miR-322-5p靶向Akt3抑制Th17分化对干扰素β干预实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响

目的·探讨miR-322-5p靶向Akt3抑制Th17分化对干扰素β(interferon-β,IFN-β)干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的影响。方法·建立EAE小鼠模型,设IFN-β干预组和PBS对照组。流式染色比较2组Th17的比例变化;RNA芯片检测2组小鼠miRNA的差异表达,筛选出miR-322-5p做进一步研究;软件预测miR-322-5p的靶基因为Akt3;IFN-β干预后和过表达miR-322-5p后检测Akt3的表达水平;双荧光素酶报告实验验证miR-322-5p和Akt3的直接靶向关系;体外实验观察Akt3对Th17细胞分化的影响。结果·IFN-β干预组的EAE小鼠Th17比例均显著降低,miR-322-5p的表达显著升高,而Akt3的表达明显降低;过表达miR-322-5p能显著抑制Akt3的表达,双荧光素酶报告实验显示Akt3是miR-322-5p的直接靶基因,且Akt3对Th17的体外分化有明显促进作用。结论·IFN-β可通过影响miR-322-5p靶向Akt3,进而抑制Th17分化来缓解EAE的疾病进程。

类风湿关节炎患者B细胞亚群分析及表没食子儿茶素没食子酸酯对B细胞亚群的影响

目的·探讨类风湿关节炎(rhumatoid arthritis,RA)患者B细胞亚群特点及表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)对RA患者B细胞亚群的调节作用。方法·纳入年龄、性别匹配的RA患者和健康对照各29例,运用配对t检验分析2组外周血中B细胞亚群的差异;根据28关节疾病活动评分(disease activity score in 28 joints,DAS28)的值将RA患者分为活动组(2.6≤DAS28<5.1)和高度活动组(DAS28≥5.1),运用t检验分析2组外周血中B细胞亚群的差异。在0、10、100μmol/L EGCG和2.5μg/L葡萄球菌A蛋白共刺激条件下,体外培养RA患者外周血单个核细胞,24 h后应用实时聚合酶链反应检测B细胞活化因子受体(B-cell-activating factor receptor,BAFF-R)的表达水平,48 h后用流式细胞术检测B细胞亚群。结果·RA患者的总B细胞、未分化B细胞、记忆B细胞和浆母细胞占淋巴细胞比例和数量均高于健康对照(P<0.05),而CD19^+IL-10^+调节性B细胞(regulatory B cell,Breg)占淋巴细胞比例和数量与健康对照相比差异无统计学意义(P>0.05)。10例活动组与19例高度活动组RA患者的总B细胞及各B细胞亚群(除CD19^+IL-10^+Breg外)占淋巴细胞比例和数量的差异无统计学意义(P>0.05),6例活动组与12例高度活动组RA患者CD19^+IL-10^+Breg占淋巴细胞比例和数量的差异也无统计学意义(P>0.05)。RA患者外周血总B细胞所占比例与IgG型类风湿因子呈弱正相关(r=0.308)。EGCG能显著提高CD19^+IL-10^+Breg占淋巴细胞比例(P<0.05),且100μmol/L EGCG能显著降低总B细胞中BAFF-R mRNA的表达水平(P=0.000);但其对未分化B细胞、记忆B细胞和浆母细胞占淋巴细胞比例无显著影响(P>0.05)。结论·B细胞可能在RA发病中发挥辅助作用,RA患者CD19+IL-10+Breg数量反馈性增加,EGCG可促进Breg增殖,降低BAFF-R mRNA表达水平。

阳离子脂质体Lipofectamine 3000对贴壁细胞、悬浮细胞和原代细胞转染效率比较的研究

为了比较阳离子脂质体Lipofectamine 3000(Lipo3000)在不同细胞类型中的转染效率,课题组分别在贴壁细胞NIH3T3、悬浮细胞EL4和原代细胞CD4+T细胞中,利用Lipo3000将不同浓度的miRNA mimics转染至细胞内,通过流式细胞术检测的方法,比较不同细胞之间以及同一细胞、不同浓度的miRNA mimics组之间转染效率的差异。结果显示,在NIH3T3细胞中,miRNA mimics为100nmol/L时,转染效率最高,可达(41.47±8.10)%;而在EL4和CD4+T细胞中,随着miRNA mimics浓度的增加,转染效率呈上升的趋势,最高分别可达(12.13±1.16)%和(3.80±0.60)%。可见,Lipo3000在贴壁细胞和悬浮细胞的转染效率明显高于原代细胞。

miRNA在自身免疫病中对趋化作用调控的研究进展

miRNA是一类分子长度为20~24个核苷酸的微小RNA,通常在转录后水平调控靶基因的降解或抑制翻译。趋化因子是具有趋化吸引性的蛋白质,而免疫细胞可以表达不同的趋化因子受体,因此趋化因子能够吸引免疫细胞到达炎症部位,参与自身免疫病的发生和发展。越来越多的证据显示miRNA在自身免疫病中发挥重要作用,文章将对目前已知的miRNA在自身免疫病中对趋化作用的调控的研究进展作一综述。

青藤碱联合甲氨蝶呤治疗早期类风湿关节炎的疗效及对患者MMP-3、RANKL/OPG表达的影响

目的:观察青藤碱(SIN)联合甲氨蝶呤(MTX)治疗早期类风湿关节炎(RA)的疗效及对患者血清基质金属蛋白酶3(MMP-3)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)/骨保护素(OPG)表达的影响。方法:纳入68例早期RA患者,按照随机数字表分为治疗组和对照组,每组各34例。对照组患者给予MTX治疗,治疗组患者给予MTX联合SIN治疗,两组疗程均为12周。采用美国风湿病学会(American College of Rheumatology,ACR)20、50、70标准评价两组患者的临床疗效,检测患者的类风湿因子(RF)、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)及血清MMP-3、OPG、RANKL表达水平。结果:治疗后,治疗组的ACR 20、50、70达标率分别为76.7%、40.0%、3.3%,对照组分别为34.5%、20.7%、6.9%,治疗组的ACR 20达标率显著高于对照组(P<0.01)。治疗后,治疗组患者的RF、ESR、CRP水平均降低(P<0.01),对照组患者的RF、ESR、CRP水平与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05);且两组患者的ESR、CRP、RF水平治疗前后差值比较,差异均有统计学意义(P<0.01),治疗组患者上述指标的改善优于对照组。治疗后,治疗组患者的MMP-3、RANKL水平降低(P<0.01,P<0.05),OPG水平和OPG/RANKL比值升高(P<0.01,P<0.05);对照组患者的MMP-3水平亦降低(P<0.05);且两组患者的OPG、RANKL水平及OPG/RANKL比值治疗前后差值比较,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05),治疗组患者上述指标的改善优于对照组。结论:SIN联合MTX可改善早期RA患者的临床症状,调控MMP-3及RANKL/OPG系统,这可能是其抑制骨侵蚀、促进骨保护的机制之一。

青藤碱治疗类风湿关节炎抑制骨破坏研究进展

以反复发作的滑膜炎及继发引起的关节不可逆性破坏为特征的系统性自身免疫性疾病。青风藤是中医治疗痹症的常用药,具有抗炎、镇痛、免疫抑制等药理作用。青藤碱是从青风藤提取精制而成的现代中药制剂,在临床和实验中广泛应用。以下是青藤碱在抑制类风湿关节炎骨破坏的临床、基础方面的简要综述。