KEAP1基因突变调控Nrf2-ABCG2信号介导胃癌耐药的研究

目的:研究KEAP1基因突变通过Nrf2-ABCG2信号通路介导胃癌耐药的分子机制。方法:PCR测序法检测胃癌病人肿瘤组织中KEAP1基因突变,免疫组织化学分析胃癌组织中Nrf2及ABCG2表达情况。根据是否携带KEAP1突变分为突变组和未突变组,比较组间术后生存期及Nrf2和ABCG2表达量。结果 :126例胃癌病人中检测到15例KEAP1基因突变,突变频率为11.9%。KEAP1基因突变组胃癌病人术后中位生存期为14.0个月,低于KEAP1基因无突变组(40.5个月),其差异有统计学意义(χ2=4.360,P<0.001)。KEAP1基因突变的胃癌病人中,Nrf2及ABCG2蛋白表达量高于KEAP1基因未突变的病人,其差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 :KEAP1基因突变通过上调Nrf2及ABCG2的表达,增强胃癌细胞的耐药性。

PIK3R3在胆囊癌组织中的表达及临床意义

目的检测胆囊癌患者癌组织及癌旁组织中磷脂酰肌醇3激酶调节亚基3(PIK3R3)的表达,分析其临床意义。方法回顾性分析上海交通大学医学院附属新华医院2014年1月至2016年12月共50例胆囊癌患者的临床资料;采用门诊及电话的方式对患者进行随访,随访时间截止至2018年12月。利用免疫组织化学染色法检测50例胆囊癌患者癌组织及其癌旁组织中PIK3R3蛋白的表达情况,并用统计学方法分析其与患者临床特征及预后的关系。结果免疫组化分析表明,PIK3R3蛋白表达主要位于胆囊癌细胞的细胞质中,胆囊癌组织中PIK3R3蛋白表达阳性率较癌旁组织中明显升高(74.0%vs 28.0%,χ^2=7.923,P<0.05)。而且PIK3R3蛋白表达阳性率在患者的肿瘤TNM分期和分化程度上差异有统计学意义(χ^2=7.033,6.821,P<0.05),而在性别、年龄、是否患有胆囊结石、淋巴结转移方面,则无明显统计学差异(P>0.05)。PIK3R3蛋白高表达者相较于低表达者预后更差(中位生存时间10个月vs 19个月,P<0.05);经Cox多因素回归分析发现,PIK3R3表达阳性可作为胆囊癌预后危险因素之一(HR 5.766,95%CI 1.843~18.033,P<0.05)。结论PIK3R3在胆囊癌组织中表达升高,且主要表达在细胞质中。PIK3R3表达与胆囊癌发展指标如TNM分期、肿瘤分化程度有关。在患者预后方面,PIK3R3蛋白高表达的患者具有较差的预后。PIK3R3蛋白的表达可以作为胆囊癌患者预后的指标之一。

小干扰核糖核酸沉默磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基3基因对胆囊癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的观察小干扰RNA (siRNA)沉默磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基3(PIK3 R3)基因对胆囊癌细胞NOZ、GBC-SD增殖和迁移能力的影响.方法构建针对PIK3R3的siRNA(si-PIK3R3),应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)技术检测转染后的胆囊癌细胞NOZ、GBC-SD中PIK3R3 mRNA和蛋白表达,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验检测转染0~5d细胞增殖能力的变化,应用Transwell小室实验检测转染48 h后胆囊癌细胞迁移能力的变化.应用SPSS 22.0统计软件分析,多组间数据比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 si-PIK3R3转染组和si-NC阴性对照组成功转染进胆囊癌细胞NOZ、GBC-SD内;NOZ细胞si-PIK3R3组的PIK3R3 mRNA (0.119±0.447)表达量显著低于si-NC组(1.000±0.398)(t=165.100,P<0.05);GBC-SD细胞si-PIK3R3组的PIK3R3 mRNA(0.085 ±0.593)显著低于si-NC组(1.000±0.669)(t=500.200,P<0.05);NOZ、GBC-SD细胞si-PIK3 R3转染组PIK3R3蛋白的表达量明显低于阴性对照组;NOZ、GBD-SD细胞si-PIK3R3组增殖和迁移能力下降,NOZ细胞CCK-8实验结果显示0 ~5 d si-PIK3R3转染组的吸光度值分别为0.185±0.007、0.163±0.013、0.229±0.019、0.240±0.017、0.273±0.012、0.350±0.069(t=11.960,P<0.05);48 h Transwell实验结果显示si-PIK3 R3转染组迁移的细胞数为(69.0±4.5)个,均明显低于si-NC组(t=25.120,P<0.05).GBC-SD细胞CCK-8实验结果显示0~5 d si-PIK3R3转染组的吸光度值分别为0.153±0.003、0.158±0.002、0.201±0.010、0.240±0.012、0.297±0.018、0.483±0.024(t=14.160,P<0.05);48 h Transwell实验结果显示si-PIK3 R3转染组迁移的细胞数为(91.0±3.5)个,均明显低于si-NC组(t=25.390,P<0.05).结论 si-PIK3 R3可抑制人胆囊癌细胞的增殖和迁移能力,提示PIK3 R3在胆囊癌的发生发展过程中发挥重要作用.