高效液相色谱手性固定相法拆分和测定乳酸左氧氟沙星中乳酸对映体

建立了高效液相色谱手性固定相法拆分和测定乳酸左氧氟沙星中乳酸对映体的方法。考察了CuSO4溶液浓度和异丙醇比例对乳酸对映体和左氧氟沙星分离情况的影响。采用Phenomenex 3126(D)-Penicillamine手性色谱柱,优化流动相为2.5 mmol/L CuSO4溶液-异丙醇(体积比为93∶7),乳酸对映体达到基线分离。以L-乳酸锂和水解后的D-乳酸为标准品,解决了直接采用乳酸为标准品导致测定结果有偏差的问题。L-乳酸和D-乳酸在20~400μg/mL范围内线性良好,相关系数R^(2)分别为09999和0.9998。重复性实验得到的相对标准偏差(RSD)为0.7%~0.8%,回收率为98.77%~100.1%(RSD≤1.0%),准确度和精密度良好。该方法简便,适用于乳酸左氧氟沙星中乳酸对映体含量的测定。

复方薄樟桉油溶液的气相色谱指纹图谱研究

目的建立复方薄樟桉油溶液的气相色谱指纹图谱。方法采用HP-FFAP毛细管柱(30 m×0.32 mm×0.25μm),FID检测器,测定不同厂家的复方薄樟桉油溶液的气相色谱图,通过中药色谱指纹图谱相似度评价软件拟合出对照指纹图谱,并进行了方法学验证,再通过对照物质对共有峰进行归属。结果以薄荷脑、(-)-薄荷酮为参照物,建立了复方薄樟桉油溶液含14个共有峰的气相色谱指纹图谱法,且14个共有峰均得到归属。结论复方薄樟桉油溶液的气相色谱指纹图谱法,分析时间短、分离效果好,相似度结果可靠,重复性好,可为复方薄樟桉油溶液质量控制提供参考。

乳制品中常见食源性致病菌检测技术的研究进展

近年来频繁发生的乳与乳制品的质量安全事件引起了人们对乳制品安全的普遍关注,而食源性致病菌污染是乳制品安全问题的重要隐患之一。乳制品中常见的食源性致病菌有沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌、李斯特菌和志贺氏菌等。目前食源性致病菌的检测技术主要有国家标准中的培养法检测技术、分子生物学技术和免疫学技术,分子生物学技术中的PCR检测技术因具有特异性和灵敏度高、简便、快速等优点而得以广泛应用。本文对国家标准中的常规检测技术、分子生物学技术和免疫学技术在乳制品中常见食源性致病菌检测领域的应用进展进行了介绍,并对其影响因素及存在的问题进行了简要阐述。

高效液相色谱法同时测定抗疲劳功能食品中4种功效成分的研究

目的建立高效液相色谱法同时检测抗疲劳类功能食品中红景天苷、淫羊藿苷、人参皂苷Rg1和葛根素4种有效成分的分析方法。方法样品中的待测组分经乙腈水溶液超声提取、过滤后,采用SHIFEIDO C18柱(4.6mm×250mm,5μm)为分离柱,以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱流速为1.0mL/min;检测波长为203 nm;柱温为40℃,标准曲线法定量。结果4种化合物分离度良好,线性相关系数均大于0.9996,回收率为96.4%~103.7%,检出限为5.2~50.0μg/g,定量限为15.5~151.6μg/g。结论本方法简便、准确,可用于抗疲劳类功能食品中功效成分的检测。

乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液中氯化钠含量测定方法的探讨

目的:建立银量法测定左氧氟沙星氯化钠注射液中氯化钠的含量。方法:以荧光黄指示液为指示剂,加入2.5%硼砂溶液调节溶液pH值,用硝酸银滴定液滴定乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液中氯化钠的含量。结果:该方法的线性范围为3.005 25~15.026 25 mg/mL(r=0.999 9),平均回收率为100.3%,RSD为0.40%。结论:该方法简便、准确,适用于乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液的质量控制。

青霉素V钾片微生物限度检查法的方法学研究

目的建立青霉素V钾片的微生物限度检查方法。方法采用《中国药典》2010年版二部微生物限度检查法检测青霉素V钾片,并进行方法验证。结果青霉素V钾片微生物限度细菌检查可采用薄膜过滤法(500mL·膜-1、1mL青霉素酶),霉菌和酵母菌检查可采用平皿法,控制菌采用薄膜过滤法(200mL·膜-1)。结论该法可用于国内23个厂家青霉素V钾片的微生物限度检查。

硝呋太尔制霉素阴道软胶囊微生物限度检查法的方法学研究

目的建立硝呋太尔制霉素阴道软胶囊的微生物限度检查方法。方法采用薄膜过滤法加中和剂对硝呋太尔制霉素阴道软胶囊进行微生物限度检查法的研究。结果硝呋太尔制霉素阴道软胶囊微生物限度细菌、霉菌和酵母菌及控制菌(金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌和白念珠菌)检查可采用薄膜过滤法加中和剂(500m L/膜)。结论 该法可用于硝呋太尔制霉素阴道软胶囊的微生物限度检查。

双重实时荧光定量PCR技术检测中药制剂中沙门氏菌和大肠埃希菌

目的:建立双重实时荧光定量PCR(multiplex quantitative real-time PCR,multiplex qPCR)快速检测中药制剂中沙门氏菌和大肠埃希菌2种常见控制菌的方法。方法:筛选两种目标菌株的特异性引物与探针,扩增沙门氏菌的invA基因和大肠埃希菌的uidA基因,优化反应体系,建立双重荧光定量PCR方法。结果:两对引物探针对沙门氏菌和大肠埃希菌均有较好地扩增效率,人工污染中药制剂中沙门氏菌的检出限为101 CFU·mL^(-1),大肠埃希菌的检出限为101 CFU·mL^(-1)。结论:本研究建立的双重实时荧光定量PCR方法具有特异性强、重复性好,灵敏度高等特点、适用于中药制剂中沙门氏菌和大肠埃希菌的快速检测。

复方黄连油涂剂无菌检查方法适用性研究

目的:建立复方黄连油涂剂的无菌检查方法。方法:根据《中国药典》2015年版四部无菌检查法的规定,采用薄膜过滤法对该品种进行无菌方法适用性试验。本方法采用了42 ℃无菌十四烷酸异丙酯使供试品充分溶解分散,并加入0.1%无菌蛋白胨水溶液200 mL充分萃取,静置后取下层水相作为供试品溶液。结果:该验证试验中各菌株与阳性对照菌生长同步,而阴性对照组无菌生长。结论:采用该方法对复方黄连油涂剂进行无菌检查,方法可行、有效。

炉甘石粉原料药微生物限度检查法适用性研究

目的:建立炉甘石粉微生物限度检查方法,并对方法进行适用性研究。方法:采用薄膜过滤法对需氧菌计数(1∶100供试液),冲洗量为400 mL/筒;霉菌、酵母菌计数法为平皿法;控制菌检查(金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌)为薄膜过滤法,冲洗量均为400 mL/筒。结果:5种试验菌回收试验结果均在0.5~2.0间,符合《中国药典》规定。结论:该方法科学可靠,可用于炉甘石粉原料药的微生物限度检查,可有效控制该品种质量。

HPLC法测定乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液中的依地酸二钠

目的 建立乳酸左氧氟沙星氯化钠注射用中依地酸二钠的测定方法。方法 样液中依地酸二钠经氯化铁衍生化后用HPLC检测。考察了离子对试剂浓度、磷酸盐浓度、水相pH、有机相比例以及衍生化试剂用量等对测定的影响。结果 优化的色谱条件为:C;色谱柱,流动相:50 mmol/L磷酸二氢钠溶液(含5 mmol/L的四丁基溴化铵,用磷酸溶液调节pH值至4.5)-乙腈(90:10,V/V);流速:1.0 mL/min;检测波长:257 nm。该方法分析时间仅需10 min。结论 本方法前处理简单快速,具有较好的准确度、灵敏度和精密度,适用于乳酸左氧氟沙星氯化钠注射用中依地酸二钠的质量控制。

中成药中沙门氏菌实时荧光PCR检测法的建立及优化

沙门氏菌(Salmonella)是常见的一类具有严重危害的致病性革兰氏阴性杆菌。据估计,全球每年由于沙门氏菌感染致病人数达8000万~9400万,其中死亡人数达5.9万~15.5万[1-2]。沙门氏菌在自然界中广泛分布,并可在动植物体定植,而中成药绝大部分都是由动植物加工炮制而成,且大量丸散膏丹的处方中常有原粉入药,因此,监测中成药中的沙门氏菌是评价药品质量的重要指标[3]。

青霉素V钾片中水分和有关物质的相关性研究

目的对青霉素V钾中的水分和有关物质进行相关性研究,以考察青霉素V钾片有关物质存在差异的原因。方法采用《中国药典》2010年版中青霉素V的有关物质的测定方法测定制剂中总杂质含量,采用卡氏水分法测定制剂中水分,采用干燥失重法测定制剂减失重量。结果水分和有关物质的总杂质含量成正相关,平均片重大时水分有增大的趋势。结论有必要对青霉素V钾片的水分进行控制,限度可拟定为含水分不得过2.0%。

一株沙门氏菌Ⅲb 60:r:e,n,x,z15的分离、鉴定及其检测方法比较

为提高沙门氏菌Ⅲb的检测效率,按照标准GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》对3个巧克力样品中沙门氏菌进行分离鉴定,同时采用BAX Q7系统、VITEK2系统和RiboPrinter系统对检测结果进行确证,并对其不同的增菌、分离条件进行比较分析。结果表明:只有样品0716检出沙门氏菌Ⅲb 60:r:e,n,x,z15,且存在奇异变形杆菌、弗氏柠檬酸杆菌和摩根氏菌摩根亚种等干扰菌。亚硒酸盐胱氨酸(selenite cystine,SC)增菌液适合菌群结构简单的样品增菌;四硫磺酸钠煌绿增菌液(tetrathionate broth,TTB)和沙门菌增菌液体培养基(rappaport-vassiliadis,RV)则适合沙门菌含量较高,菌群结构复杂的样品分离沙门菌,且TTB较RV更适合沙门氏菌Ⅲb的增菌。3种全自动检测方法均分别得到与传统方法一致的检测结果;BAX Q7系统操作简便,适合巧克力样品经SC选择性增菌后初筛;VITEK2系统和RiboPrinter系统均能够对该阳性菌鉴定到种水平,且后者能给出血清型。因此,4种方法检测结果能够相互验证,该阳性样品预增菌后通过TTB增菌,木糖赖氨酸脱氧胆盐(xylose lysine desoxycholate,XLD)琼脂或沙门显色培养基分离后,经RiboPrinter系统鉴定能够更高效地筛选得到沙门氏菌Ⅲb 60:r:e,n,x,z15。

伤湿解痛膏微生物限度检查方法的验证

目的建立伤湿解痛膏的微生物限度检查法,并对方法进行验证。方法金黄色葡萄球菌检查和铜绿假单胞菌检查均为薄膜过滤法。结果在3次独立的平行试验中,试验组检出阳性对照菌,阴性对照组未检出,符合验证要求。结论该方法消除了样品的抑菌性,可用于该品种的微生物限度检查。

盐酸特比萘芬乳膏微生物限度检查法的方法学研究

目的建立盐酸特比萘芬乳膏的微生物限度检查方法。方法采用《中国药典》2010年版二部微生物限度检查法对盐酸特比萘芬乳膏进行方法验证。结果盐酸特比萘芬乳膏微生物限度细菌检查可采用薄膜过滤法(300mL.膜-1),霉菌和酵母菌检查宜采用薄膜过滤法(500mL.膜-1),控制菌采用常规法。结论该法可用于盐酸特比萘芬乳膏的微生物限度检查。

关节解痛膏微生物限度检查方法学验证

目的:建立适用于关节解痛膏微生物限度的检测方法。方法:根据《中国药典》2020年版微生物限度检查法的相关规定,采用薄膜过滤法对该品种控制菌铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌进行微生物限度方法适用性试验。结果:铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌检查采用薄膜过滤法,冲洗量300 mL,方法可行。结论:该方法适用于关节解痛膏微生物限度检查,方法可操作性强、准确性高。

手性配位交换色谱法拆分普卢利沙星对映体

以L-异亮氨酸和CuSO_(4)作为手性流动相添加剂,采用手性配位交换色谱法拆分普卢利沙星对映体。考察了添加剂的种类、浓度、比例以及流动相pH等因素对拆分的影响。优化的色谱条件为:C_(18)色谱柱,流动相为8 mmol/L L-异亮氨酸和4 mmol/L CuSO_(4)溶液(pH=3.5)-甲醇(68∶32,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为276 nm。结果表明:在上述条件下,普卢利沙星对映体的分离度(R_(S))大于3.6。该方法可用于普卢利沙星对映体的拆分及普卢利沙星的质量控制。

高效液相色谱法直接测定谷丙甘氨酸胶囊中3种氨基酸的含量

建立HPLC法直接测定谷丙甘氨酸胶囊中3种氨基酸含量的方法。采用Sharpsil氨基柱(250 mm×250 mm,5μm),通过优化流动相中盐相种类、pH、有机相比例等参数,得到最佳流动相:溶液A(20 mmol/L KH_(2)PO_(4)溶液(KH_(2)PO_(4)2.72 g,加水1 L溶解后,加浓氨水5 mL,用H_(3)PO_(4)调节pH值至5.0))∶乙腈=45∶55(V/V),流速为1 mL/min,检测波长为210 nm。样品用溶液A溶解后再加乙腈稀释。3种氨基酸线性关系良好,加样回收率在98.58%~100.32%之间,相对标准偏差(RSD)均小于0.6%。该方法操作简单,具有良好的精密度、重复性和准确度,可用于谷丙甘氨酸胶囊中3种氨基酸含量的测定。

氟罗沙星注射液无菌检查方法研究

目的建立氟罗沙星注射液无菌检查的方法。方法按《中国药典》2010年版二部无菌检查法进行方法验证。采用薄膜过滤法,样品过滤后以0.1%蛋白胨水溶液100ml冲洗,再用0.1%蛋白胨水溶液(含0.1mol/L的硫酸镁)400ml冲洗(每次100ml),每管培养基中加入1mol/L的硫酸镁溶液1ml。结果使用上述方法试验,试验菌均可正常生长。结论该法可用于氟罗沙星注射液的无菌检查。