冷原子吸收法检测硫柳汞含量

目的应用冷原子吸收法检测硫柳汞含量。方法将硫柳汞消化还原成汞蒸汽,经测汞仪检测。结果用该方法制备标准曲线具有很好的相关性,相关系数r(n=10)为0.9997±0.0002。样品重复检测10次,平均变异系数为1.03%,回收率为96.0%。与双硫腙滴定法检测结果进行比较,差异无显著意义。结论此法可作为硫柳汞含量检测的常规方法。

水痘-带状疱疹病毒gE糖蛋白基因扩增法鉴别水痘减毒活疫苗

目的利用水痘-带状疱疹病毒(VZV)gE糖蛋白基因鉴别水痘减毒活疫苗。方法以提取的病毒DNA为模板,PCR扩增gE糖蛋白基因。经琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果水痘减毒活疫苗Oka株VZV(病毒滴度≥2.0lgPFU/ml)通过琼脂糖电泳均可见特异性的条带。使用同样的方法检测麻疹减毒活疫苗、麻疹-腮腺炎联合疫苗、风疹减毒活疫苗以及Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒(病毒滴度≥4.2lgCCID50/ml),结果均为阴性。结论gE糖蛋白基因可以作为VZV的特异性指标,进行病毒鉴别试验。

一种检测药品致热物质的新型鲎试剂

为了人血白蛋白、精制破伤风抗毒素、A群脑膜炎球菌多糖菌苗临床应用或人体接种的安全性,使用两种鲎试剂通过鲎试验检测热原质.结果表明,一种新型的特异性鲎试剂优于普通鲎试剂,其表现为减少或消除了假阳性反应,与家兔热原质试验阴性结果相符.因此,使用新型鲎试剂有望扩大我国药品以细菌内毒素检查法代替家兔热原质检测试验的品种,使中国药典的这一检测标准,能在保障临床用药安全的前提下,早日达到发达国家水平.

单光束测汞仪在生物制品中的应用

本文简要介绍单光束测汞仪在生物制品硫柳汞含量测定中的应用

药用玻璃容器质量现状分析

目的 分析药用玻璃容器质量现状。方法 对药用玻璃容器的内表面耐水性、pH值、规格尺寸、内应力、热稳定性和热震性进行检测。结果 经检测的药用安瓿 ,管制瓶和模制瓶各项指标均符合使用要求。

水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E在CHO细胞中的稳定表达

目的在CHO细胞中稳定表达水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(gE)。方法PCR扩增VZVgE完整胞外结构域编码基因,克隆至哺乳动物细胞表达质粒PSGHVO中,与DHFR选择性基因和脂质体共转染CHO/dhfr-细胞,筛选稳定分泌人生长激素(hGH)和gE融合蛋白的细胞株。采用ELISA和Western blot方法检测细胞培养上清中hGH和gE融合蛋白的表达,并用Ni2+-NTA柱进行纯化。结果gE基因PCR扩增产物和重组表达质粒PSGHVO-gE的双酶切产物经琼脂糖凝胶电泳,均可见1500bp的目的基因条带。转染PSGHVO-gE质粒和DHFR基因的细胞培养上清液经ELISA和Western blot,确认有重组蛋白表达,gE表达量约为20mg/L;纯化后蛋白纯度约为90%。结论已在CHO细胞中稳定表达了VZVgE蛋白,为制备VZV表面抗原奠定了基础。

关于实验动物设施中环境氨气浓度测定方法的探讨

氨浓度是动态实验动物繁育、生产设施环境的重要指标，作者认为现行实验动物环境及设施氨浓度测定方法有诸多不当之处，提出来供商讨：

人免疫球蛋白白喉抗体国家标准品的协作标定

目的协作标定人免疫球蛋白白喉抗体国家标准品。方法用世界卫生组织提供的白喉抗毒素国际标准品(批号:9897/762)为标准,采用被动血凝法标定我国人免疫球蛋白白喉抗体国家标准品,将待标品按标示量加水溶解后,置于4℃保存6个月和将冻干待标品分别置于4,25,37℃保存6个月,进行稳定性考查。结果人免疫球蛋白白喉抗体国家标准品的效价为0.4 HAU/支,稳定性好,其他项目符合国家标准品要求。结论该批冻干人免疫球蛋白白喉抗体国家标准品可取代上批国家标准品。

第一代无细胞百日咳疫苗毒性国家参考品制备工艺的研究

目的筛选无细胞百日咳疫苗毒性国家参考品的最佳生产工艺。方法选用百日咳CS菌株(编号58003),对不同的培养方式进行比较研究,选择最佳毒性国家参考品的生产工艺。结果该参考品经过不同培养方式比较后,确定了最终生产工艺,将培养的百日咳菌加入保护剂后分装制备成冻干品。结论该生产工艺制备的样品含有较强的毒性,同时能进行规模生产,满足了毒性国家参考品各项检测指标的要求。

第二批人凝血酶国家标准品协作标定

目的协作标定第二批人凝血酶国家标准品。方法用世界卫生组织首批α 凝血酶国际标准品 (批号 :89/ 5 88)为标准 ,采用纤维蛋白原凝固法标定。并将标准品分别于 2 5℃、37℃、4 5℃保存 6个月 ,进行稳定性考查。结果第二批人凝血酶国家标准品的效价为 12 7IU/支 ,稳定性良好 ,其他项目符合国家标准品要求。结论已成功研制第二批人凝酶国家标准品 ,可以取代首批人凝血酶国家标准品。

第5批百日咳疫苗效力国家标准品的建立

目的 建立第 5批百日咳疫苗效力国家标准品。方法 选用百日咳菌株 (编号 5 80 0 4 ) ,采用B G培养基固体培养 ,将培养的百日咳菌液经脱毒灭活后分装冻干。以WHO的效力标准品 # 3和中国效力标准品 # 4为标准进行协作标定。结果 该标准品经 7个实验室协作标定 6 3次 ,最终合并效价为 14IU ml(95 %CI=13 10 9～15 32 0 )。结论 第 5批百日咳疫苗效力标准品各项指标均符合要求 ,可以作为新的国家百日咳效力标准品使用 ,效价拟定为 14IU ml。

抗-HBs国家标准品的研制

目的:协作标定首批冻干抗-HBs 国家标准品。方法:以首批抗-HBs 国际标准品(17—2—77批号)为标准,采用放射免疫法标定我国抗-HBs 国家标准品。结果:国家标准品(人免疫球蛋白)的效价为2.5 IU·支^(-1),抗-HBs 国家标准品(人血浆)的效价为1.3 IU·支^(-1)。将以上标准品按标示量加水溶解后于4℃放置9 d 和将冻干标准品分别置于4,23,45℃保存6个月,进行稳定性考察。研制的首批冻干抗-HBs 国家标准品稳定性良好,其他项目符合国家标准品要求。结论:已制备首批抗-HBs 国家标准品,并获得国家标准品批准文号。

乳杆菌增殖促进剂及其液态长期保存的实验研究

报道乳杆菌增殖促进剂和液态长期保存的实验研究。在试管静止培养中 ,选择了一种人工合成的增殖促进剂 ,该促进剂由多种氨基酸和维生素等组成 ,能使活菌数从 (4 .0± 1.4)× 10 8CFU/ m l升至 (3.45± 2 .8)× 10 1 1 CFU/ ml,提高了 86 2倍。从液态保存的实验结果中可以看到 ,保存 3个月 ,稳定剂保存组活菌数下降不到 1个指数。保存 6个月 ,下降近 2个指数。本工作为乳杆菌的高密度发酵和液态长期保存 ,作出了有意义的探索。

荧光核染色法检查细胞培养物中污染的支原体

本文报道了用荧光染料HOECHST 33258核染色,检查细胞培养物中支原体污染的方法,并将荧光法与电镜及常规培养法进行了比较。荧光法与电镜法的结果基本一致,但荧光法简便、快速、结果可靠、又经济,适用于常规实验室检查细胞培养物中支原体污染用。

流行性感冒病毒裂解疫苗灭活试验探讨

目的进行流行性感冒病毒裂解疫苗的病毒灭活检测,研究病毒灭活状况。方法将单价病毒液接种鸡胚尿囊腔,第二代鸡胚尿囊液检查不应出现血凝反应。结果半成品配制前,200批单价病毒液灭活试验全部通过,单价病毒液中较高的血凝素含量会影响灭活试验的判断。结论试验表明疫苗中无活病毒存在,生产过程中血凝素含量应适当控制。

水痘减毒活疫苗Oka株的传代稳定性

目的观察水痘减毒活疫苗Oka株(V-Oka)的传代稳定性。方法将V-Oka病毒在人二倍体细胞MRC-5上连续传代至50代,观察病毒的培养特性。选择32、34、38、42、46、50代病毒进行病毒滴度测定和鉴别试验,提取病毒DNA,对V-Oka的主要基因(ORF31、ORF62、ORF68、R区)进行PCR扩增和测序,并对序列进行分析。结果 V-Oka连续传代至50代,其培养特性、细胞病变一致,病毒滴度为5.0～5.6LgPFU/ml。与GenBank中登录的V-Oka序列比较,32～50代的V-OkaORF31、ORF62、ORF68、R区序列稳定,并趋于减毒型。结论 V-Oka传代至50代,生物学和分子遗传学特性稳定。

不同方法测定生物制品中硫柳汞含量的比较

目的比较原子吸收分光光度法(简称仪器法)与滴定法测定生物制品中硫柳汞含量的精密性和准确性,为仪器法列入《中国药典》(2010版)提供依据。方法由不同实验室分别采用仪器法与滴定法测定不同硫柳汞含量的样品,并进行精密性和准确性比较。结果不同实验室在测定硫柳汞含量为65.8、25.0及1.5μg/ml的样品时,仪器法的变异系数均小于滴定法,回收率较滴定法更接近100%;在测定硫柳汞含量为100μg/ml的样品时,两种方法回收率均不理想,但仪器法优于滴定法。结论仪器法测定生物制品中硫柳汞含量的精密性和准确性均优于滴定法,但仍需进一步完善。

水痘减毒活疫苗豚鼠异常毒性检查方法的探讨

目的探讨水痘减毒活疫苗(以下简称水痘疫苗)的豚鼠异常毒性检查法。方法按照《中国药典》三部(2010版)规定,对本公司生产的41批水痘疫苗进行豚鼠异常毒性检查;分别对本公司生产的水痘疫苗在不同实验室、4个不同厂家的水痘疫苗、本公司生产的不同批号水痘疫苗及不同体重的豚鼠注射本公司生产的水痘疫苗后进行异常毒性检查。注射前每只豚鼠称重,应为250～350 g。每只豚鼠腹腔注射供试品5.0 ml,观察7 d。结果观察期内,豚鼠全部健存,且无异常反应,到期时每只豚鼠体重均增加。其中,同一实验室的豚鼠在注射同一批水痘疫苗后出现体重增加差异;不同实验室的豚鼠体重增加有差异,每天称重影响豚鼠体重的增加;在注射疫苗后的第1、2天,多数豚鼠体重出现略微下降,随后开始逐渐增加。结论本公司生产的水痘疫苗安全性良好,建议采用清洁级以上的豚鼠进行异常毒性检查,同时规定实验动物的性别和注射前的观察期限,并设立阳性、阴性对照,对生物制品的安全性作出更为合理的评价。

水痘-带状疱疹病毒Oka株与临床分离株可变区基因的序列分析

目的对水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)Oka株(V-Oka株)与分离于临床水痘患者的野毒株进行可变区基因序列比对分析。方法提取V-Oka株和VZV临床分离株的基因组DNA,对其串联重复序列区(R区)进行PCR扩增和测序;将R3基因的纯化产物与pMD18-T载体连接,转化感受态大肠杆菌JM109,提取质粒,经双酶切鉴定及测序;将测序结果与GenBank中登录的V-Oka株基因序列进行比对分析。结果 R1～R5基因扩增产物及R3基因重组质粒的双酶切产物片段大小均与预期相符;V-Oka株较稳定,测序结果与GenBank中登录的V-Oka株R1～R5基因序列一致,野毒株R区序列呈现多态性,与V-Oka株有差异,R4区序列区别明显。结论水痘患者的致病毒株为野毒株;R4的重复单位拷贝数可为临床快速鉴别V-Oka株与野毒株提供科学的手段。

水痘减毒活疫苗Oka株的分子生物学特性 免疫原性及安全性

水痘是由水痘-带状疱疹病毒(VZV)引起的一种高传染性的呼吸道疾病。目前预防接种是控制感染唯一的有效手段。现在使用的是Oka株水痘减毒活疫苗,疫苗Oka株独特的分子生物学活性可能与减毒作用相关。健康和免疫系统受损的个体,在接种Oka株水痘减毒活疫苗后都能产生特异性的体液和细胞介导的免疫应答,并能预防水痘的发生。30余年的临床应用表明该疫苗是安全有效的。