扩张床吸附技术及其在生物化工中的应用

扩张床吸附（EBA）技术是近年来出现的一种生物化工分离纯化技术。它将固液分离、吸附分离、浓缩等集成为一个过程，简化了纯化工艺，有效地提高了产品回收率，是一项应用前景广阔的生物化工新技术。本文介绍这项技术的原理、设备和应用情况。

膨胀床吸附高效纯化牛血红蛋白

探索了将膨胀床吸附层析应用于动物血液蛋白质的提取 ,尝试了直接从牛血红细胞破碎液中纯化血红蛋白 .对该过程采用的吸附介质及 pH值、离子强度、温度、洗脱条件等因素对高铁血红蛋白生成、产品纯度以及回收率等的影响进行探索 .选择了最佳吸附介质StreamlineSP ,确定了优化的吸附条件为 :吸附过程选用离子强度为 10mmol·L-1的磷酸盐缓冲系统 ,进料线流速 3 3cm·min-1,进料 pH值 6 6 ,改变缓冲液pH值为 7 2进行洗脱 ,操作温度 4℃ .该技术省去了离心去除碎片步骤 ,有效地控制了纯化过程中无载氧能力的高铁血红蛋白的生成 ,动态吸附容量达到 70～ 75mg·ml-1,只经一步操作产品纯度达电泳纯 ,高铁血红蛋白含量仅为5 4 % .与现有的膜过滤 -层析纯化方法相比 ,膨胀床吸附法操作时间短 ,提取收率高 ,产品活性损失小 ,是一种简捷、高效。

聚乙二醇存在下的离子交换层析纯化重组人肿瘤坏死因子

采用离子交换层析纯化了大肠杆菌表达的重组人肿瘤坏死因子（rhTNF－α），考察了PEG在离子交换层析中的作用，包括PEG分子量和浓度等的影响，初步探索了PEG和蛋白质相互作用机理。少量残余的杂蛋白继以疏水相互作用层析除去，获得了比活性为3．21×107u·mg-1的rhTNF－α，纯化倍数为253，总回收率为91．3％。

扩张床吸附直接从牛血中快速分离牛血清白蛋白

目的研究扩张床吸附技术直接从牛血中快速分离血浆蛋白。方法用葡萄糖等张液与牛血按4∶1混合,混合液的渗透压在2 80～30 0mOsmo范围内,与血浆的总渗透压相近;pH值降至6 .8,黏度从全血4 .7mPa·s降至1.0mPa·s以下,再用扩张床StreamlineDEAE对血浆蛋白进行吸附洗脱。结果扩张床洗脱液中单体牛血清白蛋白(BSA)的纯度接近70 % ,全血进料时血浆蛋白吸附容量为纯BSA进料的2 1.4 4 %。结论扩张床技术直接从未经固液分离的牛血血浆中分离BSA ,只经一步操作。

分离纯化中蛋白质的不稳定性及其对策

分离纯化出高纯度有生物活性的蛋白质一直是一项艰巨的工作。在基因工程药物蛋白质的生产中 ,收率低和纯度低是亟待解决的关键问题。这里除了生物组份复杂、难以分离外 ,许多目标蛋白质自身活性的丧失也是一个重要原因。由于药物蛋白质昂贵的市场价格 ,回收率稍有提高就有可能带来巨大的经济效益 ,所以 ,有关蛋白质在分离纯化中的失活及其对策在近年来受到了极大的关注。 1997年第十届欧洲生物技术大会上 ,蛋白质的稳定被单独列为一个专题。 1999年在加拿大召开的第九届生物产品回收技术会议也对蛋白质的稳定性进行讨论。目前重点探索的是蛋白质失活的机制 ,采取相应的对策以保护活性 ,并在分离纯化中采用高效的分离纯化技术缩短操作周期 ,提高产物的活性回收率。