大黄素诱导白血病K562细胞凋亡的实验研究

目的:探讨大黄素对人白血病K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用。方法:采用MTT法检测大黄素对K562细胞的增殖抑制作用;通过Wight-Giemsa染色(W-G染色),在普通光镜下观察细胞的形态学变化;运用AnnexinV/PI双标记法检测大黄素对K562细胞的凋亡效应;采用流式细胞技术检测细胞周期变化与凋亡情况;通过比色法检测Caspase-3、8、9的相对活性,分析大黄素诱导K562细胞凋亡的信号途径。结果:大黄素能显著抑制K562细胞的增殖,作用24、48、72h后的半数抑制率浓度分别为80、50、40μmol/L;处理组细胞在普通光镜下可见典型的凋亡形态学改变;AnnexinV/PI双标记法检测到K562细胞在大黄素的诱导下出现早期凋亡并呈剂量依赖性(P<0.01);流式细胞仪结果分析发现,处理组的K562细胞被阻滞于G0/G1期,与对照组相比,凋亡率明显升高并呈现剂量依赖性(P<0.01);大黄素可触发Caspase-3、8、9的活性增高(P<0.01)。结论:大黄素能有效地抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制和Caspase信号途径的活化有关。

大黄素诱导白血病K562细胞凋亡及对Caspase-3基因表达的影响

目的:探讨大黄素对人白血病K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用.方法:采用四唑蓝比色试验(MTT)检测大黄素对K562细胞的增殖抑制作用;通过电子显微镜观察细胞的形态学变化;运用原位缺口末端标记技术检测大黄素对K562细胞的凋亡效应;采用流式细胞技术检测细胞周期变化与凋亡情况;通过比色法检测Caspase-3的相对活性,RT-PCR检测细胞内凋亡相关基因Caspase-3的转录水平.结果:大黄素能显著抑制K562细胞的增殖,作用24,72 h后的半数抑制率浓度分别为80,40μmol/L;处理组细胞可见典型的凋亡形态学改变;TUNEL法检测到K562细胞在大黄素的诱导下出现凋亡;流式细胞仪结果分析发现,处理组的K562细胞被阻滞于G0/G1期,与对照组相比,凋亡率明显升高并呈现时间-剂量依赖性(P<0.01);大黄素可触发Caspase-3的活性增高(P<0.01),并呈现剂量依赖性;RT-PCR结果显示,Caspase-3mRNA表达上调.结论:大黄素能有效地抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,可能与Caspase-3活化有关.

蒙特卡洛模拟评价万古霉素治疗金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌引起血流感染的给药方案

目的 利用蒙特卡洛模拟评价万古霉素治疗金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌引起血流感染的合理性。方法 由全国血流感染细菌耐药监测联盟(BRICS)收集全血标本中分离的1438株金黄色葡萄球菌和409株表皮葡萄球菌,采用微量肉汤稀释法对分离的菌株进行最低抑菌浓度(minimum inhibitoryconcentration,MIC)的测定。万古霉素4种给药方案分别为500mg q6 h、1000 mg q12 h、1500 mg q12 h和2000 mg q12 h。通过蒙特卡洛模拟10000例次后,获得4种给药方案的fAUC/MIC达标概率(probability of target attainment,PTA)和累计反应分数(cumulative fraction of response,CFR)。CFR≥90%时的给药方案是经验性用药的最佳选择。结果 当对葡萄球菌MIC≤0.5 mg/L时,万古霉素4种给药方案fAUC/MIC均可达到满意的抗菌活性(PTA=100%),当MIC=1 mg/L时,1500 mg q12 h和2000 mg q12 h两种给药方案可达到目标PTA。万古霉素给药剂量500 mg q6 h、1000 mg q12 h、1500 mg q12 h、2000 mg q12 h对金黄色葡萄球菌的fAUC/MIC CFR分别为83%、83%、87%和98%;对应表皮葡萄球菌的CFR分别为53%、53%、59%和92%。结论 万古霉素用于因金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌引起的血流感染时,应根据MIC值的不同而选择不同的给药剂量进行治疗,经验性选择万古霉素进行抗感染治疗时,给药剂量需达到2000 mg q12 h方能达到较好的抗菌效果。

核受体介导细胞增殖分化与凋亡的作用机制研究进展

核受体是配体依赖性的转录因子,广泛存在于细胞内,主要分为激素类核受体与孤儿核受体。它们与机体的生长发育,细胞的增殖、分化与凋亡,以及体内众多生理、物质代谢及肿瘤形成过程中基因表达的调控有很大关系。现就核受体介导细胞增殖、分化与凋亡的作用机制研究进展做一综述。

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌基因检测及其同源性分析

目的探讨临床分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯耐药机制,并进行同源性分析研究。方法用软件WHONET 5.6对连云港第一人民医院临床分离标本筛选出29株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行耐药率统计分析;采用表型筛选试验对试验菌进行产A、B类碳青霉烯酶筛选;PCR法扩增确认相应的碳青霉烯酶酶型基因,目的产物经基因测序和BLAST网上比对确定其基因型;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析29株试验菌的同源性。选取其中6株菌作多位点序列分型(MLST)。结果 29株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物均表现出高耐药性;碳青霉烯酶表型筛选试验全部呈阳性,28株测出相应的A、B类碳青霉烯酶型,另一株未测出酶型;28株筛选试验测出A、B类酶型的菌株中26株产A类碳青霉烯酶,经PCR确定酶基因型均为KPC-2型,2株产B类金属酶,经PCR确定一株基因型为NDM-1,一株基因型为VIM-2,未测出酶型的一株菌未扩增出A、B类相关基因;29株试验菌PFGE分型结果分为3群,26株产KPC-2型碳青霉烯酶的菌株为同一群,其中17株属于同一型。选取的6株做MLST分型的菌株,MLST分型结果均属于ST11型。结论连云港第一人民医院分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌主要机制为产碳青霉烯酶,以产KPC-2型碳青霉烯酶为主,同时有VIM-2和NDM-1型碳青霉烯酶的检出。PFGE和MLST分析结果表明:该院存在着耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的克隆传播,临床上应严格做好耐药菌的防控工作,避免耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌医院感染暴发流行。

带核定位信号的RARα与谷氨酸氨连接酶蛋白相互作用的胞内外验证

目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活细胞内的相互作用;通过构建GLUL及NLS-RARα蛋白标签融合表达载体,共转染至人胚肾HEK293细胞,利用免疫共沉淀技术在细胞外验证它们之间的相互作用。结果 GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色的阳性克隆;GLUL蛋白及NLS-RARα标签融合表达载体构建成功,共同转染至HEK293细胞,采用抗HA多克隆抗体免疫沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,抗c-Myc单克隆抗体免疫印迹检测,检测到GLUL-cMyc蛋白。结论采用酵母双杂交和免疫共沉淀技术成功地在胞内外验证了GLUL与NLS-RARα之间存在特异性的相互作用。

JTV1对K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的观察上调JTV1基因的表达对人白血病K562细胞系增殖与凋亡的影响并探讨其机制。方法将携带有JTV1基因的pcDNA3.1-JTV1载体转染人K562细胞作为阳性转染组,转染pcDNA3.1空载体作为空载体转染组,未转染的K562细胞为未转染组。通过集落形成实验检测各组K562细胞的增殖能力,采用流式细胞术与Annexin-PI双染色结合分析细胞周期和细胞凋亡率,同时采用RT-PCR法检测JTV1基因及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc mRNA水平的变化,采用Western blotting检测基因JTV1及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc蛋白水平的变化。结果集落形成实验结果显示上调JTV1基因表达后K562细胞的增殖能力明显降低。流式细胞术与Annexin-PI双染色检测结果显示,与空载体转染组及未转染组相比,阳性转染组K562细胞的G期细胞比例明显升高(P<0.05);阳性转染组中Bax基因的mRNA水平和蛋白水平较空载体转染组及未转染组均明显上升,而Bcl-2基因和C-myc基因的mRNA水平和蛋白水平则明显下调(P<0.05)。结论 JTV1基因过表达可能通过抑制基因Bcl-2和C-myc的表达增强基因Bax的表达,从而抑制K562细胞系的增殖并促进其凋亡。

地塞米松衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

A new dexamethasone derivative of 9-fluoro-16α-methyl-11,17-dihydroxy-3-oxo-1,4-androsladiene-17β-carboxylic acid from dexamethasone is synthesized by oxidization with periodic acid. The physicochemical property of the new derivative is identified with routine methods. Its structure is characterized by 1H NMR,13C NMR and ESI-MS spectra. The effect of the new derivative on K562 cell proliferation was detected by MTT, as well as the cell cycle by flow cytometry.The result show that the dexamethasone derivative had anti-tumor activities of K562 cell proliferation inhibition and cell cycle arresting from G0/G1 to S phase.

耐碳青霉烯类黏质沙雷菌感染与定植的危险因素

目的了解耐碳青霉烯类黏质沙雷菌检出情况,分析耐碳青霉烯类黏质沙雷菌感染与定植的危险因素。方法选取2014年1月—2016年12月某院送检标本中分离出黏质沙雷菌的患者为研究对象。分离出耐碳青霉烯类黏质沙雷菌的患者为病例组,分离出碳青霉烯类敏感黏质沙雷菌的患者为对照组。回顾性调查患者病历资料,对相关因素进行单因素及logistic回归分析。结果共有120例患者分离出黏质沙雷菌。其中病例组患者38例,对照组患者82例。耐碳青霉烯类黏质沙雷菌中32株分离自痰,占84.2%;碳青霉烯类敏感黏质沙雷菌中61株分离自痰,占74.4%。单因素分析显示,患者有低蛋白血症、呼吸衰竭、接受气管插管或切开和血管内置管、两周内碳青霉烯和氟喹诺酮类抗菌药物使用史和ICU入住史是耐碳青霉烯类黏质沙雷菌感染与定植的危险因素(均P<0.05)。多因素分析结果表明,低蛋白血症和两周内使用过碳青霉烯类抗生素是耐碳青霉烯类黏质沙雷菌感染与定植的独立危险因素(P<0.05)。结论耐碳青霉烯类黏质沙雷菌的感染和定植与多种因素有关,低蛋白血症和两周内使用过碳青霉烯类抗生素是其独立危险因素。

地塞米松的结构改造及对K562细胞增殖抑制的初步研究

目的:通过对地塞米松进行结构改造,探寻具有更高生物活性的新化合物.方法:以地塞米松为原料,通过氧化反应对其侧链进行结构改造,并采用1H NMR,13C NMR及ESI-MS对其进行结构表征.通过MTT比色法检测新化合物对K562细胞增殖的影响.结果:地塞米松经氧化反应后,改构为预期的新化合物.新化合物具有抑制K562细胞增殖的生物活性.在5及10mg/L时,抑制率分别为9.64%±0.27%和22.75%±0.35%,高于地塞米松(P<0.01).结论:地塞米松经结构改造为新化合物.新化合物在低浓度时对K562细胞具有较好的抑制活性.

连云港地区6家三级医院2015—2020年细菌耐药性监测

目的 了解连云港地区临床分离菌耐药状况和耐药变化趋势,为本地区细菌耐药的防控和抗菌药物使用提供依据。方法收集该地区6家三级医院2015—2020年6年中临床分离菌药敏数据,依据保留每例患者每种细菌第一株的原则,剔除重复菌株后,用WHONET5.6软件进行统计分析,药敏标准采用美国临床和实验室标准化协会(CLSI)2018年标准。结果 6家三级医院2015—2020年6年中共分离非重复株细菌36953株,来自32446份临床标本。其中革兰阴性菌27021株(占73.2%),革兰阳性菌9932株(占26.9%),占前五位的分离菌为大肠埃希菌(7644株占20.7%),克雷伯菌属(主要为肺炎克雷伯菌6376株占17.3%),铜绿假单胞菌(4651株占12.6%),不动杆菌(主要为鲍曼不动杆菌3790株占10.3%),金黄色葡萄球菌(3105株占8.4%)。革兰阳性球菌中葡萄球菌属耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)6年总的分离率为46.7%,耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)总的分离率为76.3%,MRSA的分离率6年间呈下降趋势,而MRCNS的分离率呈上升趋势,同时有少量利奈唑胺耐药凝固酶阴性葡萄球菌检出,未检出耐万古霉素葡萄球菌。肠球菌中屎肠球菌和粪肠球菌的比例分别为54%和40%,而两者对万古霉素的耐药率均为0.3%。肺炎链球菌的青霉素耐药率成人和儿童之间相差不大,均在3%左右。阴性杆菌中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对三代头孢菌素类药物的耐药率呈逐年下降趋势,分别从2015年的68.7%和57.7%下降到2020年的54.5%和46.8%,而大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物的耐药率一直维持在高位(64.%~70.1%),6年变化不大。耐碳青霉烯肠杆菌(CRE)分离率快速上升,由2015的6.0%上升到2020年的12.6%,主要是由于耐碳青霉烯的肺炎克雷伯菌(CRKP)分离率的快速增加,CRKP的分离率由2015的11.1%上升到2020年的22.5%。铜绿假单胞菌对检测的抗菌药物的耐药率在4.8%~30%之间,其中对阿米卡星的耐药率最低(4.8%),对亚胺培南的耐药率最高(29.7%),6年间,耐碳青霉烯铜绿假单胞菌分离率逐年降低。而鲍曼不动杆菌对除了替加环素外的抗菌药物均表现高耐药,对碳青霉烯类药物总的耐药率为74.3%,6年间变化不大。结论 2015—2020年连云港市细菌耐药情况总体相对平稳,MRSA和耐三代头孢菌素类药物的肠杆菌的分离率呈下降趋势,但CRE特别是CRKP的分离率增长较快且呈上升趋势。大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物高耐药和鲍曼不动杆菌的泛耐药等问题需要引起足够的警惕和关注,应持续做好细菌耐药监测工作,为抗菌药物的合理使用、遏制细菌耐药和耐药传播提供依据。

地塞米松对K562细胞增殖抑制作用及诱导凋亡机制的研究

目的:研究地塞米松对K562细胞的增殖抑制作用及诱导细胞凋亡的机制。方法:用不同浓度的地塞米松对K562细胞进行处理,检测细胞增殖抑制率,观察细胞凋亡的形态学变化,测定细胞端粒酶活性,Fas表达及NO产生情况。结果:地塞米松能抑制K562细胞的增殖,降低端粒酶活性,使Fas表达上调,诱导细胞凋亡。但对NO的生成不具有显著性差异。结论:地塞米松可能通过抑制端粒酶的活性而诱导K562细胞的凋亡。同时,Fas也可能参与了凋亡的调节。

地塞米松衍生物对K562细胞增殖的抑制作用及机制

目的:研究地塞米松衍生物对K562细胞的增殖抑制作用,并对其作用机制进行初步的探讨。方法:以地塞米松为原料合成并纯化得到新的衍生物。用不同浓度的地塞米松衍生物对K562细胞进行处理,通过MTT比色法检测细胞增殖抑制率,电镜法观察细胞凋亡的形态学变化,免疫细胞化学法测定细胞Bcl-2,Fas表达,比色法检测Caspase-3的活性变化。结果:地塞米松衍生物能抑制K562细胞的增殖,使Bcl-2表达降低,Fas表达上调,Caspase-3活性增强,诱导K562细胞凋亡。结论:地塞米松衍生物可能通过诱导K562细胞凋亡而抑制细胞增殖。其诱导细胞凋亡的机制可能与抑制Bcl-2蛋白的表达,上调Fas受体,进而激活细胞内的Caspase-3有关。

某院肠杆菌科细菌耐药性与抗菌药物使用强度时间相关性分析

目的探讨肠杆菌科细菌耐药性与抗菌药物使用强度时间相关性,为优化抗菌药物临床选用提供依据。方法采用回顾性调查方法,统计连云港市第一人民医院2016年1月至2021年12月期间住院患者各类标本中检出肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌对哌拉西林/他唑巴坦、美罗培南以及亚胺培南耐药率和同期β‐内酰胺酶复合制剂、碳青霉烯类抗菌药物使用强度。采用线性回归分析抗菌药物季度使用强度和细菌季度耐药率变化趋势,运用互相关函数分析抗菌药物季度使用强度与细菌季度耐药率之间时间相关性。结果6年期间肺炎克雷伯菌对哌拉西林/他唑巴坦(P<0.001)、美罗培南(P=0.001)耐药率均呈上升趋势,大肠埃希菌对哌拉西林/他唑巴坦耐药率逐渐下降(P<0.001)。研究期间碳青霉烯类抗菌药物使用强度呈上升趋势(P=0.008),β-内酰胺酶复合制剂类抗菌药物使用强度呈下降趋势(P=0.032)。肺炎克雷伯菌对哌拉西林/他唑巴坦耐药率与碳青霉烯类抗菌药物使用强度高度同步(r=0.812,Lag=0,P=0.022),对美罗培南(r=0.704,Lag=1,P=0.037)和亚胺培南(r=0.885,Lag=1,P=0.005)耐药率与碳青霉烯类抗菌药物使用强度均呈显著正相关。β-内酰胺酶复合制剂类抗菌药物使用强度与大肠埃希菌(r=0.587,Lag=3,P=0.045)和肺炎克雷伯菌(r=0.531,Lag=2,P=0.039)对哌拉西林/他唑巴坦耐药率均呈正相关。结论医院肠杆菌科细菌耐药率与抗菌药物使用强度存在一定时间相关性,临床应优化抗菌药物合理选用,遏制肠杆菌科细菌耐药性进展。

活细胞内筛选地塞米松衍生物作用靶蛋白的研究

背景与目的:地塞米松衍生物(9-氟-16α-甲基11β,17-二羟基-3-氧-1,4-雄二烯-17β-羧酸)具有优于地塞米松的抗肿瘤活性,为探讨其抗肿瘤机制,本研究利用酵母三杂交技术在活细胞内筛选与之相互作用的靶蛋白。方法:构建诱饵质粒pGBKT7-GRα-LBD,利用酵母三杂交技术从人K562细胞cDNA文库中筛选与地塞米松衍生物相互作用的靶蛋白。结果:诱饵质粒成功构建,经Western blot分析可表达约31ku的诱饵蛋白,且诱饵蛋白没有毒性、渗漏和自激活现象。利用酵母三杂交技术从人K562细胞cDNA文库中筛选到37个能与地塞米松衍生物相互作用的蛋白质,并经酵母回转实验验证,得到20个真阳性克隆。结论:通过酵母三杂交技术在活细胞内筛选到20个与地塞米松衍生物有相互作用的蛋白。

人K562细胞糖皮质激素受体基因阻断模型的建立

目的利用腺病毒载体介导的RNAi技术,建立糖皮质激素受体基因阻断的人K562细胞模型。方法将针对糖皮质激素受体发挥RNAi效应的合成寡核苷酸序列连入含有绿色荧光蛋白基因的腺病毒穿梭质粒pRNAT-H1·1/Adeno中,在含有pAdEasy-I病毒骨架的BJ5183大肠菌内进行同源重组;重组体通过脂质体介导转染293T细胞,并在293细胞内包装为具有感染能力的病毒颗粒,通过反复感染扩增病毒以达感染靶细胞的适当滴度,通过绿色荧光表达来监测腺病毒扩增;应用Western blot法检测人K562细胞感染病毒后糖皮质激素受体蛋白的表达。结果重组腺病毒穿梭质粒psiGR/Adeno和重组腺病毒pAdEasy-siGR的成功构建;转染腺病毒载体的293T细胞表达绿色荧光,随着时间逐渐增强并且出现明显的细胞病变效应,经过3轮扩增,病毒达到合适的滴度;受腺病毒感染的K562细胞内糖皮质激素受体蛋白表达明显降低。结论可以成功构建针对糖皮质激素受体基因的RNAi腺病毒载体,为进一步研究糖皮质激素受体的生物学功能奠定基础。

人HL-60细胞GR-αLBD诱饵表达载体的构建和鉴定

目的:构建糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)受体α配体结合域(GRα-LBD)的诱饵表达载体,为小分子配体酵母三杂交系统的建立奠定基础。方法:RT-PCR扩增HL-60细胞的GRα-LBD,克隆入诱饵载体pGBKT7中,测序正确后,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-GRα-LBD转化到酵母AH109细胞中,提取酵母蛋白,并用Western blot分析诱饵蛋白的表达情况。同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用。结果:成功扩增了GRα-LBD,并成功亚克隆到pGBKT7中,测序结果正确。诱饵载体成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot分析也证实了酵母细胞高表达诱饵蛋白。结论:成功构建了GRα-LBD酵母诱饵表达载体,为建立小分子配体酵母三杂交系统奠定了基础。

糖皮质激素受体结合域诱饵表达载体的构建及鉴定

目的构建糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)结合域的诱饵表达载体。方法RT-PCR扩增GR结合域,克隆入pMD18-T,测序正确后,再亚克隆入诱饵载体pGBKT7中,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-GR转化到酵母AH109细胞中,并用Western blot分析诱饵蛋白的表达情况,同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用。结果成功扩增了GR结合域,并分别成功克隆到pMD18-T和pGBKT7中,测序结果正确。诱饵载体成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot分析结果也证实了酵母细胞高表达诱饵蛋白。结论成功构建了GR结合域的酵母诱饵表达载体。

酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-PML-V的构建、表达及鉴定

目的:构建早幼粒细胞白血病基因变异蛋白(Promyelocytic leukemia,PML-V)的诱饵表达载体,为应用酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system)筛选与PML-V相互作用的蛋白建立实验基础。方法:PCR扩增PML-V,克隆入诱饵载体pGBKT7中,经测序鉴定后,将构建好的诱饵载体pGBKT7-PML-V转化到酵母细胞AH109中,并利用蛋白印迹法(Western Blotting)分析诱饵蛋白的表达情况。同时检测诱饵蛋白有无毒性、渗漏和自激活作用。结果:成功扩增了PML-V基因片断,并克隆入pGBKT7中,测序结果正确。诱饵载体成功转化到酵母细胞AH109中,诱饵蛋白无毒性、渗漏和自激活作用,Western Blotting分析证实酵母细胞表达诱饵蛋白。结论:成功构建了PML-V结合域的酵母诱饵表达载体,为进一步运用酵母双杂交技术筛选与之相互作用的蛋白奠定了基础。

Survivin基因诱饵表达载体的构建和鉴定

目的构建Survivin基因诱饵表达载体,为建立酵母双杂交系统筛选Survivin蛋白靶蛋白奠定基础。方法从人K562细胞中提取总RNA作为模板,逆转录得到Survivin cDNA,通过特异引物扩增Survivin基因的ORF区,然后与诱饵表达载体pGBKT7连接,构建诱饵表达载体pGBKT7-Survivin,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-Survivin转化到酵母AH109细胞中,并用Western blot分析诱饵蛋白的表达情况。同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用。结果成功扩增了Survivin基因的ORF区,并成功将其克隆到诱饵表达载体pGBKT7中,测序结果正确。诱饵载体成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Westernblot分析证实了酵母细胞高表达诱饵蛋白。结论成功构建了Survivin基因的ORF区的酵母诱饵表达载体,为建立酵母双杂交系统筛选Survivin蛋白靶蛋白奠定基础。