稳定表达NGF、BDNF和NT3星形胶质细胞系的建立及其鉴定

目的 :探讨星形胶质细胞直接作为转基因靶细胞进行目的基因的表达。方法 :克隆大鼠 NGF、BDNF和 NT3基因 ,构建真核表达载体 ;3种重组载体分别转染星形胶质细胞 ,G4 18筛选后获得阳性克隆细胞进行扩大培养 ;取基因修饰星形胶质细胞培养液上清培养 PC12细胞或 Trk B- PC12细胞 ;用 Western blotting杂交或免疫组织化学方法检测基因靶细胞目的基因的表达及其水平。结果 :经 G4 18筛选后 ,转染 NGF、BDNF和 NT3基因修饰星形胶质细胞呈 G4 18抗性 ;转染 NGF和 NT3基因条件培养液上清培养的 PC12细胞 ,数量增多 ,突起明显变长 ,转染 BDNF基因条件培养液上清培养的 Trk B- PC12细胞 ,同样数量增多 ,突起明显变长。大部分 G4 18抗性的基因靶细胞出现 NGF、BDNF和 NT3免疫染色阳性。Western blotting杂交显示有相应分子量大小的蛋白条带出现。结论 :星形胶质细胞直接作为基因靶细胞能有效地表达和分泌有生物学活性的 NGF、 BDNF和 NT3。

大脑皮质星形胶质细胞体外条件化培养体系的建立

目的 :建立大脑皮质星形胶质细胞体外条件化培养体系。方法 :用快速灵敏的 MTT比色法测定细胞活力 ,对纯化细胞进行形态学观察、免疫组化鉴定。结果 :经分离、纯化 ,获得了纯的单一细胞群 ,星形细胞 MTT测定的 A值为 0 .2 5 5± 0 .0 12。结论 :建立大脑皮质星形胶质细胞体外条件培养体系可以快速、高效得到纯度高的贴壁的星形细胞。