棘球蚴囊液对小鼠脾细胞IL-17及Smad2表达的影响

目的:观察细粒棘球蚴囊液对体外培养BALB/c小鼠脾细胞白介素(IL)-17和Smad2基因表达的影响。方法:制备小鼠脾细胞悬液,接种于48孔培养板中进行培养,以不加任何干预为对照组,囊液处理组为实验组。定时取样提取总RNA,经反转录成cDNA后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测IL-17和Smad2基因的表达。结果:小鼠脾细胞IL-17表达在囊液处理6h和12h后升高(1.000±0.207 VS 3.672±0.746和1.000±0.154 VS 5.525±0.843),差异有统计学意义(P<0.05);小鼠脾细胞Smad2表达在培养1h后升高(1.000±0.077 VS 2.069±0.098)在12h后降低(1.000±0.110 VS 0.247±0.011),差异有统计学意义(P<0.05);协同分析发现IL-17基因与Smad2基因的表达变化呈现负相关(P<0.01),相关系数r=-1。结论:细粒棘球蚴囊液对小鼠脾细胞IL-17和Smad2基因的表达具有上调作用,推测其可能与宿主抗棘球蚴感染的机制有关。

小鼠beta-防御素2真核表达载体的构建及表达

构建小鼠beta-防御素2(murie beta-defensin 2,mBD2)的真核表达载体pcDNA-mBD2,并观察其在真核细胞中的表达。从小鼠肝组织中提取mRNA通过逆转录聚合酶链反应扩增得到mBD2基因,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)获得pcDNA-mBD2;经酶切和测序鉴定构建正确,应用脂质体法转染siha细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内mBD2的表达。结果显示,构建了小鼠mBD2的真核表达载体,转染siha细胞培养并采用G418稳定筛选后,获得稳定转染细胞,收集并裂解转染细胞,蛋白免疫印迹法检测到转染细胞内mBD2的表达。成功构建了真核表达载体pcDNA-mBD2,为研究mBD2在宫颈癌发生发展过程中的作用及作用机制奠定基础。

小鼠beta防御素2原核表达与抗菌作用的初步研究

构建小鼠β-防御素-2(mouse beta defensins 2,mBD2)原核表达质粒pET32/mBD2,进行蛋白诱导表达及纯化,测定并纯化蛋白的抗菌活性。旨在为进一步研究其生物学特性奠定基础。通过腹腔注射脂多糖(lipopoly-saccharide,LPS)建立小鼠急性时相反应,采用RT-PCR方法扩增mBD2成熟肽,经KpnI和XhoI双酶切后插入相同酶切的pET-32a(+)载体,构建的重组质粒。将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),采用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达。通过镍亲和层析获得纯化的融合蛋白。将融合蛋白采用肠激酶酶切、洗脱并用滤纸片法测定目的蛋白的抗菌活性。成功构建了原核表达质粒pET32a(+)/mBD2,并转化工程菌BL21(DE3)。在0.25 mmol/L IPTG、30℃诱导4 h条件下获得的融合蛋白。采用抑菌试验证实蛋白具有一定的抑制革兰阳性菌及阴性菌生长的作用。本研究成功构建了pET32/mBD2原核表达质粒,得到了在大肠杆菌中稳定表达mBD2蛋白。

环介导等温扩增技术(LAMP)检测棘球绦虫感染犬粪DNA的研究Ⅱ

目的为有效地控制预防流行区犬科动物的棘球绦虫感染情况,建立一种快速检测棘球绦虫感染犬的粪便DNA检测方法—环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification.LAMP)。方法针对细粒棘球绦虫线粒体DNA ND2基因6个位点特异性的设计4条LAMP引物,利用LAMP法和普通PCR方法同时检测棘球绦虫、肥胖带绦虫以及犬肠道内的其它寄生虫DNA来验证LAMP方法的特异性;将转入ND2基因片段的质粒作为标准阳性对照,并做梯度稀释后同时用LAMP和PCR方法进行检测比较两者的敏感性。此外,将采集的46份犬粪便标本提取DNA,分别运用LAMP和犬尸体剖检进行感染犬的初步检测评估。结果 E.g mtDNA ND2基因的LAMP引物能够鉴别多房棘球绦虫和细粒棘球绦虫这两个相近的种属,并不与其它待检寄生虫发生交叉反应,且最低检测限度为4×101拷贝(灵敏度比普通PCR高出103倍)。在初步对46份犬粪便DNA检测结果中ND2LAMP引物显示出较好的灵敏度和特异度,χ2检验结果该方法与犬尸体剖检方法的诊断效果无统计学差异。结论本研究初步建立了LAMP技术检测细粒棘球绦虫感染犬的新方法,在各项特异度、灵敏度和样本检测中展现出较好的效果。该方法不需要昂贵的仪器设备和繁琐的电泳分析过程,有望成为流行区和基层兽医站细粒棘球绦虫感染犬检测的新方法。

肝癌行腹腔镜超声引导微波消融后肝功能不全的危险因素分析

目的:探讨原发性肝癌行腹腔镜超声引导微波消融治疗后肝功能不全的影响因素,为术前风险评估提供依据。方法:回顾分析2016年1月至2019年12月接受腹腔镜超声引导微波消融治疗的146例原发性肝癌患者的临床资料,应用Logistic多因素回归分析术后肝功能不全的相关危险因素。结果:治疗后出现肝功能不全36例,发生率24.7%(36/146),未出现肝功能衰竭病例。多因素分析结果显示,术前总胆红素高、低蛋白血症、吲哚菁绿清除试验15 min滞留率≥10%、肿瘤位置危险是原发性肝癌行腹腔镜超声引导微波消融治疗后发生肝功能不全的独立危险因素(P<0.05)。结论:原发性肝癌行腹腔镜超声引导微波消融治疗后肝功能不全的发生受多种因素影响,其中术前总胆红素高、低蛋白血症、吲哚菁绿15 min滞留率≥10%及肿瘤位置危险等是独立危险因素,术前如能结合以上指标进行评估并采取相应措施,利于术后肝功能的恢复、提高疗效。

腹腔镜超声引导微波消融治疗原发性肝癌的疗效分析

目的:探讨腹腔镜超声引导微波消融术治疗原发性肝癌的临床疗效。方法:选取124例原发性肝癌患者,根据手术方式分为观察组(行腹腔镜超声引导微波消融术,n=62)与对照组(行经皮超声引导微波消融术,n=62),对比分析两组术中新发现病灶、术后并发症、肿瘤完全消融率、局部复发率、肿瘤再发率、相关肿瘤标志物、生存率等相关指标。结果:观察组术中新发现肿瘤病灶18处(10例),对照组术中无新发现病灶,差异有统计学意义(P<0.05);观察组术后并发症发生率(9.7%vs.24.2%)、肿瘤完全消融率(97.1%vs.90.2%)优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组局部复发率、肿瘤再发率、相关肿瘤标志物、生存率等差异无统计学意义(P>0.05)。结论:与传统经皮微波消融术相比,腹腔镜超声引导微波消融术治疗原发性肝癌可更好地避免微小病灶的遗漏,具有术后并发症少、肿瘤完全消融率高等优势,值得在临床广泛开展。

肝癌行微波消融治疗后肝功能预测评估系统的建立

目的:建立肝癌行微波消融(MWA)后肝功能预测评估系统。方法:前瞻性选取2018年1月至2020年10月接受MWA治疗的150例肝癌患者作为研究对象,记录患者基线资料及手术相关变量,于术后2周评估患者肝功能,并分为肝功能不全组与代偿组,比较两组患者基线资料及手术相关变量,经logistic回归分析检验肝癌患者行MWA后肝功能不全的风险因素,建立肝功能预测评估系统,采用Hosmer-Lemeshow拟合优度检验,并绘制受试者工作曲线,评价肝癌患者经MWA治疗后肝功能预测评估系统的预测效能。结果:150例肝癌患者行MWA,其中37例肝功能不全(不全组),113例肝功能代偿(代偿组),logistic回归分析结果显示,Child-Pugh分级B级、肝癌巴塞罗那分级C级、病灶最大直径大、肝脏剩余体积及标准化肝脏剩余体积小、吲哚菁绿15 min滞留率高、白蛋白/球蛋白低、天冬氨酸转氨酶/丙氨酸氨基转移酶低、凝血酶原时间长是肝癌患者行MWA后发生肝功能不全的危险因素(OR>1,P<0.05);绘制受试者工作曲线发现,肝功能预测评估系统用于预测MWA治疗后发生肝功能不全风险的曲线下面积>0.80,具有一定的预测价值;在原有研究人群的基础上采用Bootstrap法重采样100次,获得内部验证人群,将建立的风险预测评分系统对内部验证人群患者进行风险评估,结果提示,Hosmer-Lemeshow拟合优度检验P>0.05,拟合无显著差异,拟合满意。结论:肝癌患者行MWA后发生肝功能不全受多个危险因素影响,结合多个危险因素建立肝功能预测评估系统,对预测MWA术后肝功能不全具有一定作用。

腹腔镜B超引导下微波消融术治疗特殊部位肝癌的疗效观察

目的探讨腹腔镜B超引导下微波消融术治疗特殊部位肝癌的临床疗效。方法回顾性分析特殊部位肝癌患者58例,根据采取的术式不同将患者分为观察组(29例,行腹腔镜B超引导下微波消融术)和对照组(29例,行经皮微波消融术)。观察比较两组患者术中有无新发现的肿瘤病灶、肿瘤病灶消融率、肿瘤再发率、手术时间、术中出血量、住院时间、手术不良反应发生情况等。结果观察组有5例患者在术中发现新的肿瘤病灶,而对照组患者未在术中新发现肿瘤病灶,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者肿瘤病灶消融率高于对照组(93.10%vs 75.86%,P<0.05),肿瘤再发率低于对照组(3.45%vs 13.79%,P<0.05)。两组患者手术时间、术中出血量及住院时间比较均无统计学差异(均P>0.05)。观察组患者手术不良反应发生率低于对照组(10.34%vs 24.14%,P<0.05)。结论相较于经皮微波消融术,腹腔镜B超引导下微波消融术治疗特殊部位肝癌,肿瘤病灶消融率高,肿瘤再发率低,且手术并发症发生率低,有进一步研究的临床意义。

优先剥离分支与优先剥离主干对大隐静脉手术的疗效对比

探讨优先剥离大隐静脉曲张分支对大隐静脉曲张手术疗效的影响。方法 选择本院 2014 年 1 月至 2015 年 12 月收 治的 58 例患者共 58 侧大隐静脉曲张,按治疗方法不同分为对照组、观察组两组,对照组 29 例采用优先剥离主干的方式进行 手术,观察组 29 例采用优先剥离分支的方式进行手术。比较两组完整剥除率、手术时间、术中出血量、术后并发症及住院时 间和住院费用。结果 优先剥离分支较优先剥离主干在完整剥除率、手术时间、术中出血量、术后并发症方面有明显优势 (P<0.05)。住院时间和费用方面两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 优先剥离分支能在一定程度上降低手术的繁 杂程度,提高手术效率和疗效。

肝动脉化疗栓塞联合腹腔镜微波消融治疗大肝癌的临床疗效

目的:观察肝动脉化疗栓塞联合腹腔镜微波消融治疗大肝癌的临床疗效。方法:将81例大肝癌患者随机分为2组,对照组40例仅采用肝动脉化疗栓塞术进行治疗,观察组41例采用肝动脉碘油化疗栓塞术联合腹腔镜微波消融进行治疗;分别于治疗前后取空腹静脉血,测定血清中甲胎蛋白(AFP)和血管内皮生长因子(VEGF)的水平,观察疗效和并发症,并完成随访,统计生存率和肝病生存质量量表(LDQOL 1.0)评分。结果:观察组临床疗效明显优于对照组(P<0.05),2组间并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前2组患者血清AFP与VEGF水平差异无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组血清AFP与VEGF水平均低于对照组(P<0.05)。观察组、对照组治疗后3年生存率分别为26.8%和17.5%,2组间差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前2组患者的LDQOL 1.0评分差异无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组LDQOL 1.0评分优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肝动脉化疗栓塞联合腹腔镜微波消融治疗大肝癌可取得更好的抑癌疗效,且对AFP和VEGF的控制效果好。

一个单纯型甲基丙二酸血症家系的MUT基因突变分析

目的对一个单纯型甲基丙二酸血症(MMA)家系进行基因突变的检测和分析,探讨其发病的分子遗传学病因。方法分别用串联质谱技术、气象色谱-质谱技术对先证者血丙酰基肉碱、丙酰肉碱/乙酰肉碱比值,尿液甲基丙二酸、甲基枸缘酸进行检测;全外显子及其旁侧序列测序,Sanger测序法进行基因突变检测。用生物信息学软件Polyphen-2、SIFT预测突变位点危害程度;采用Clustal X软件分析突变位点的物种保守性;运用Swiss-Pdb Viewer软件对突变基因进行蛋白模型和氨基酸相互作用分析。结果先证者利用气相色谱/质谱串联技术检测多项指标异常增高;MUT基因检测到两个杂合突变,分别为c.1280G>A(p.Gly427Asp)和c.1677-1G>A(p.?),家系分析示前者遗传于母亲,后者遗传于父亲。c.1280G>A(p.Gly427Asp)位点Polyph-en-2和SIFT软件预测该突变为有害突变。Clustal X软件分析显示p.Gly427Asp在同源物种间高度保守。突变蛋白模型分析显示p.Gly427Asp通过改变MCM连接区空间构象,致使MCM自身缺陷。c.1677-1G>A(p.?)为固有剪切突变,可破坏固有剪切位点致使外显子完全不识别。结论该家系先证者为遗传性单纯型MMA,位于MUT基因的两个突变位点c.1280G>A(p.Gly427Asp)和c.1677-1G>A(p.?)是导致单纯型甲基丙二酸血症的主要原因。MMA MUT基因型的分子诊断将有助于对不同类型MMA患者提供精准治疗导向,同时有助于进行家系携带者检测和产前诊断分析。

40157例新生儿脐带血染色体核型分析

目的 研究温州地区新生儿脐带血染色体异常的发生率,旨在了解温州地区新生儿染色体异常发病率及脐带血染色体检测的临床意义。方法 收集2017年1月-2021年12月在温州市人民医院分娩的40 157例新生儿肝素钠抗凝脐带血,进行淋巴细胞培养、G显带及染色体核型分析。结果 40 157例新生儿脐带血样本共检出异常染色体核型346例(8.62‰)。染色体数目异常有106例,发生率为2.64‰,其中21-三体综合征22例,发生率为0.55‰;18-三体综合征2例,发生率为0.05‰;含有标记染色体核型16例,发生率为0.40‰,其中含双随体小染色体核型2例,发生率为0.05‰;克氏综合征27例,发生率为0.67‰;超雄综合征19例,发生率为0.47‰;X-三体综合征10例,发生率为0.25‰;特纳综合征10例(含嵌合体),发生率为0.25‰。染色体结构异常240例,发生率为5.98‰,其中染色体倒位63例,发生率为1.57‰;染色体相互易位99例,发生率为2.47‰,其中平衡易位75例,发生率1.87‰,罗伯逊易位24例,发生率为0.60‰;衍生染色体核型27例,发生率0.67‰;染色体重复2例,发生率为0.05‰;染色体插入9例,发生率为0.22‰;染色体缺失6例,发生率为0.15‰;嵌合染色体核型33例,发生率为0.82‰;环状染色体1例,发生率为0.03‰。结论 脐带血染色体核型分析在新生儿染色体疾病诊断方面具有重要的价值,早诊断、早发现、早干预及早治疗能在一定程度上抓住最佳的治疗时机,改善患者的生命质量,是新生儿出生缺陷二级预防的有益补充。

细粒棘球蚴抗原B对体外培养人外周血单个核细胞中Th17细胞的影响

目的观察细粒棘球蚴抗原B（AgB）对体外培养人外周血单个核细胞（PBMC）中CD4＋IL-17＋T细胞（Th17）细胞的影响。方法Ficoll法分离健康人群外周血中的PBMC并接种于24孔培养板，分为阴性对照组、低剂量抗原B（2mg／L）实验组和高剂量抗原B实验组（5mg／L）进行培养。分别在培养96、120和144h后取样，通过流式细胞术（FCM）检测培养液中Th17细胞的阳性表达率。所得结果采用两组配对t检验。结果Th17细胞的阳性表达率存低剂量和高剂量抗原B干预培养96h后分别为0．433±50．115和0．500±0．265，较阴性对照组1．067±0．473均降低，差异有统计学意义（P〈0．05），而在120h和144h虽有降低趋势，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论细粒棘球蚴抗原B对健康人外周血单个核细胞中Th17细胞的表达具有抑制作用，它可能与细粒棘球蚴所致免疫逃避机制有关。

细粒棘球蚴囊液对体外培养小鼠脾细胞Foxp3及Smad4基因表达的影响

目的观察细粒棘球蚴囊液对体外培养BABL/c小鼠脾脏细胞中调节性T细胞(Treg细胞)相对特异分子Foxp3(叉头蛋白3)及TGF-β1(转化生长因子-β1)下游信号通路Smad4表达的影响。方法以BABL/c小鼠作为脾细胞供者,用研磨法分离脾脏细胞,随机分为实验组(与细粒棘球蚴囊液共同培养)和对照组,取1×105个细胞接种于96孔板上,分别在1、3、6和12 h提取RNA,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Foxp3以及Smad4的基因表达。结果 qRT-PCR显示,细粒棘球蚴囊液处理1、3和12 h,实验组Foxp3表达量分别为4.577±0.317、8.517±0.978和7.406±0.822,对照组分别为9.274±0.451、3.297±0.408和2.464±0.328,差异均有统计学意义(P<0.05);细粒棘球蚴囊液处理1 h和12 h,实验组Smad4表达量分别为3.862±1.417和1.690±0.248,对照组分别为1.689±0.221和3.600±1.081,差异有统计学意义(P<0.05),且Foxp3与Smad4二者之间存在负相关(r=-0.991,P<0.05)。结论细粒棘球蚴囊液对小鼠脾脏细胞中Treg相对特异分子Foxp3有上调作用,而对TGF-β1的下游信号通路Smad4有下调的作用,二者之间存在负相关,提示细粒棘球蚴侵染宿主的过程中可能通过负调控TGF-β信号通路而造成宿主Treg细胞的表达升高,可能参与细粒棘球蚴感染过程中的免疫逃避。

PD-L1与记忆性T细胞在肝囊型包虫病患者CD4^+T淋巴细胞中的表达及意义

目的检测程序性死亡受体配体-1(PD-L1)及记忆性T细胞在肝囊型包虫病患者CD4+T淋巴细胞中的表达,探讨其在细粒棘球蚴感染免疫逃避中的作用。方法具有包虫活性的肝包虫病患者42例,健康对照20例,取血,分离PBMC,流式细胞术检测PD-L1(CD274+)、CD45RO+及CD4+CD45RO+CD274+细胞比例,并分析PD-L1与CD45RO的相关性。结果肝囊型包虫病患者PBMC中PD-L1、CD45RO+及CD4+CD45RO+CD274+细胞比例均显著高于健康对照组(P<0.05);肝囊型包虫病患者的PD-L1与CD45RO呈显著正相关(P<0.05),健康对照组二者无显著相关关系(P>0.05)。结论在肝囊型包虫病患者的免疫反应中,PD-L1可能通过记忆性T淋巴细胞发挥促进包虫免疫逃避的作用。

45,X,der(15)t(Y;15)(p11.3;p11.2)一家系

先证者男,32岁,因结婚3年,妻子流产2次来我院就诊。查体:身高175 cm,体重75 kg,外观正常。精液常规检查示:精子计数186个(正常参考值>39个),精子总活力83.3%(正常参考值>40.0%),精子向前活动率70.51%(正常参考值>32.0%),精子DNA碎片指数8.91%(正常参考值≤15%:精子完整性好)。

嵌合型环状X染色体Turner综合征一例

患者女28岁,身高151cm,体重48kg,因婚后3年不孕来我院就诊。查体:颈部稍短,后发际偏低,右手通贯掌,无颈蹼及肘外翻,面部无色素痣,两乳头小而相距较远,乳腺B超示腺体发育不全。患者自诉14岁月经初潮,极不规则,此次闭经5年有余。

X短臂部分缺失Turner综合征家系一例

患者女,33岁,因孕20+4周产检发现胎儿染色体异常来院引产.术后恢复查体示身高148 cm,体重45 kg,第二性征发育正常.患者平素月经规律,否认其他疾病史,性激素检查雌二醇40 pmol/L,卵泡刺激素23.09 IU/L,黄体生成素5.25IU/L,孕酮<0.318 nmol/L,泌乳素17.5μg/L,睾酮<0.45nmol/L,甲功正常;妇科B超检查示子宫呈后位,大小正常,内膜厚度4 mm,双侧卵巢形态大小正常;患者孕产史:1-0-4-1,育有一女,体健,否认家族遗传病史;其丈夫身高168 cm,体重65kg,精液常规检查正常,否认其他疾病史.患者父亲身高170cm,母亲身高165 cm;女儿9岁,身高131.2 cm,偏矮,骨龄检查结果正常.

温州地区生长发育迟缓儿童染色体核型分析

目的了解温州地区生长发育迟缓儿童异常染色体核型分布情况。方法选取2019年1-12月因生长发育迟缓等问题来该院就诊的儿童242例为研究对象,对其进行外周血淋巴细胞培养,染色体核型分析,选择性行相关基因检测。结果共检出染色体异常核型62例,检出率为25.6%,其中染色体结构异常9例,数目异常51例。男性假两性畸形女性化综合征2例。染色体多态性28例,检出率为11.6%。体格发育迟缓儿童中异常核型检出病例以性染色体异常为主。染色体微阵列技术(CMA)检测出1例Williams-Beuren综合征7q11.23存在1.4Mb的缺失,1例核型检测结果为46,XX,der (1) add (1)(p34.1),同时CMA检测发现9q34.11q34.3区段部分三体。结论染色体异常是引起儿童生长发育迟缓的重要原因之一,遗传咨询工作对遗传因素导致的生长发育迟缓发挥着重要的指导作用。

温州地区不良孕产史女性人群的染色体核型分析

目的探讨当地女性不良孕产史与染色体异常及多态性之间关系,对温州地区不孕不育人群进行染色体核型分析.方法对2017年1月-2018年4月于温州市人民医院就诊的1 818例女性进行外周血淋巴细胞培养,染色体制备,G显带核型分析.结果共检出染色体异常核型69例,检出率3.80%.其中包括染色体结构异常47例.数目异常21例.男性假两性畸形女性化综合征1例.染色体多态性156例,检出率8.58%.结论女性染色体异常和染色体多态性与不孕不育密切相关,加强对育龄期女性遗传学筛查工作十分必要.