

衣霉素联合TRAIL促甲状腺癌细胞凋亡机制的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合衣霉素促甲状腺未分化癌细胞系凋亡的作用机制。方法:通过TRAIL单用或联合衣霉素对多种甲状腺未分化癌细胞系进行作用,并以正常甲状腺上皮细胞系HTori-3作对照,采用蛋白印迹杂交法检测衣霉素处理前后各组细胞TRAIL死亡受体,诱杀受体和凋亡相关分子的蛋白表达水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡状态。结果:与对照组相比,衣霉素作用后,肿瘤细胞死亡受体DR4、DR5和诱杀受体DcR1、DcR2表达无明显变化(P>0.05),而存活素水平明显降低,P<0.05。TRAIL与衣霉素单用对甲状腺癌细胞均无明显杀伤作用,最高凋亡细胞比率分别为10.68%和10.14%;衣霉素与TRAIL联合组凋亡细胞比率最大达60.5%;但在存活素过表达甲状腺未分化癌ARO细胞中,凋亡细胞比率降低50%左右。结论:在体外单用TRAIL对甲状腺癌细胞增殖无明显抑制作用,衣霉素明显增加肿瘤细胞对TRAIL敏感性,其增敏机制至少部分与下调存活素水平有关。

微小RNA干扰Bcl-2相关抗凋亡基因2抑制蛋白酶体抑制剂对甲状腺癌细胞凋亡诱导作用的研究

目的:探讨微小RNA干扰Bcl-2相关抗凋亡基因2(BAG2)对蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡作用的影响。方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO,分别设培养液处理空白对照组、蛋白酶体抑制剂MG132处理组、特异性siBAG2组和随机序列核酸siRNA组;利用微小RNA干扰技术降低BAG2的表达;采用RT-PCR法、蛋白质印迹法分别检测各组细胞BAG2mR-NA及蛋白表达;采用分光光度法测定Caspases-3活性;采用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率。结果:与空白对照组相比,MG132显著增加FRO细胞系中BAG2基因表达水平(P<0.01),并呈时间依赖效应;与空白对照组和随机序列核酸siR-NA组相比,siBAG2处理组中BAG2mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01),其凋亡率及Caspases-3活性显著降低,P<0.01。结论:蛋白酶体抑制剂能够上调甲状腺未分化癌细胞系FRO中BAG2基因的表达水平,siBAG2具有特异性降低BAG2基因表达的作用,同时抑制蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡作用。

过氧化物还原酶1对蛋白酶体抑制剂诱导未分化甲状腺癌FRO细胞凋亡作用的研究

目的:探讨蛋白酶体抑制剂对未分化甲状腺癌FRO细胞中过氧化物还原酶1(Prx1)表达的影响,以及Prx1在蛋白酶体抑制剂诱导FRO细胞凋亡中的作用。方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO,分别设培养液处理空白对照组,蛋白酶体抑制剂MG132、PSI、Lactacystin处理组;利用RNA干扰技术降低Prx1的表达;实时定量RT-PCR法、蛋白质印迹法分别检测各组细胞Prx1 mRNA及蛋白表达;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率。结果:与空白对照组相比,蛋白酶体抑制剂MG132、PSI和Lactacystin均显著增加FRO细胞系中Prx1基因表达水平(P<0.01);与空白对照组和随机序列核酸siRNA组相比,siPrx1处理组中Prx1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01),其凋亡率显著增加(P<0.01)。结论:蛋白酶体抑制剂能够上调甲状腺未分化癌FRO细胞系中Prx1基因的表达水平,siPrx1具有特异性降低Prx1基因表达的作用,同时增加蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌FRO细胞凋亡作用。

2型糖尿病患者血清抵抗素水平与血糖和炎症因子的关系

目的探讨2型糖尿病(DM)患者血清抵抗素水平与血糖及炎症因子的相关性。方法采用酶联免疫分析法检测35例初诊2型DM患者、27例血糖控制良好2型DM患者(HbA1C<7%)、22例呼吸道感染患者及20名糖耐量正常的健康对照者空腹血清抵抗素、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,同时监测空腹血糖、胰岛素、C反应蛋白(CRP)水平及体重指数(BMI)。结果初诊2型DM组血清抵抗素、胰岛素、各炎症因子及血糖水平均高于健康对照组(均P<0.01),而血糖控制良好2型DM组抵抗素和IL-6水平与健康对照组差异无统计学意义;感染组抵抗素、各炎症因子水平显著高于其它各组(P<0.01)。相关分析显示抵抗素水平与性别、BMI和空腹胰岛素等均不相关,但与空腹血糖(r=0.38,P=0.03)及炎症因子IL-6(r=0.31,P=0.02)、TNF-α(r=0.48,P=0.03)、CRP(r=0.70,P=0.01)呈显著正相关,与总胆固醇呈显著负相关(r=-0.19,P=0.04)。结论人类空腹血清抵抗素水平在2型DM患者中明显升高,其与血糖浓度有关,并可能受炎症因子的影响,藉此参与2型DM炎症发病机制,但与肥胖关系不明显。

GRP78在蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:对2种人甲状腺未分化癌细胞系FRO、ARO分别设空白对照组和蛋白酶体抑制剂处理组;及siGRP78、随机序列核酸siRNA和错位型siGRP78组。利用蛋白酶体抑制剂MG132(1μmol/L)、PSI(10nmol/L)和EPOX(5nmol/L)作用2种细胞系,实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞GRP78 mRNA、蛋白表达。流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:蛋白酶体抑制剂处理24h后,2种细胞系中GRP78 mRNA及蛋白水平保持相似增长高峰,为空白对照组2～3倍(P<0.01);siGRP78转染24h,细胞总GRP78 mRNA丢失>80%,转染48h,GRP78蛋白总量丢失>75%。蛋白酶体抑制剂MG132作用后,ARO、FRO细胞凋亡率分别为8.3%和78.3%;当siGRP78靶向沉默GRP78后,蛋白酶体抑制剂诱导2种细胞凋亡率显著增加,ARO细胞凋亡率提高5倍左右(P<0.01)。结论:2种甲状腺癌细胞系存在GRP78基因表达,不同程度干扰蛋白酶体抑制剂凋亡诱导作用;沉默GRP78基因表达可提高蛋白酶体抑制剂对肿瘤细胞杀伤率。

氧化应激对蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡影响的研究

目的:探讨氧化应激在启动蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:选取4种人甲状腺未分化癌细胞系ARO、FRO、KTC2和8305C,分别设空白对照组、万珂处理组和万珂+钛剂联合组;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡情况;Caspase-3活性测试法检测各组细胞Caspase-3活性;用荧光分光光度计法检测各组细胞蛋白酶体活性和细胞内ROS水平。结果:与空白对照组相比,蛋白酶体抑制剂万珂对人甲状腺癌细胞系FRO和KTC2具有很强的细胞凋亡诱导作用;使FRO和KTC2细胞中Caspase-3的活性显著增高,P<0.01;可持续快速抑制蛋白酶体活性,但在4组细胞中差异无统计学意义,P>0.05;万珂可显著提高活性氧簇在FRO和KTC2甲状腺癌细胞中的表达。万珂组与万珂+钛剂组活性氧簇水平在4种甲状腺癌细胞中差异均有统计学意义,P<0.05;在FRO和KTC2甲状腺癌细胞中,万珂组与万珂+钛剂组中的细胞凋亡率差异有统计学意义,P<0.01。结论:蛋白酶体抑制剂可以提高活性氧簇在甲状腺未分化癌细胞中的表达,促进肿瘤细胞的凋亡,并且这种效应可以被抗氧化剂所抑制。

Nrf2对蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡影响的观察

目的:红系衍生的核因子2相关因子2(Nrf2)在蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:选取一系列人甲状腺未分化癌细胞系FRO、KTC1、KTC2、KTC3、8305C和8505C,分别设空白对照组和万珂处理组;蛋白质印迹法检测甲状腺癌细胞中Nrf2蛋白表达情况;共聚焦显微镜检测Nrf2甲状腺癌细胞核定位;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡情况。结果:与FRO和KTC2细胞相比,Nrf2在人甲状腺癌细胞系8505C和8305C细胞中基础水平呈现高表达,万珂诱导后的表达增加更高,但对万珂诱导的细胞凋亡表现出不敏感,4种细胞的细胞凋亡率分别为(51.98±3.01)%、(46.92±2.72)%、(17.33±4.18)%和(7.97±1.01)%;万珂可诱导8505C和8305C细胞中的Nrf2细胞核易位。结论:Nrf2抑制蛋白酶体抑制剂诱导的甲状腺癌细胞凋亡,其抗凋亡作用可能源于蛋白酶体抑制剂诱导其细胞核转位。

Caspase介导的BAG3剪切在MG132诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨Bcl-2相关抗凋亡基因3(BAG3)在蛋白酶体抑制剂MG132诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:根据对蛋白酶体抑制剂敏感程度高低,选取2种人甲状腺未分化癌细胞系FRO和ARO,分别设培养液处理空白对照组、蛋白酶体抑制剂MG132处理组、Pancaspase抑制剂Z-VAD-FMK处理组及MG132+Z-VAD-FMK联合组,按不同时段处理细胞;利用实时定量RT-PCR法检测各组细胞BAG3 mRNA表达及MG132诱导其表达时效性,蛋白质印迹法检测各组细胞BAG3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,在MG132诱导作用下,2种细胞中BAG3 mRNA表达呈相似程度的增加,具有浓度依赖效应(ARO:F=278.93,P=0.000;FRO:F=410.56,P=0.000),并随作用时间呈现时效性(ARO:F=198.67,P=0.000;FRO:F=174.43,P=0.000);在ARO细胞中,BAG3蛋白表达也呈剂量依赖诱导效应,但各浓度组间细胞凋亡率差异无统计学意义,P>0.05;而在FRO细胞中,随MG132浓度增加,发现大量40×103BAG3剪切片断,其细胞凋亡率亦随之增加,呈剂量依赖效应,在MG132+Z-VAD-FMK联合组中BAG3蛋白显著增加,40×103BAG3剪切片断消失。结论:蛋白酶体抑制剂MG132可诱导上调2种甲状腺癌细胞中BAG3基因表达,在蛋白酶体抑制剂敏感细胞中,随着细胞凋亡增加出现BAG3蛋白的剪切,这一效应可能依赖Caspase介导完成。

还原型谷胱甘肽对蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡影响的研究

目的:探讨还原型谷胱甘肽在启动蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:选取4种人甲状腺未分化癌细胞系ARO、FRO、KTC2和8305C,分别设空白对照组、万珂处理组;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡;测定还原型谷胱甘肽(GSH)含量、谷氨酸半胱氨酸合成酶(GCL)和谷胱甘肽合成酶(GS)的活性;实时定量PCR法检测GCL和GS mRNA的水平。结果:与对照组相比,蛋白酶体抑制剂万珂对人甲状腺癌细胞系FRO和KTC2具有很强的细胞凋亡诱导作用;万珂处理24h时,FRO、KTC2细胞中GSH水平下降,差异有统计学意义,P<0.01;ARO和8305C细胞中GSH水平显著增加,差异有统计学意义,P<0.01。万珂处理组FRO和KTC2甲状腺癌细胞中,GCL的活性没有变化而GCL mRNA也仅有轻度增加,P>0.05;但在ARO和8305C细胞中,万珂作用8h后,GCL的活性及mRNA的表达显著增加,差异有统计学意义,P<0.01;而GS活性及mRNA水平在各组细胞中的变化差异均无统计学意义,P>0.05。结论:蛋白酶体抑制剂可诱导耐药的甲状腺癌细胞中GCL转录和活性增高,提高GSH在细胞中的表达,导致蛋白酶体抑制剂诱导的肿瘤细胞凋亡受抑。